五味子甲素衍生物聯(lián)苯雙酯的紫外防護(hù)作用及機(jī)制研究*

曹波，王娟娟，陳詩(shī)雅，路婷婷，陳虹，齊莉

（1.武警后勤學(xué)院，天津 300309；2.天津醫(yī)科大學(xué)，天津 300070）

?

五味子甲素衍生物聯(lián)苯雙酯的紫外防護(hù)作用及機(jī)制研究*

曹波1，王娟娟2，陳詩(shī)雅1，路婷婷1，陳虹1，齊莉1

（1.武警后勤學(xué)院，天津 300309；2.天津醫(yī)科大學(xué)，天津 300070）

目的探討聯(lián)苯雙酯（DDB）對(duì)中波紫外線（UVB）的防護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制研究，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法DDB和維生素C對(duì)照檢測(cè)五味子甲素衍生物DDB對(duì)超氧陰離子（O2-）的清除率。MTT法測(cè)定DDB、UVB對(duì)人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）、人真皮成纖維細(xì)胞（FB）生長(zhǎng)的影響及DDB對(duì)UVB的防護(hù)作用。通過(guò)Giemsa染色，從形態(tài)學(xué)上觀察DDB對(duì)UVB損傷的防護(hù)作用。激光共聚焦觀察活性氧簇（ROS）及檢測(cè)其熒光強(qiáng)度。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，相同濃度DDB具有強(qiáng)的清除O2-的能力；DDB對(duì)HaCaT、Fb細(xì)胞無(wú)毒性且可防護(hù)UVB損傷。Giemsa染色后，形態(tài)學(xué)上發(fā)現(xiàn)DDB可以明顯抑制細(xì)胞的凋亡。DDB可抑制HaCaT細(xì)胞外ROS的生成。結(jié)論五味子甲素衍生物DDB對(duì)UVB有明顯的防護(hù)作用，DDB作用機(jī)制是通過(guò)其抗氧化活性抑制UVB輻射引起的氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡等，起到紫外線防護(hù)作用，有望開發(fā)成為有效的抗氧化劑和紫外防護(hù)產(chǎn)品。

五味子甲素衍生物聯(lián)苯雙酯；機(jī)制研究；UVB

聯(lián)苯雙酯（dimethyl dicarboxylate biphenyl，DDB）是研究五味子過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的一種重要的醫(yī)藥中間體［1］，它是一種單一木脂素化合物，可治療病毒性肝炎和藥物性肝損傷引起轉(zhuǎn)氨酶升高，具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、保肝及抑制血小板活化因子等生理功能［2］。

隨著環(huán)境污染日漸加重，進(jìn)而臭氧層破壞導(dǎo)致的紫外線損傷越來(lái)越嚴(yán)重，皮膚長(zhǎng)期暴露在紫外線下可以引起皮膚損傷，出現(xiàn)皮膚光老化甚至出現(xiàn)皮膚癌變和其他皮膚病變［3］。皮膚接受過(guò)多的紫外線輻射，皮膚組織細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激，產(chǎn)生過(guò)量的活性氧簇（reactive oxygen species，ROS），破壞細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，進(jìn)一步引起細(xì)胞炎癥、細(xì)胞凋亡及腫瘤的形成［4-5］。紫外線分為3個(gè)波段：長(zhǎng)波紫外線（ultraviolet radiation A，UVA）320～400 nm；中波紫外線（ultraviolet radiation B，UVB）275～320 nm；短波紫外線（ultraviolet radiation C，UVC）230～275 nm。其中UVB又稱作曬斑紫外線，其對(duì)皮膚的損傷最大［6-7］。預(yù)防紫外線光老化及有紫外線引起的皮膚病是重要措施，因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)DDB的抗UVB作用進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)研究。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞株人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT human keratinocyte cell line，HaCaT）和人黑色素細(xì)胞為四軍醫(yī)大學(xué)贈(zèng)與，人真皮成纖維細(xì)胞（Human dermal fibroblasts，F(xiàn)b）購(gòu)自北京協(xié)和細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2主要試劑DDB由中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院生藥學(xué)教研室提供，體外實(shí)驗(yàn)用DMSO配制。DMEM、RPMI1640購(gòu)自天潤(rùn)善達(dá)公司，胎牛血清（FBS）為中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血研所科技公司產(chǎn)品，二甲基亞砜（DMSO）、牛血清白蛋白（BSA）、溴化四氮唑藍(lán)（MTT）均購(gòu)自Sigma公司，胰酶（Trypsin）、Tris、Tris Base購(gòu)自GIBECO公司，Triton X-100由香港FARCO公司提供，Giemsa染液為Serva公司產(chǎn)品。HE染液、一抗稀釋液購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所，其他常規(guī)試劑及溶劑均由北京化學(xué)試劑研究所、北京化工廠及北京雙環(huán)化學(xué)試劑廠提供。

