PI3K/AKT信號通路相關蛋白在乳腺癌中的表達及其臨床意義△

劉娟妮 李俊海 白國棟 吳宏培 廖和和陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤科，陜西咸陽712

PI3K/AKT信號通路相關蛋白在乳腺癌中的表達及其臨床意義△

劉娟妮 李俊海 白國棟 吳宏培 廖和和#
陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤科，陜西咸陽7120000

目的研究PI3K/AKT信號轉導通路中PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌中的表達及其與疾病發(fā)生發(fā)展、預后的關系。方法用免疫組化SP法檢測45例乳腺癌患者病理組織（觀察組）和其中15例患者癌旁正常組織（對照組）中PTEN、PI3K、AKT表達情況，采用單因素回歸分析對PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽性表達的相關因素進行分析。結果PI3K、AKT在乳腺癌中的表達率分別為73.3%、75.5%，高于癌旁正常乳腺組織的33.3%、40%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；PTEN在乳腺癌中表達率為22.2%，低于癌旁正常乳腺組織的53.3%，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；單因素回歸分析結果顯示，患者發(fā)病年齡對PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中陽性表達無關（P＞0.05）；組織學分級、臨床分期、存在淋巴結轉移是PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中的陽性表達的相關因素（P＜0.05）。結論PI3K/AKT信號通路可能參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展，PTEN蛋白表達缺失導致AKT、PI3K蛋白的過度表達，PI3K、PTEN、AKT蛋白表達的檢測可能有助于預測乳腺癌的預后。

乳腺腫瘤；PTEN；PI3K；AKT；免疫組織化學

Oncol Prog，2016，14（5）

乳腺癌是我國婦女最常見的惡性腫瘤，是僅次于肺癌的第二位癌癥死亡原因。我國乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，已成為世界上發(fā)病率增長速度最快的國家之一，其發(fā)病率以每年3%～4%的速度遞增［1］。目前研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3 kinases/protein kinase B，PI3K/AKT）信號轉導通路在人類腫瘤譜中存在普遍失調現(xiàn)象，該通路的某些成分突變可導致通路功能改變，從而引起細胞轉化。其不僅可以調節(jié)腫瘤細胞的增殖和存活，還與腫瘤的侵襲轉移密切相關［2］。因此，PI3K/AKT通路成為近年來研究的熱點，以此信號通路中關鍵分子為靶點的乳腺癌治療正在研究中。本研究對PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達情況進行分析，并探討了其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及與臨床預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2010年3月至2013年3月于核工業(yè)二一五醫(yī)院收治的乳腺癌患者45例，收集乳腺癌病理組織45例作為觀察組，并選取其中15例患者的癌旁正常組織作為對照組。入選標準：①手術切除大標本，病理科證實為乳腺癌；②有完整病歷資料；③術前均未行任何放化療；④所有入選患者均簽署知情同意書。排除標準：①患者有嚴重心肺疾病者；②術前行新輔助放化療及靶向治療者。所有患者均為女性，平均年齡54.5歲（34～75歲）；組織學類型：浸潤性導管癌30例，浸潤性小葉癌10例，單純癌3例，髓樣癌2例；臨床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例；伴淋巴結轉移者30例，無淋巴結轉移者15例。

1.2方法與試劑

所有組織標本均經福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，每例制作成4 μm厚的切片以備免疫組化應用，每塊組織的連續(xù)切片中，均取1張留做HE染色對照。采用免疫組化SP法檢測PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達情況。試劑購自北京中杉生物技術有限公司，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。陽性對照用公司提供的已知陽性組織，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.3結果判斷

采用雙盲法，由兩名有經驗的病理科醫(yī)師對免疫組化結果進行判讀。對PTEN、PI3K、AKT蛋白的表達率檢測均以出現(xiàn)背景清晰的棕黃或棕褐色顆粒為陽性。PTEN蛋白和PI3K蛋白表達于細胞質；AKT蛋白主要表達于細胞質，部分表達于細胞核。判定標準，①按陽性細胞的百分比評分：陽性細胞＜25%為0分，26%～50%為1分，51%～75%為2分，＞75%為3分；②按染色強度評分：無顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。結果以陽性細胞比例和陽性強度綜合評分［3］，以二者乘積的得分值＜4分為陰性表達，＞4分為陽性表達。

1.4統(tǒng)計學方法

應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，采用χ2檢驗比較PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達情況，用單因素回歸分析方法對PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中表達的相關因素進行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1 PTEN、PI 3 K、AKT蛋白在乳腺癌和癌旁正常組織中的表達

乳腺癌中PTEN、PI3K、AKT蛋白的陽性表達的典型結果見圖1。PTEN在乳腺癌中陽性表達率為22.2%，低于癌旁正常乳腺組織的53.3%，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；PI3K、AKT在乳腺癌中的陽性表達率分別為73.3%、75.5%，高于癌旁正常乳腺組織的33.3%、40.0%，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。

圖1　PTEN、PI 3 K、AKT蛋白在乳腺癌組織中的典型表達

2.2 PTEN、PI 3 K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽性表達的相關因素分析

單因素回歸分析結果顯示，患者發(fā)病年齡對PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中陽性表達無關（P＞0.05）；組織學分級、臨床分期、存在淋巴結轉移是PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽性表達的相關因素（P＜0.05），詳見表1。

