聯(lián)苯雙酯固體分散體的制備及表征

王 群，魏忠莉，李青松，何仲貴

聯(lián)苯雙酯固體分散體的制備及表征

王 群，魏忠莉，李青松，何仲貴*

（沈陽藥科大學(xué) 無涯創(chuàng)新學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

制備聯(lián)苯雙酯固體分散體，以提高聯(lián)苯雙酯的體外溶出度。以聚乙二醇 6 000（Polyethylene glycol 6000，PEG6000）、聚維酮K30（Povidone K30，PVP K30）和泊洛沙姆188（Poloxamer 188，P188）為載體，采用溶劑揮發(fā)法制備聯(lián)苯雙酯固體分散體。同時(shí)，采用差示掃描量熱法（Differential scanning calorimetry，DSC）、X射線粉末衍射法（X-ray powder diffraction，XRPD）和紅外光譜法（Infrared Spectroscopy，IR）等技術(shù)對固體分散體進(jìn)行表征。在三種載體制備的固體分散體中，聯(lián)苯雙酯的體外溶出度明顯提高，且三種載體對聯(lián)苯雙酯的增溶效果依次為：P188>PVP K30>PEG6000。DSC、XRPD和IR結(jié)果表明，聯(lián)苯雙酯以分子形式或無定型存在于固體分散體中。采用溶劑揮發(fā)法制備聯(lián)苯雙酯固體分散體，能明顯提高聯(lián)苯雙酯體外溶出度。

藥劑學(xué)；聯(lián)苯雙酯；固體分散體；溶出度

聯(lián)苯雙酯（bifendate，DDB）是人工合成五味子丙素的中間產(chǎn)物，是我國自主研發(fā)的一類保肝護(hù)肝藥[1]。具有降酶、抗病毒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，臨床上用于治療慢性、遷延性肝炎伴谷丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高，也可用于治療化學(xué)毒物、藥物引起的谷丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高[2-5]。

由于聯(lián)苯雙酯在水中幾乎不溶，溶解度約為2.5 mg·L-1，導(dǎo)致其口服生物利用度很低，只有約20%～30%，溶解度低已經(jīng)成為限制聯(lián)苯雙酯應(yīng)用的首要因素[6]。有實(shí)驗(yàn)表明[7-9]，聯(lián)苯雙酯具有很好的體內(nèi)外相關(guān)性，即體外溶出度越高，口服生物利用度越高?；诖耍疚淖髡卟捎萌軇]發(fā)法制備聯(lián)苯雙酯固體分散體，以提高其體外溶出度。

1 儀器與材料

YRE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鞏義予華儀器有限公司），BSA124S-CW電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司），DZX-6050B真空干燥箱（上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），HITACHI高效液相色譜儀（日本日立公司），RC12AD智能溶出儀（天津天大天發(fā)科技有限公司），KQ-250B超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），PHS-3BW pH計(jì)（上海般特儀器制造有限公司），DCS-1差示掃描量熱儀（德國梅特勒公司），Bruker D8 discover X射線衍射儀（德國布魯克AXS有限公司），EQUINOX55傅里葉紅外光譜儀（德國布魯克光譜儀器公司）

聯(lián)苯雙酯原料藥（武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司），十二烷基硫酸鈉（天津大茂化學(xué)試劑廠），泊洛沙姆188（德國巴斯夫），聚乙二醇6000（湖南爾康制藥股份有限公司），聚維酮K30（安徽山河藥用輔料股份有限公司），氫氧化鈉、二氯甲烷（天津恒興化學(xué)試劑有限公司），磷酸二氫鈉（天津大茂化學(xué)試劑廠），其他試劑（分析純，市售）。

2 方法與結(jié)果

2.1 聯(lián)苯雙酯體外溶出度測定方法的建立

2.1.1溶出介質(zhì)的選擇

由于聯(lián)苯雙酯在水中溶解度很低，因此，需要在溶出介質(zhì)中加入適量的表面活性劑十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS），同時(shí)，考慮到體內(nèi)外相關(guān)性，最終確定以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的SDS磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。

質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%SDS磷酸鹽緩沖液的配制：稱取磷酸二氫鈉6.895 g、氫氧化鈉0.896 g和SDS 5.0 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，調(diào)節(jié)pH值至6.8即可。