1.1.3主要儀器MCO-AC型二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)買于SANYO公司，JJT-900/1300超凈工作臺(tái)購(gòu)買于北京半導(dǎo)體設(shè)備一廠，TS100型倒置顯微鏡購(gòu)買于NiKon公司，CHK型光學(xué)顯微鏡和C-4040ZOOM型Olympus數(shù)碼相機(jī)購(gòu)買于Olympus公司，SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器購(gòu)買于上海亞榮生化儀器廠，HU-6150T型超聲波清洗器購(gòu)買于上海愛朗儀器有限公司，Adventurer萬(wàn)分之一電子天平購(gòu)買于OHAUS公司，BIO-RAD MODEL680型酶標(biāo)儀購(gòu)買于BIO-RAD公司，LD5-2A常溫離心機(jī)購(gòu)買于北京醫(yī)用離心機(jī)廠，UV-260型紫外-可見分光光度計(jì)購(gòu)買于Shimadza公司，LDZX型立式壓力蒸汽滅菌器購(gòu)買于上海申安醫(yī)療器械廠，TL-2000MM-1型微量振蕩儀購(gòu)買于江蘇天力醫(yī)療器械有限公司，SS01-01型紫外線治療儀購(gòu)買于上海西格瑪技術(shù)有限公司，紫外輻照計(jì)購(gòu)買于北京師范大學(xué)光電儀器廠。

1.2方法

1.2.1DDB對(duì)超氧陰離子（O2-）的體外清除作用試驗(yàn)原理：領(lǐng)苯三酚自氧化速率測(cè)定法即鄰苯三酚本身無(wú)色，其在堿性條件下，可以自氧化成桔酚（桔色），加入抗氧化劑后可抑制其自氧化。在320 nm處檢測(cè)鄰苯三酚的吸光度值，從而得到DDB對(duì)鄰苯三酚自氧化的抑制率［8］。

本實(shí)驗(yàn)采用維生素C（VC）作為陽(yáng)性對(duì)照。DDB和VC用70%乙醇分別配成濃度0.4 mg/ml、0.8 mg/ml、1.2 mg/ml、1.6 mg/ml、2.0 mg/ml和2.4 mg/ml。

以70%乙醇校正零點(diǎn)，在320nm處測(cè)定吸光度值，每個(gè)樣品測(cè)3次，按公式①計(jì)算超氧陰離子的清除率。Q（%）=［Ao-（As-Ai）］/Ao×100%①。

1.2.2MTT法測(cè)定DDB、UVB對(duì)HaCaT、FB細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及DDB對(duì)UVB的防護(hù)作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100μl（含1×104個(gè)細(xì)胞），置于37℃，5%二氧化碳溫箱中培養(yǎng)。24 h后，移除培養(yǎng)液，加入50μl MTT溶液（1 mg/ml，PBS配置），37℃孵育4 h，移除上清，每孔加入150μl DMSO溶解甲簪顆粒，震蕩溶解后，用酶標(biāo)儀檢測(cè)550 nm條件處測(cè)其光密度值（OD值），分別以不同濃度的的DDB或者不同輻射劑量的UVB為實(shí)驗(yàn)組，以溶劑對(duì)照組的細(xì)胞為對(duì)照組，用公式②計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率，并計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率=100-（對(duì)照組OD值-加藥組OD值）/（對(duì)照組OD值-空白組OD值）×100%②，每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞同以上操作，后用中波紫外線（UVB）段紫外光療儀輻射96孔板中細(xì)胞，輻射劑量132 mJ/cm2（輻射密度5.5 mW/cm2，輻射時(shí)間240 s），輻射完成后，模型組每孔加入100 ml DDB，對(duì)照組加入等量無(wú)血清DMEM，培養(yǎng)24 h，然后測(cè)量其OD值，同以上操作。

