黃連上清片與黃連上清丸中黃芩苷、梔子苷、歐前胡素等量性對(duì)比研究

曹恒濤申斌（安陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 安陽(yáng) 455000；安陽(yáng)市婦幼保健院）

黃連上清片與黃連上清丸中黃芩苷、梔子苷、歐前胡素等量性對(duì)比研究

曹恒濤1申斌2
（1安陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 安陽(yáng) 455000；2安陽(yáng)市婦幼保健院）

目的：比較黃連上清片、黃連上清丸的質(zhì)量等量性。方法：通過(guò)測(cè)定樣品中梔子苷、黃芩苷和歐前胡素的含量，比較片劑與丸劑中3種成分的含量差異。結(jié)果：黃連上清片3種成分的含量為4.15，1.056，0.072 mg/劑次；水丸為9.17，2.75，0.049 mg/劑次；蜜丸為5.49，3.79，0.026 mg/劑次。這3種成分之和分別為5.28，11.97，9.31 mg/劑次。結(jié)論：黃連上清丸與黃連上清片這3種成分的含量之間存在明顯的不同，黃連上清片與黃連上清丸這3種成分之和也存在明顯的差異，黃連上清片與黃連上清丸的質(zhì)量不等量。

黃連上清片；黃連上清丸；梔子苷；黃芩苷；歐前胡素；對(duì)比研究

黃連上清丸與黃連上清片為臨床常用中成藥，均收載于《中國(guó)藥典》2010年版［1]。兩者處方相同，功效用法相同，唯劑型不同。兩者因處方相同，同樣的服用量時(shí)，其所含有效成分的含量也應(yīng)相近方能保證功效相近?！吨袊?guó)藥典》2010年版（一部）中規(guī)定了鹽酸小檗堿的含量而對(duì)其他成分含量未進(jìn)行測(cè)定。方中梔子功偏上焦，清熱瀉火，去肺胃實(shí)熱，黃芩清熱燥濕，瀉火解毒，二者皆為君藥；白芷解表散寒，祛風(fēng)止痛，為臣藥，其有效成分歐前胡素為其香豆素類代表成分。本文擬通過(guò)測(cè)定三者中的有效成分：梔子苷、黃芩苷和歐前胡素的含量，比較黃連上清丸與黃連上清片中3種成分含量差異，從而確定其功效是否一致，以達(dá)到改良處方或生產(chǎn)工藝，保證用藥有效的目的。

1儀器與材料

1.1實(shí)驗(yàn)儀器

Waters e2695高效液相色譜儀（美國(guó)waters公司），MSA225-000-DU型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

1.2試劑與樣品

梔子苷（批號(hào)：110749-201115，99.7%），歐前胡素（批號(hào)：110827-201109），黃芩苷（批號(hào)：110715-201117，91.7%），均為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。乙腈（色譜純，J.T.Baker公司）。超純水為Molecular純水機(jī)制備。黃連上清片、黃連上清丸購(gòu)于市場(chǎng)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：WatersSymmetry C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈，水；檢測(cè)器：waters 2998 PDA檢測(cè)器，240 nm處檢測(cè)梔子苷，300 nm處檢測(cè)黃芩苷及歐前胡素；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃。流動(dòng)相梯度如表1。對(duì)照品圖譜、樣品圖譜和陰性樣品圖譜見圖1。

表1　　流動(dòng)相梯度

圖1　黃連上清片高效液相色譜圖

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取梔子苷、黃芩苷和歐前胡素，加甲醇配制成濃度分別為0.127 9 mg/mL及83.117，4.011 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取黃連上清片10片（水丸10 g），糖衣片除去糖衣，研細(xì)，精密稱取2 g（水丸精密稱取4 g）；或取重量差異項(xiàng)下大蜜丸，剪碎，精密稱取4 g，加硅藻土4 g，研細(xì)。置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，即得。

2.4陰性對(duì)照樣品的制備

按處方制備缺黃芩、梔子、白芷的陰性對(duì)照樣品，照“2.3”項(xiàng)下方法制得陰性樣品溶液。

2.5線性關(guān)系的考察

取“2.2”中對(duì)照品溶液按“2.1”色譜條件分別進(jìn)樣 1，2，5，10，20，30和 40 μL并測(cè)定峰面積。以峰面積（Y，A）和進(jìn)樣量（X，μg）做標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，梔子苷在0.128～2.558 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：

Y=1 221 760.2X+30 384.2（r=0.999 6）；

黃芩苷在 0.083～ 3.325 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：

Y=3 450 113.5X-31 148.7（r=0.999 9）；

歐前胡素在0.004 01～ 0.160 44 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：

Y=4 711 175.81X-2 340.98（r=0.999 9）。

2.6精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各成分的峰面積。結(jié)果梔子苷RSD為0.66%；黃芩苷RSD 為1.51%；歐前胡素RSD為1.15%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液，分別在0，2，5，12，24 h測(cè)定含量。梔子苷RSD為0.66%，黃芩苷RSD為1.51%，歐前胡素RSD為1.15%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

同一樣品按“2.3”方法制備供試品溶液6份，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果梔子苷含量的RSD為4.1%，黃芩苷含量的RSD為2.25%，歐前胡素含量的RSD為2.03%。