2.1.2最大吸收波長的確定

精密稱取聯(lián)苯雙酯原料藥適量，用甲醇稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度。以甲醇為空白對照，照《中華人民共和國藥典》（2015年版）四部紫外-可見分光光度法（通則0401）[10]，在波長200～400 nm內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果見圖1。

Fig. 1 The UV spectrum of DDB

由掃描結(jié)果可知，聯(lián)苯雙酯在波長278 nm處有最大吸收，因此選擇波長278 nm作為聯(lián)苯雙酯溶出度測定的檢測波長。

2.1.3色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（200 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（體積比70:30）；檢測波長：278 nm；流速：1 mL·min-1；柱溫：30 °C；進(jìn)樣量：20 μL。

2.1.4線性與范圍

精密稱取聯(lián)苯雙酯原料藥約15 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使其完全溶解。放冷至室溫，用甲醇定容至刻度，即得約150 mg·L-1的儲備液。精密量取150 mg·L-1的儲備液適量，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%SDS磷酸鹽緩沖液分別稀釋成0.75、1.5、3.0、4.8、6.0、9.0和12.0 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為=3.02×104+1.16×103，=0.999 5，結(jié)果表明，質(zhì)量濃度在0.75～12.0 mg·L-1內(nèi)，聯(lián)苯雙酯峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5儀器精密度試驗(yàn)

精密量取150 mg·L-1的儲備液1 mL于50 mL量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%SDS磷酸鹽緩沖液稀釋定容至刻度線，配制成3.0 mg·L-1的樣品溶液。精密量取3.0 mg·L-1的樣品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD/%）。結(jié)果表明，儀器精密度RSD<1.0%，符合《中華人民共和國藥典》（2015年版）要求，說明儀器精密度良好。

2.1.6溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取150 mg·L-1的儲備液1 mL于50 mL量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%SDS磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度線，配制成3.0 mg·L-1的樣品溶液，室溫避光放置，分別于0、2、4、6、8、10和12 h，精密量取20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD/%）。結(jié)果表明，RSD為0.28%，說明聯(lián)苯雙酯溶液在室溫、避光條件下放置12 h，穩(wěn)定性良好。

2.1.7溶出度測定方法

照《中華人民共和國藥典》（2015年版）溶出度與釋放度測定法第二法，稱取相當(dāng)于聯(lián)苯雙酯25 mg的固體分散體，裝于1號膠囊殼中進(jìn)行溶出度測定。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%SDS磷酸鹽緩沖液 1 000 mL為溶出介質(zhì)，溶出介質(zhì)溫度恒定在（37 ± 0.5）°C，轉(zhuǎn)速75 r·min-1，依法操作，分別在10、20、30、45、60、90和120 min取樣10 mL，同時(shí)用空白介質(zhì)補(bǔ)足10 mL。樣品經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液1 mL，加甲醇4 mL稀釋后作為供試品溶液。同時(shí)配制約3 mg·L-1的對照品溶液。取上述溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算藥物的累計(jì)溶出度。

2.2 聯(lián)苯雙酯固體分散體的制備

2.2.1樣品的制備

以常用的水溶性載體聚乙二醇6 000（Polyethylene glycol 6000，PEG6000）、聚維酮K30（Povidone K30，PVP K30）和泊洛沙姆188（Poloxamer 188，P188）為載體，制備聯(lián)苯雙酯固體分散體。精密稱取聯(lián)苯雙酯及PEG6000、PVP K30和P188適量，按照藥物與載體質(zhì)量比為1:8的比例將其加入到茄型瓶中，再加入二氯甲烷適量，超聲至完全溶解。將溶液于40 °C條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，然后在真空干燥箱中干燥至有機(jī)溶劑完全揮干，將樣品研磨后過180 μm篩，置于干燥箱中備用。

按照藥物與載體質(zhì)量比為1:8，精密稱取聯(lián)苯雙酯及P188適量，采用等量遞加法混勻后過180 μm篩，作為物理混合物，放置于干燥箱中備用。

2.2.2載體的選擇

取上述三種載體制備的聯(lián)苯雙酯固體分散體（相當(dāng)于聯(lián)苯雙酯25 mg），照“2.1.7”溶出度測定方法，考察不同載體對聯(lián)苯雙酯固體分散體溶出的影響。結(jié)果見圖2。