1.2.3Giemsa染色①收集及固定細(xì)胞，按上述方法處理好模型組和對(duì)照組后，用0.25%的胰酶消化HaCaT細(xì)胞，收集細(xì)胞，短時(shí)低速離心（1 000 r/min，5 min），棄上清，用pH7.4的PBS洗2次，離心（1 000 r/min，5 min）棄上清，以除去細(xì)胞懸液中的細(xì)胞碎片，每管加冷70%乙醇1 ml固定，將細(xì)胞輕吹成單個(gè)細(xì)胞，-20℃過(guò)夜。②然后離心收集HaCaT細(xì)胞，用PBS沖洗HaCaT細(xì)胞3次，室溫避光，Giemsa染色應(yīng)用液染色10 min。通過(guò)CHK型光學(xué)顯微鏡觀察，Olympus數(shù)碼相機(jī)照相。

1.2.4激光共聚焦觀察活性氧簇（ROS）及檢測(cè)其熒光強(qiáng)度取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HaCaT細(xì)胞，接種于直徑60 mm平皿中（每孔放入1張圓形蓋玻片），每孔加入1 ml（10 000個(gè)細(xì)胞）HaCaT細(xì)胞懸液。24 h后，給藥組加入DDB，對(duì)照組加入含0.1%DMSO的空白培養(yǎng)基。2 h后，用PBS洗2遍，加入少許冷PBS（500μl），置于UVB輻射（132 mJ/cm2），輻射完成后，立即加入DCFH-DA（10μmol/L，二氯二氫熒光素雙醋酸鹽，免疫熒光染色劑）PBS溶液。放入37℃，二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡照相，通過(guò)熒光分光光度計(jì)檢測(cè)其熒光強(qiáng)度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用EXCEL軟件和SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組之間均數(shù)的比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1五味子甲素衍生物DDB對(duì)O2-的清除能力

圖1為 DDB（0.4～2.4 mg/ml）和 VC（0.4～2.4 mg/ml）對(duì)O2-的清除率。結(jié)果表明相同濃度DDB具有清除O2-的能力，其清除能力弱于VC。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可得出兩者比較標(biāo)準(zhǔn)差為11.005，t=-6.566，查表P＜0.05，因此VC和DDB清除能力不同。

2.2UVB對(duì)HaCaT、Fb細(xì)胞的影響

UVB對(duì)細(xì)胞增殖的影響比較明顯。如圖2A所示，和無(wú)UVB輻射對(duì)照比較，UVB輻射量115.5 mJ/cm2、132 mJ/cm2和148.5 mJ/cm2分別降低HaCaT細(xì)胞存活率到（93±1.460）%、（45±4.526）%和（32±2.673）%（P＜0.05），呈劑量依賴性。如圖2B所示降低Fb細(xì)胞存活率到（80±2.680）%、（72± 4.020）%和（66±3.550）%（P＜0.05），呈劑量依賴性。由于本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞凋亡情況不可以太大，以輻射劑量132 mJ/cm2作為UVB細(xì)胞損傷模型輻射劑量。

2.3五味子甲素衍生物DDB對(duì)HaCaT、FB細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其對(duì)UVB的防護(hù)作用