2.9加樣回收率測(cè)定

取樣品片劑30片，糖衣片除去糖衣，研細(xì)，精密稱取0.45 g 6份。分別精密加入歐前胡素0.026 74 mg，黃芩苷0.415 584 mg，梔子苷1.023 2mg，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。

2.10樣品測(cè)定

取樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，并轉(zhuǎn)換為每次服用量的含量（mg/劑次）。結(jié)果見表3。

3討論

3.1因梔子苷在 300 nm處無(wú)紫外吸收而黃芩苷和歐前胡素在240 nm無(wú)紫外吸收，因此采用PDA檢測(cè)器檢測(cè)，并在不同的波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算含量。

3.2大蜜丸因含蜂蜜而不能粉碎，且甲醇超聲或加熱回流并不能使大蜜丸在溶液中徹底分散。在大蜜丸中加入不等量的硅藻土研細(xì)后依法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不等量硅藻土并不會(huì)影響3種成分的含量。因此本文采用大蜜丸加硅藻土適量研細(xì)后再提取的方法來(lái)改進(jìn)提取效率。

3.3中藥復(fù)方制劑質(zhì)量的不均一性仍然是影響其質(zhì)量的首要問(wèn)題，質(zhì)量的不均一也是使得中藥復(fù)方制劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)無(wú)法確切說(shuō)明的重要原因之一［2]。劉睿［3]對(duì)中藥注射劑的研究也指出，各個(gè)生產(chǎn)步驟的工藝條件不同，批間操作一致性差，導(dǎo)致中藥注射劑質(zhì)量難以保證均一穩(wěn)定。為減少因工藝差異引起的誤差，選用水丸作為比較。本文測(cè)定的3批水丸樣品的梔子苷含量相差近4倍，黃芩苷相差近3倍，歐前胡素相差近8倍。分析這種差異可能的原因是原料藥材的質(zhì)量有差別，或者未按處方量投料。而11批樣品中有兩批蜜丸未檢出歐前胡素，應(yīng)當(dāng)是投料時(shí)未投白芷，這與張少君等［4]的研究結(jié)論是一致的。因此要保證藥品質(zhì)量或者功效的均一性，原料藥材的均一性和生產(chǎn)工藝的均一性缺一不可。

表2　　黃連上清片加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表3　樣品含量測(cè)定結(jié)果?。╩g/劑次）

3.4黃連上清丸、黃連上清片其處方、用法與功效相同，一次服用量時(shí)其有效成分含量應(yīng)相當(dāng)。對(duì)于藥材的處理會(huì)使藥材中的有效成分有所損失，因此依據(jù)生產(chǎn)工藝推測(cè)，有效成分的含量為水丸＞蜜丸 ＞ 片劑，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為 11.97，9.31，5.28 mg/劑次，證明了這一推論。

3.5黃連上清片的一次服用量的3個(gè)成分的總計(jì)為5.28 mg/劑次，而水丸為11.97 mg/劑次，蜜丸為9.31 mg/劑次，黃連上清片的3種待測(cè)成分與丸劑相應(yīng)成分相差近2倍，說(shuō)明兩者的質(zhì)量不等量，進(jìn)而功效相差懸殊。因此欲使黃連上清片達(dá)到與黃連上清丸相同的功效，應(yīng)當(dāng)修改黃連上清片的服用量、處方或者生產(chǎn)工藝，使有效成分與黃連上清丸相當(dāng)，才能保證用藥的有效。

［1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1067-1068.

［2]唐顯虹.不同廠家黃連上清片特征指紋圖譜比較［J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（24）：67-71.

［3]劉睿.中藥注射劑質(zhì)量控制的研究進(jìn)展［J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師，2013，10（3）：37-42.

［4]張少君，車燕妮，蘇秀娟，等.高效液相色譜法構(gòu)建黃連上清丸指紋圖譜［J].中國(guó)科技信息，2013，（19）：32-35.

Compartive Study on Quality Equivalence of Geniposide，Baicalin and Imperatorin in Huanglianshangqing Tablets and Huanglianshangqing Pills

Cao Hengtao1，Shen Bin2（1 Anyang City Institute of Food and Drug Control，Henan Anyang 455000，China；2 Anyang Maternal and Child Health Care Hospital）

Objective：To compare the quality equivalence of huanglianshangqing tablets and huanglianshangqing pills.Methods：The contents of geniposide，baicalin and imperatorin in huanglianshangqing tablets and pills were determined and compared.Results：The contents ofgeniposide，baicalin and imperatorin in huanglianshangqing tablets were 4.15，1.056 and 0.072 mg/dose while those in water pills were 9.17，2.75 and 0.049 mg/dose，those in honeyed pills were 5.49，3.79 and 0.026 mg/dose，and the sums of the three components were 5.28，11.97 and 9.31 mg/dose，respectively.Conclusion：The contents and sums of three components were significantly different in huanglianshangqing tablets and pills，indicating that the qualities of the tablets and pills were non-equivalent. KEY WORDSHuanglianshangqing Tablets；Huanglianshangqing Pills；Geniposide；Baicalin；Imperatorin；Comparative Study

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.05.005

曹恒濤，男，碩士，主管中藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：aycht@163.com

2016-02-05）