―DDB;―DDB-PEG6000;―DDB-PVP K30;―DDB-P188

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，三種載體制備的聯(lián)苯雙酯固體分散體中，聯(lián)苯雙酯的體外溶出度均高于聯(lián)苯雙酯原料藥。其中，三種載體對聯(lián)苯雙酯的增溶效果依次為：P188>PVPK30>PEG6000，因此，選用P188為載體，繼續(xù)考察不同載藥量對聯(lián)苯雙酯固體分散體的影響。

2.2.3載體比例的考察

以P188為載體，按藥輔比分別為1:2、1:5、1:8、1:10和1:12制備聯(lián)苯雙酯固體分散體。照“2.1.7”溶出度測定方法，考察不同載藥量對聯(lián)苯雙酯固體分散體溶出的影響。結(jié)果見圖3。

―DDB;―Physical mixture;―m(DDB):m(P188)=1:2;―m(DDB):m(P188)=1:5;―m(DDB):m(P188)=1:8;―m(DDB):m(P188)=1:10;―m(DDB):m(P188)=1:12

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，以P188為載體，不同藥輔比制備的聯(lián)苯雙酯固體分散體中，聯(lián)苯雙酯的體外溶出度均大于其原料藥和物理混合物，且隨著載體比例的增大，聯(lián)苯雙酯溶出度也隨之增大。當(dāng)藥輔比為1:8時(shí)，聯(lián)苯雙酯在30 min內(nèi)溶出度即可達(dá)到90%以上。

綜上，采用溶劑揮發(fā)法，以P188為載體，藥輔比為1:8制備聯(lián)苯雙酯固體分散體。

2.3 聯(lián)苯雙酯-P188固體分散體的表征

2.3.1差示掃描量熱法（differential scanning calorimetry, DSC）

分別精密稱取聯(lián)苯雙酯原料藥、空白載體、物理混合物及固體分散體約3～5 mg置于坩堝中，以空坩堝為參比，置于氮?dú)饬髦校?0 °C·min-1的速率升溫，從30 °C升溫至200 °C 。結(jié)果見圖4。

a―DDB; b―P188; c―Physical mixtue; d―DDB-P188

由掃描結(jié)果可知，聯(lián)苯雙酯原料藥在180.8 °C有吸熱峰，P188在57.5 °C有吸熱峰，物理混合物中存在聯(lián)苯雙酯和P188共同的吸熱峰；而在固體分散體中，聯(lián)苯雙酯的吸熱峰完全消失，說明聯(lián)苯雙酯以無定型或者分子形式存在于固體分散體中。

2.3.2 X射線粉末衍射法（X-ray powder diffraction, XRPD）

分別取聯(lián)苯雙酯原料藥、空白載體、物理混合物及固體分散體適量，進(jìn)行XRPD分析。CuKa靶石墨單色器衍射束單色比，高壓56 kV，單流30 mA，掃描2角度為3～40°，掃描速度為0.2°·s-1。結(jié)果見圖5。

a―DDB; b―P188; c―Physical mixtue; d―DDB-P188

由掃描結(jié)果可知，聯(lián)苯雙酯2在6.30°、12.55°、19.85°、23.80°、25.15°和31.00°存在明顯的晶體衍射峰，P188在19.35°和23.55°處也存在晶體衍射峰，在物理混合物中存在兩者共同的衍射峰，但有部分聯(lián)苯雙酯特征峰強(qiáng)度減弱；而在以P188為載體的固體分散體中，仍然在19.35°和23.55°處存在P188的晶體衍射峰，并不存在聯(lián)苯雙酯的晶體衍射峰，說明聯(lián)苯雙酯以無定型或者分子形式存在于固體分散體中。