圖1　DDB對(duì)?的清除率

圖2　UVB對(duì)細(xì)胞增殖的影響

圖3　DDB對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其對(duì)UVB的防護(hù)作用

MTT法結(jié)果顯示，DDB（1×10-7～1×10-4mol/L）HaCaT細(xì)胞存活率分別為（99±8.219）%，（103± 3.550）%，（111±7.496）%和（108±4.020）%，與正常對(duì)照組（79±1.770）%比較均有明顯地增加，如圖3A示；DDB濃度為1×10-4mol/L時(shí)，F(xiàn)b細(xì)胞存活率為（98±4.640），存活率有所降低但不明顯，DDB在（1×10-7～1×10-5mol/L）濃度范圍時(shí)，F(xiàn)b細(xì)胞存活率為（110±9.319）%、（104±2.615）%、（104± 7.810）%，與正常對(duì)照組比較有所增加，結(jié)果如圖3B所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DDB（1×10-7～1×10-4mol/L）對(duì)HaCaT、Fb細(xì)胞無(wú)毒性，本次研究選擇這個(gè)范圍進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。DDB對(duì)UVB的防護(hù)作用如圖3C所示，UVB輻射組（77±1.638）%與正常對(duì)照組比較，UVB輻射組顯著性抑制了HaCaT細(xì)胞的活性；給藥組DDB（1×10-7～1×10-4mol/L）給藥后，細(xì)胞存活率分別為 （90±3.740）%、（102±1.990）%、（104± 9.750）%和（118±3.090）%，與UVB輻射組比較顯著提高。圖3D所示，UVB輻射組（80±2.100）%與正常對(duì)照組比較，UVB輻射顯著地抑制了Fb細(xì)胞的活性；給藥組DDB（1×10-7～1×10-4mol/L）給藥后，細(xì)胞存活率分別為（100±10.220）%、（102± 6.715）%、（110±5.437）%和（101±5.771）%，與UVB輻射組比較顯著提高。

2.4五味子甲素衍生物DDB對(duì)人黑色素細(xì)胞黑色素生產(chǎn)的影響

采用酶標(biāo)儀在405 nm測(cè)定其吸光度值，間接反應(yīng)出人黑色素細(xì)胞中黑色素生成量。從圖4可以觀察到DDB（1×10-6～1×10-4mol/L）給藥組黑色素生成量分別為（62±1.870）、（77±0.981）和（39±1.090），與正常人黑色素細(xì)胞組比較明顯降低。

2.5形態(tài)學(xué)觀察五味子甲素衍生物DDB對(duì)Ha-CaT細(xì)胞的UVB防護(hù)作用

Giemsa染色如圖5所示UVB輻射后，細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，如箭頭所指凋亡細(xì)胞。DDB（10-7mol/L）給藥后，凋亡明顯被抑制。

圖4　DDB（1×10-6～1×10-4mol/L）對(duì)人黑色素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素的影響

2.6五味子甲素衍生物DDB抑制HaCaT細(xì)胞外ROS的生成

圖5　Giemsa染色法觀察DDB對(duì)HaCaT細(xì)胞的UVB輻射的防護(hù)作用

圖6　DDB對(duì)UVB輻射HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生的ROS清除作用

圖7　熒光法觀察DDB對(duì)UVB輻射HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生的ROS清除作用

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)HaCaT細(xì)胞外總ROS水平，評(píng)價(jià)DDB的抗氧化作用。如圖6結(jié)果表明，UVB輻射組（7.8±0.940）與正常對(duì)照組（14±0.790）比較，UVB輻射顯著性升高了HaCaT細(xì)胞外總ROS水平；給藥組與UVB對(duì)照組比較，DDB（1×10-4）給藥（14±0.540）后，HaCaT細(xì)胞外總ROS水平?jīng)]有顯著降低，DDB（1×10-7～1×10-5mol/L）給藥后，HaCaT細(xì)胞外總ROS水平分別為（12.1±0.380）、（11.4± 0.840）和（10.8±2.570），與UVB對(duì)照組比較均顯著性降低。如圖7所示，熒光法顯示ROS產(chǎn)生量，UVB輻射組（圖7B）較正常對(duì)照組（圖7A）明顯增多，而給藥組（圖7C、D、E、F）較UVB輻射組減少。