表1　PTENPTEN、PIPI3K K、AKTAKT蛋白在乳腺癌組織中陽性表達的相關因素分析

3　討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，傳統(tǒng)的治療方法包括外科手術、化療、放療及內分泌治療等，目前腫瘤的復發(fā)和轉移是治療的主要挑戰(zhàn)［4-5］。PI3K/AKT是細胞內重要的信號轉導通路，該通路某些成分的突變所致的功能獲得或缺失能夠引起細胞轉化，同時該通路可調節(jié)腫瘤細胞的增殖和存活，與腫瘤的侵襲轉移行為密切相關［6］。PI3K/AKT信號通路在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，然而由于這條通路的復雜性，其基因的變化與臨床病理或其他生物學標志物之間的聯(lián)系仍未明確，需進一步研究可以預測治療反應的生物標志物，以分辨出患者對PI3K/AKT通路阻滯劑的敏感性，從而為乳腺癌患者提供個體化的治療方案［7］。

PTEN在10號染色體上表達，是一種抑癌基因，該基因突變或缺失可發(fā)生在各類腫瘤中，如子宮內膜癌、前列腺癌、小細胞肺癌等［8］。既往研究發(fā)現(xiàn)，臨床上常見PTEN基因的缺失與乳腺癌腦轉移密切相關［9］。PI3K是生長因子受體超家族信號轉導途徑中的一個關鍵分子，其在促進細胞生長，抑制細胞凋亡，維持細胞生存等機制中具有重要作用［10］。

本研究分析乳腺癌中PTEN、PI3K、AKT的表達情況，結果表明PI3K、AKT的過表達和PTEN的低表達與乳腺癌的形成和進展有關，檢測PTEN、PI3K、AKT的表達可用于判定乳腺癌的惡性程度，并可作為判斷乳腺癌預后的指標。另外，單因素回歸分析結果顯示，患者發(fā)病年齡對PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌組織中陽性表達無關（P＞0.05）；組織學分級、臨床分期、存在淋巴結轉移是PTEN、 PI3K、AKT蛋白在乳腺癌組織中陽性表達的相關因素（P＜0.05），這與國內外研究結果相似。學者郭紹文［11］采用免疫組化法對84例乳腺癌組織中PTEN、PI3K、AKT蛋白表達情況研究發(fā)現(xiàn)，與乳腺腺瘤組織比較，乳腺癌組織中PTEN蛋白的陽性表達率降低，AKT、PI3K蛋白的表達率升高（P＜0.05），這與本研究結果一致，因此可以推測PTEN、AKT、PI3K可能參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，其蛋白表達的檢測也可能有助于預測乳腺癌的預后。

由于乳腺癌的異質性，PI3K/AKT通路改變的頻率及方式在不同的乳腺癌亞型中也有所不同，隨著研究的不斷深入，將會更加明確各亞型中通路的改變及其之間的聯(lián)系，這將有助于指導不同分子亞型乳腺癌的靶向治療及聯(lián)合治療方案；乳腺癌的發(fā)生發(fā)展不是單一因素的結果，未來乳腺癌治療一定是采用針對多條基因通路的共同抑制或激活手段，這樣才能達到理想療效。

綜上所述，PI3K/AKT信號通路可能參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展，PTEN蛋白表達缺失導致AKT、PI3K蛋白的過度表達，PI3K、PTEN、AKT蛋白表達的檢測可能有助于預測乳腺癌的預后；同時，以PI3K/AKT信號通路為靶點的分子靶向治療有望為乳腺癌治療提供新的思路。

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Expression of proteins associated with PI33K/AKT signaling pathway in breastt cancer and the clinical significancee △

LIU Juan-ni LI Jun-hai BAI Guo-dong WU Hong-pei LIAO He-he#
Department of Oncology，the Nuclear Industry 215 Hospital，Xianyang 712000，Shaanxi，China

ObjectivectiveTo investigate the expressions of PTEN，PI3K，and AKT in breast cancer and their relevance with the occurrence，development and prognosis of breast cancer.MethodethodThe expression of PTEN，PI3K and AKT in 45 cases of breast cancer（observer group）and 15 cases with normal adjacent tissues（comparison group）were determined using SP method of immunohistochemistry，and univariate analysis was applied to analyze the factors related with positive expression of PTEN，PI3K，and AKT protein in breast cancer tissues.ResultesultThe PI3K and AKT expression rate in breast cancer was 73.3%and 75.5%，higher than that in normal adjacent tissues at 33.3%and 40%，respectively（P＜0.05）；the expression rate of PTEN in breast cancer was 22.2%，lower than that of the adjacent normal tissues at 53.3%，and no significant difference was observed（P＞0.05）；the univariate analysis showed that，age was irrelevant（P＞0.05）；while histological grade，clinical stage，axillary lymph node metastasis were factors associated with positive expression of PTEN，PI3K，and AKT in breast cancer tissues（P＜0.05）.ConclusionusionPI3K/AKT signaling pathway may be involved in the occurrence and development of breast cancer，and the loss of expression of PTEN may contribute to overexpression of PI3K and AKT in breast cancer，so the detection of PTEN，PI3K and AKT may be helpful to predict the prognosis of breast cancer.

rdsbreast cancer；PTEN；PI3K；AKT；immunohistochemistry

中文分類號： R737. 9A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.10

陜西省自然科學基礎研究計劃項目（2014JM4109）

（corresponding author）：郵箱：huhuliaoyh@fox.mail.com

2015-11-12）