2.3.3 紅外光譜法（Infrared Spectroscopy, IR）

分別取聯(lián)苯雙酯原料藥、空白載體、物理混合物及固體分散體適量進(jìn)行IR測定。采用溴化鉀壓片法進(jìn)行測定，波長范圍4 000～400 cm-1，分辨率為4 cm-1。測定結(jié)果見圖6。

a―DDB; b―P188; c―Physical mixtue; d―DDB-P188

由紅外圖譜可知，聯(lián)苯雙酯在1 716.3 cm-1處有明顯的羰基吸收峰，P188在3 454.6 cm-1處有明顯的羥基吸收峰。在物理混合物中，存在兩者的特征峰。在固體分散體中，聯(lián)苯雙酯在1 716.3 cm-1處的羰基吸收峰強(qiáng)度減弱，同時(shí)左移至1 721.3 cm-1，P188在3 454.6 cm-1處的吸收峰強(qiáng)度也明顯減弱，同時(shí)左移至3 457.4 cm-1，說明聯(lián)苯雙酯與P188之間有氫鍵形成。

3 討論

a. 聯(lián)苯雙酯屬于BCSⅡ類藥物，溶解度低是限制其應(yīng)用的首要因素?；诖?，采用溶劑揮發(fā)法制備聯(lián)苯雙酯固體分散體，提高其體外溶出度，以期提高其口服生物利用度。

b. 溶出試驗(yàn)結(jié)果表明，以PEG6000、PVP K30和P188三種載體制備的固體分散體中，以P188為載體制備的固體分散體對聯(lián)苯雙酯增溶作用最強(qiáng)。以P188為載體，不同藥輔比制備的固體分散體中，聯(lián)苯雙酯體外溶出度均高于其原料藥和物理混合物；且當(dāng)藥輔比為1:8時(shí)，聯(lián)苯雙酯在30 min內(nèi)溶出度即可達(dá)到90%以上。DSC、XRPD和IR結(jié)果表明，聯(lián)苯雙酯與P188形成了氫鍵，聯(lián)苯雙酯在固體分散體中以分子形式或無定型存在。

c. 對于難溶性藥物聯(lián)苯雙酯來說，粒徑大小會影響到其體外溶出度，但是，將聯(lián)苯雙酯制備成固體分散體后，聯(lián)苯雙酯在固體分散體中以分子形式或無定型存在，其溶解度會有所提升。因此，后續(xù)沒有考察粒徑大小對聯(lián)苯雙酯固體分散體溶出度的影響。

d. 因?yàn)槁?lián)苯雙酯對熱不穩(wěn)定，因此不建議采用熔融法或者熱熔擠出法等方法制備聯(lián)苯雙酯固體分散體。由于聯(lián)苯雙酯易溶于氯仿、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，最終是以二氯甲烷為溶劑，采用溶劑揮發(fā)法制備聯(lián)苯雙酯固體分散體。對于溶劑殘留問題，由于二氯甲烷沸點(diǎn)很低，易于揮發(fā)，所以將固體分散體在真空干燥箱中40 ℃條件下放置24 h，盡可能完全的除去有機(jī)溶劑。因此，后期將不再對有機(jī)溶劑進(jìn)行檢測。

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Preparation and characterization of bifendate solid dispersions

WANG Qun, WEI Zhongli, LI Qingsong, HE Zhonggui*

(,,110016,)

A solid dispersion of bifendate was prepared to improve thedissolution of bifendate.Bifendate solid dispersions were prepared by solvent evaporation method using PEG6000, PVP K30 and P188 as carriers. Meanwhile, the solid dispersions were characterized by DSC, XRPD and IR.Thedissolution of bifendate was significantly improved in the solid dispersion prepared by three carriers, and the solubilization effect of the three carriers on bifendate was in the order of P188 > PVP K30 > PEG6000. DSC, XRPD and IR results showed that bifendate was in an amorphous or molecular form in the solid dispersions.Thedissolution ofbifendate can significantly improve after it was loaded in the solid dispersions by solvent evaporation method.

pharmaceutics; bifendate; solid dispersions; dissolution

R94

A

（2020）02–0093–08

10.14146/j.cnki.cjp.2020.02.002

2019-05-30

王群（1992-），男（漢族），安徽亳州人，碩士研究生，E-mail wqsyykdx@163.com；

何仲貴（1965-），男（漢族），寧夏鹽池人，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事藥劑學(xué)和生物藥劑學(xué)研究，Tel. 024-23986321，E-mail hezhonggui@vip.163.com。

（本篇責(zé)任編輯：馬麗麗）