3　討論

經(jīng)研究表明，不同波段的紫外線，只有中波紫外線到達(dá)地面的量最大，而且它對(duì)人體的危害也最大。因此，針對(duì)中波紫外線對(duì)人體造成的危害的機(jī)制及該如何預(yù)防和治療的研究是目前重點(diǎn)。聯(lián)苯雙酯是五味子甲素的一種衍生物，也是一種新型的藥物，是治療病毒性肝炎和藥物性肝損傷引起轉(zhuǎn)氨酶升高的常用藥物，具有保護(hù)肝細(xì)胞，增加肝臟的解毒功能的藥理作用。文獻(xiàn)研究表明五味子甲素、乙素及丙素對(duì)H2O2對(duì)造成細(xì)胞的氧化損傷均具有一定的保護(hù)作用［9］。因此，在本次試驗(yàn)研究中，本實(shí)驗(yàn)對(duì)五味子甲素衍生物聯(lián)苯雙酯的抗氧化損傷進(jìn)行了探索，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聯(lián)苯雙酯可以清除O2-，具有一定的抗氧化作用，從而起到防護(hù)UVB的作用。

波長(zhǎng)短能量較高的UVB主要作用于表皮，Ha-CaT細(xì)胞占表皮細(xì)胞的90%以上，是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞，可吸收輻射到皮膚的UVB的絕大部分；Fb細(xì)胞是皮膚真皮中的主體細(xì)胞；黑色素細(xì)胞是皮膚里的一種特殊細(xì)胞，它產(chǎn)生黑色素，傳遞給周圍的HaCaT細(xì)胞，皮膚顏色的深淺根本取決于黑色素的含量［10］。因此本實(shí)驗(yàn)以HaCaT、Fb細(xì)胞為研究對(duì)象，同時(shí)對(duì)DDB抑制黑色素細(xì)胞的作用進(jìn)行了研究，探討DDB的抗UVB損傷的作用和DDB的美白效果。當(dāng) UVB輻射劑量為 30 mJ/cm2、60mJ/cm2及 90 mJ/cm2時(shí)，HaCaT細(xì)胞的抑制率分別為 3.86%、7.47%及11.67%［11］。本文通過(guò)MTT法得到細(xì)胞UVB損傷模型最佳UVB輻射劑量為132 mJ/cm2，HaCaT、Fb細(xì)胞細(xì)胞抑制率分別為55%和45%。在DDB（1×10-7～1×10-4mol/L）濃度范圍內(nèi)，UVB輻射對(duì)HaCaT、Fb細(xì)胞的損傷可以得到明顯的抑制，并且DDB可以抑制黑色素的產(chǎn)生。通過(guò)Giemsa染色形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察對(duì)HaCaT細(xì)胞的UVB防護(hù)作用，直觀的觀察到DDB的UVB防護(hù)作用。

氧化應(yīng)激是指活性氧簇（ROS）產(chǎn)生的細(xì)胞毒性反應(yīng)。生命中ROS的有害影響和積累，一直被認(rèn)為是導(dǎo)致機(jī)體衰老的重要原因之一，研究表明，ROS生成增加和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷使線粒體衰老，從而引起生命的衰老［12］。本文通過(guò)激光共聚焦觀察HaCaT細(xì)胞外總活性氧簇（ROS）的水平及檢測(cè)其熒光強(qiáng)度，可以觀察到，DDB（1×10-7～1×10-4mol/L）可以顯著抑制UVB輻射引起的細(xì)胞凋亡。

綜上所述，聯(lián)苯雙酯對(duì)UVB的防護(hù)作用的機(jī)制可能是通過(guò)抑制由UVB輻射引起皮膚氧化應(yīng)激產(chǎn)生的ROS所產(chǎn)生的細(xì)胞毒性反應(yīng)，并且可抑制UVB輻射引起的細(xì)胞損傷，因此聯(lián)苯雙酯可用于紫外線防護(hù)劑或者化妝品的開發(fā)應(yīng)用。而聯(lián)苯雙酯對(duì)UVB的防護(hù)作用其他有可能的機(jī)制以及其應(yīng)用于臨床的效果還需進(jìn)一步的研究。

［1］林炳旺，殷樹梅.聯(lián)苯雙酯的合成及應(yīng)用［J］.化工中間體，2008，14（7）:20-23.

［2］張國(guó)良，李娜，林黎琳，等.木脂素類化合物生物活性研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志，2007，32（20）:2089-2094.

