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    油脂類食品中脂肪酸單氯丙醇單酯和雙酯的分離測定

    2014-10-24 21:15傅武勝等
    分析化學(xué) 2014年4期
    關(guān)鍵詞:乙酸乙酯水解溶劑

    傅武勝等

    摘要:建立了食品中脂肪酸單氯丙醇單酯與雙酯含量的測定方法。稱取0.1 g的油脂樣品,加入內(nèi)標(biāo)后,轉(zhuǎn)入氨基固相萃取柱,先以6.0 mL正己烷洗脫脂肪酸單氯丙醇雙酯(MCPD雙酯),再以6.0 mL正己烷-乙酸乙酯混合溶劑洗脫脂肪酸單氯丙醇單酯(MCPD單酯),分別收集洗脫液并濃縮至近干,殘余物經(jīng)甲醇鈉水解和苯基硼酸(PBA)衍生后,供氣相色譜/質(zhì)譜(GCMS)分析。MCPD單酯、MCPD雙酯的檢出限在83~142 μg/kg(均以MCPD計(jì))之間,線性范圍為25~500 μg/L(R2>0.9990)。以花生油和嬰幼兒奶粉脂肪提取物為基質(zhì),在250~1000 μg/kg范圍內(nèi)進(jìn)行3種濃度水平的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),MCPD單酯與雙酯的回收率在86.5%~104.0%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.4%~13.2%(n=6)。此外,本方法成功應(yīng)用于市售食用植物油和嬰幼兒奶粉中MCPD單、雙酯的污染調(diào)查。

    關(guān)鍵詞:脂肪酸; 3氯1,2丙二醇單酯; 3氯1,2丙二醇雙酯; 2氯1,3丙二醇單酯; 2氯1,3丙二醇雙酯; 食用植物油; 奶粉; 氣相色譜質(zhì)譜法; 固相萃取法

    1引言

    氯丙醇與脂肪酸酯化形成的脂肪酸氯丙醇酯(氯丙酯)是近年來國際上新出現(xiàn)的食品安全問題,尤其是脂肪酸3氯1,2丙二醇酯(簡稱3MCPD酯)的污染最為突出。氯丙醇是公認(rèn)的食品加工中形成的污染物,3氯1,2丙二醇(3MCPD)具有腎臟毒性、生殖毒性、免疫抑制作用和潛在致癌性而被廣泛關(guān)注[1,2]。早在1980年就發(fā)現(xiàn)植物蛋白在酸水解中會(huì)形成3MCPD酯[3,4],隨后在奶粉[5]、山羊奶[6]、食用油[7]以及油炸食品[8]中也檢出該成分。氯丙酯尤其在食用油和奶粉等脂肪含量較高的食品中污染水平較高,食物中氯丙酯的含量是氯丙醇的5~396倍[9~13],因此氯丙酯問題引起了歐盟等食品安全機(jī)構(gòu)的極大關(guān)注。目前, 氯丙酯的毒性仍不清楚,對其健康風(fēng)險(xiǎn)的擔(dān)心主要是因?yàn)槁缺サ乃猱a(chǎn)物氯丙醇的毒性作用[14~17]。3MCPD酯在腸道水解后將增加人體3MCPD的暴露水平,3MCPD攝入量是其暫定每日最大耐受量(TDI)(2 μg/kg·bw)的5~100倍[18,19]。由于3MCPD具有1~2個(gè)羥基,因此3MCPD酯具有3MCPD單酯和雙酯兩種形式,結(jié)構(gòu)上的差異可能導(dǎo)致毒理學(xué)作用的差異。實(shí)驗(yàn)表明,3MCPD雙酯會(huì)致大鼠精子減少(生殖毒性),3MCPD單酯不僅具有生殖毒性,還可能造成大鼠腎小管壞死(腎臟毒性)[16]。在模擬腸道的脂肪酶水解試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),3MCPD單酯水解生成3MCPD的速率遠(yuǎn)超過3MCPD雙酯[20,21]。因此,有必要對3MCPD單/雙酯進(jìn)行分離和分別檢測,獲得食品中3MCPD單酯與雙酯含量的數(shù)據(jù),以更準(zhǔn)確地評估3MCPD酯的健康風(fēng)險(xiǎn)。