［3］MUKHERJEE P K，MAITY N，NEMA N K，et al.Bioactive compounds from natural resources against skin aging［J］.Phytomedicine，2011，19（1）:64-73.

［4］SHINDO Y，WTTT E，HAN D，et al.Enzymatic and non-enzymatic antioxidants in epidermis and dermis of human skin［J］.J Invest Dermatol，1994，10（2）:122-124.

［5］BRIQANTIS，WLASCHEKM，HINRICHSC，etal.Small molecularantioxidantseffectivelyprotectfromPUVA-induced oxidative stress responses underlying？broblast senescence and photoaging［J］.Free Radic Biol Med，2008，45（5）:636-644.

［6］路婷婷，陳亞澤，盧濤，等.紫外線的皮膚損傷機(jī)制及具有紫外線防護(hù)作用的天然產(chǎn)物的研究進(jìn)展 ［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（12）:1655-1659.

［7］曹波，牛聰，盧濤，等.五味子乙素對(duì)UVB輻射誘導(dǎo)HaCat細(xì)胞凋亡的抑制作用及其機(jī)制［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2014，30（4）:523-527.

［8］洪宗國(guó)，易筠，王東.蘄艾總鞣酸對(duì)羥自由基和超氧陰離子自由基的清除作用［J］.中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）.2010，29（4）:50-53.

［9］艾軍，王振興，秦紅艷，等.我國(guó)五味子研究現(xiàn)狀及展望［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，43（10）:14-20.

［10］NAKAJIMA M，SHINODA I，F(xiàn)UKUWATARI Y，et al.Arbutin increases the pigmentation of cultured human melanocytes through mechanisms other than the induction of tyrosinase activity［J］.Pigment Cell Res，1998，11（1）:12-17.

［11］王晶晶，車雅敏，劉原君，等.中波紫外線對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞MMP-1及TIMP-1的影響［J］.皮膚性病診療學(xué)雜志，2012，19（2）: 61-64.

［12］王平遠(yuǎn)，高麗，許豪文.運(yùn)動(dòng)及衰老過(guò)程中線粒體ROS機(jī)制的探討.山東體育學(xué)院學(xué)報(bào).2003.19（2）:36-39.

（張蕾編輯）

Protective effect of SchA derivant Dimethyl dicarboxylate biphenyl against damage of UVB irradiation and its mechanism*

Bo Cao1，Juan-juan Wang2，Shi-ya Chen1，Ting-ting Lu1，Hong Chen1，Li-Qi1
（1.Logistics University of People's Armed Police Force，TianJin 300309，China；2.Medical University Of Tianjin，Tianjin 300070，China）

Objective To evaluate the protective activity of SchA derivant DDB on the UVB-induced skin damage and explore its mechanism.Methods The Anti-oxidation activity against reactive oxygen species（ROS）including superoxide anion radical（O2-）was investigated.Methyl thiazolyl tetrazolium（MTT）assay was used to examine the effect of DDB or UVB on HaCaT and Fb cells'viability and its protective effect from UVB's damage.UVB-induced cells apoptosis was visualized with Giemsa stain.Anti-oxidative capacity of the drugs was evaluated by dichlorodihydrofluorescein diacetate（DCFH-DA）assay.Results In this study，the topical application of DDB after UVB irradiation was found to decrease UVB-induced oxidation damage，the drug had a highly activity of superoxide anion radical（O2-）.Through MTT assay，we found that DDB was found had no damage to cells.Meanwhile，we also find that DDB can decrease human melanoma cell's production.Through Giemsa stain，we visualized that the drug can inhibite UVB induced HaCaT cell death.Conclusions In a word，DDB may be useful in antiphotoaging agents in the treatment of UVB irradiation.

SchA derivant dimethyl dicarboxylate biphenyl；mechanism；UVB

R932

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.16.005

1005-8982（2016）16-0023-06

2015-12-20

天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃（青年項(xiàng)目）（No：14JCQNFC10300）；武警后勤學(xué)院院級(jí)科學(xué)基金（No：WHM201308）；國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目（No：81072964）

齊莉，E-mail：qili3017@sina.com，Tel：13920146924