    國際上測定食品(油脂)中3MCPD酯總量的研究較多[22],但對3MCPD單/雙酯含量分別檢測的研究極少。據(jù)報(bào)道采用氨丙基(Aminopropyl)[23]或硅膠[24]固相萃取法,以正己烷、乙醚、二氯甲烷、石油醚和乙酸乙酯混合溶劑洗脫,將3MCPD單酯與雙酯分離,進(jìn)一步水解、凈化、衍生后,用GCMS分別檢測。但該法所用溶劑種類多、比例復(fù)雜、體積多達(dá)850 mL、操作較為繁瑣,且未證實(shí)方法是否適合各類油脂中不同脂肪酸組成的氯丙醇單酯、雙酯。超臨界流體色譜三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法也可用于測定3MCPD單酯/雙酯[25], 該法測定步驟雖簡單,但對儀器要求較高,且容易污染。本研究采用氨基固相萃取法,利用正己烷-乙酸乙酯混合溶劑洗脫,并采用堿水解苯基硼酸(PBA)衍生GCMS法測定[26];方法除了可測定3MCPD單酯/雙酯外,還可能適用于2氯1,3丙二醇(2MCPD)單酯/雙酯的測定。

    2實(shí)驗(yàn)部分

    2.1儀器與試劑

    3800型氣相色譜儀和Saturn 2200離子阱型質(zhì)譜儀(美國Varian公司);NEVAPTM 111型氮吹儀(美國Organomation Associates公司);Microfuge型高速離心機(jī)(美國Beckman公司);6 mL聚丙烯固相萃取柱柱筒(Angela公司)。玻璃器皿在220 ℃下烘烤3 h后使用。

    2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

    準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)標(biāo)工作液,以正己烷稀釋成濃度分別為25, 50, 100, 200和500 μg/L的MCPD單酯、MCPD雙酯標(biāo)準(zhǔn)系列,內(nèi)標(biāo)濃度均為100 μg/L,再按文獻(xiàn)[21]方法水解、凈化、衍生處理,供GCMS分析。

    2.5樣品中氯丙酯含量的測定

    上樣: 稱取0.1 g食用油或油脂食品的脂肪于1.5 mL塑料離心管中,準(zhǔn)確加入混合內(nèi)標(biāo)工作液50 μL, 渦旋混勻后超聲5 min,轉(zhuǎn)入固相萃取柱(500 mg/6 mL,經(jīng)4.0 mL正己烷活化),并以0.2 mL正己烷洗滌離心管兩次,將洗滌液一并轉(zhuǎn)入固相萃取柱中。

    洗脫:先以6 mL正己烷洗脫MCPD雙酯;再用正己烷/乙酸乙酯(7∶3, V/V)洗脫MCPD單酯,分別收集洗脫液,并將洗脫液置于氮?dú)饬飨戮従彎饪s至近干。

    分別于上述分離得到的樣品中,超聲混勻,再按文獻(xiàn) [26]方法水解、凈化、衍生處理,得到1.0 mL待測溶液,供GCMS分析,以同位素內(nèi)標(biāo)法定量。

    3結(jié)果與討論

    3.1MCPD衍生物的鑒定以及定量離子的確定

    3.3洗脫分離溶劑的比例

    分別以10 mL不同比例的正己烷乙酸乙酯(9∶1, 8∶2, 7∶3, V/V)和正己烷作為洗脫劑,每種條件重復(fù)3次。對于MCPD雙酯,4種溶劑皆能將其洗脫下來,但以10 mL正己烷的洗脫效果最優(yōu),回收率為83.1%~103.0%; 對于MCPD單酯,除10 mL正己烷外,其余3種比例的溶劑均能將其洗脫下來,并以正己烷乙酸乙酯(7∶3, V/V)洗脫效果最好,回收率在87.2%~97.8%之間。這可能由于MCPD單酯與雙酯結(jié)構(gòu)上有差異,導(dǎo)致兩者極性不同,含有一個(gè)羥基的MCPD單酯極性略強(qiáng)于MCPD雙酯。因此,采用正己烷作為MCPD雙酯的洗脫溶劑,正己烷乙酸乙酯(7∶3, V/V)作為MCPD單酯的洗脫溶劑。

    3.4洗脫分離溶劑的體積

    為進(jìn)一步確定所需的洗脫劑體積,分別以10 mL正己烷、正己烷/乙酸乙酯(7∶3, V/V)洗脫MCPD雙酯與MCPD單酯,每2 mL為一階段收集洗脫液。結(jié)果表明,無論是MCPD單酯還是MCPD雙酯,當(dāng)洗脫溶劑體積為4.0 mL時(shí),其回收率較為理想(94.6%~99.3%);增至6.0 mL時(shí),結(jié)果與4.0 mL相差不大,說明4.0 mL溶劑足以洗脫大部分的MCPD單酯/雙酯。但考慮到實(shí)驗(yàn)條件可能存在的微小變化,如填料的松緊或者洗脫流速的差異等,甚至某些樣品MCPD單/雙酯含量異常高,因此洗脫溶劑體積均選擇6.0 mL。

    3.5不同類型脂肪酸MCPD單/雙酯的分離驗(yàn)證

    考慮到不同類型脂肪酸的碳數(shù)和單雙鍵數(shù)量、空間結(jié)構(gòu)等不同,由此可能導(dǎo)致其洗脫特性不同,需進(jìn)一步驗(yàn)證。以不同種類脂肪酸構(gòu)成的MCPD單酯、MCPD雙酯標(biāo)準(zhǔn)液(十二碳的飽和月桂酸、十六碳的飽和棕櫚酸、十八碳的不飽和亞麻酸、十八碳的飽和硬脂酸)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,6.0 mL正己烷可把上述各類脂肪酸的MCPD雙酯洗脫下來,回收率為92.3%~97.4%,但無法洗脫MCPD單酯,見圖2;但以6.0 mL正己烷酸乙酯(7∶3, V/V)混合液可將MCPD單酯洗脫下來,回收率為93.7%~99.4%,見圖2a;由此可見,優(yōu)化的方法適用于各類脂肪酸MCPD單酯與雙酯的分離。

    3.6檢出限和定量限

    在花生油基質(zhì)中加標(biāo),獲得3MCPD單、雙酯和2MCPD雙酯的檢出限(LOD,S/N=3)分別為83, 125和100 μg/kg,定量限(LOQ,S/N=10)分別為278, 417和333 μg/kg。在嬰幼兒奶粉脂肪提取物基質(zhì)中,3MCPD單、雙酯以及2MCPD雙酯的檢出限略高,分別為95.1, 142和122 μg/kg, 脂肪定量限分別為316, 473和406 μg/kg,這說明即使在基質(zhì)較為復(fù)雜的嬰幼兒奶粉脂肪提取物中,方法的檢出限和定量限也滿足分析要求。

    3.7線性范圍

    3MCPD棕櫚酸單酯與雙酯以及2MCPD二硬脂酸酯含量分別以3MCPD和2MCPD計(jì)算。以3MCPD, 2MCPD與各自內(nèi)標(biāo)峰面積比值y和各自的質(zhì)量x(ng)計(jì)算線性回歸方程。結(jié)果表明,在25~500 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.9990。

    3.8準(zhǔn)確度和精密度

    3.9實(shí)際樣品分析

    利用本方法調(diào)查了12個(gè)品種的72份市售食用植物油樣品和7個(gè)品牌31份嬰幼兒配方奶粉中MCPD單/雙酯的含量,同時(shí)按文獻(xiàn) [26] 方法測定脂肪酸MCPD酯總量。結(jié)果表明,脂肪中以MCPD雙酯含量為主體,MCPD單酯含量占MCPD酯總量的5.0%~45.0%。此外,利用本方法測定的MCPD單酯、雙酯含量之和占用文獻(xiàn)[21]方法測定MCPD酯總量的71.9%~98.2%,驗(yàn)證了本方法的可靠性。

    本方法操作較為簡便、靈敏度較高、結(jié)合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,結(jié)果準(zhǔn)確可靠, 適用于檢測食用植物油和嬰幼兒奶粉中MCPD單酯、雙酯含量的檢測方法。

    References

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