福州地區(qū)健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及主要活化相關(guān)指標(biāo)正常參考范圍的建立

林珊，高虹，李晶，林潔，張忠龍，林世光，陳新弟

(1、福建省福州兒童醫(yī)院，福建福州350005；2、福州市婦幼保健院，福建　福州350005)

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福州地區(qū)健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及主要活化相關(guān)指標(biāo)正常參考范圍的建立

林珊1，高虹2，李晶1，林潔1，張忠龍1，林世光1，陳新弟1

(1、福建省福州兒童醫(yī)院，福建福州350005；2、福州市婦幼保健院，福建福州350005)

摘要：目的建立福州地區(qū)健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化的正常參考范圍。方法選取福州地區(qū)0～18歲健康兒童593例為研究對象，按年齡分為新生兒組（0～28d）、嬰兒組（～12個月）、幼兒組（～3歲）、學(xué)齡前組（～7歲）、學(xué)齡組（～12歲）和少青組（～18歲），采集外周血以美國BD公司生產(chǎn)的四色熒光抗體進(jìn)行標(biāo)記，以FACSCalibur流式細(xì)胞儀測定T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、B淋巴細(xì)胞亞群CD3-CD19+、NK細(xì)胞CD3-CD16+CD56+及淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+、CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數(shù)，以MultiSET軟件獲取數(shù)據(jù)并分析結(jié)果，SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。以百分位數(shù)法，采用95%可信區(qū)間確定正常參考值范圍。結(jié)果除CD3-CD16+56+絕對計數(shù)在各年齡組間無差異外，淋巴細(xì)胞亞群及淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)在不同年齡組之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，表現(xiàn)為CD3+絕對計數(shù)、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和絕對計數(shù)、CD4+/CD8+比值隨著年齡的增長呈降低趨勢。CD4+Anti-HLA-DR+的百分率隨著年齡的增長呈增高趨勢。新生兒組CD3+、CD3+CD4+、CD4＋CD38＋、CD8＋CD38＋的百分率和絕對計數(shù)及CD4＋/CD8＋比值明顯高于其它年齡組，CD3-CD19＋、CD8＋Anti-HLA-DR＋的百分率和絕對計數(shù)明顯低于其它年齡組。在不同性別之間CD3+CD4+和CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4＋Anti-HLA-DR＋和CD8＋CD38＋的百分率和絕對計數(shù)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表現(xiàn)為女童明顯低于男童。兒童淋巴細(xì)胞亞群絕對計數(shù)的參考值高于成人。結(jié)論健康兒童淋巴細(xì)胞免疫表型的分布存在性別和年齡差別，由于這種差別細(xì)微，可以在同一種族同一區(qū)域建立統(tǒng)一的正常參考值范圍。本研究成功建立福州地區(qū)健康兒童淋巴細(xì)胞亞群及活化的正常參考范圍。

關(guān)鍵詞：淋巴細(xì)胞亞群；淋巴細(xì)胞活化；流式細(xì)胞術(shù)；兒童；正常參考值

目前國內(nèi)尚沒有統(tǒng)一的健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群的正常參考值，臨床工作中主要參考由儀器試劑供應(yīng)商提供的國外數(shù)據(jù)[1]，可能會對中國兒童疾病狀態(tài)下免疫功能的判斷造成一定的偏差。隨著感染性疾病、免疫性疾病及各種腫瘤的發(fā)病率的上升，人們對發(fā)病機(jī)制、病程發(fā)展、治療效果進(jìn)行深入研究，發(fā)現(xiàn)疾病的發(fā)生與機(jī)體免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)[2，3]，淋巴細(xì)胞是構(gòu)成免疫系統(tǒng)和執(zhí)行免疫功能的主要細(xì)胞群體。進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群分析，對于了解機(jī)體免疫功能狀態(tài)有重要的臨床意義，為此，本研究對593例健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析，以建立福州地區(qū)健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化的正常參考范圍，現(xiàn)報告如下。

1　對象與方法

1.1研究對象選取在福建省福州地區(qū)進(jìn)行健康體檢或術(shù)前查體（均為對免疫功能影響不大的疾病如腹股溝斜疝、包莖、鞘膜積液等）的0～18歲健康兒童為研究對象，所有研究對象均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：外周血細(xì)胞計數(shù)、肝腎功能、X線檢查均正常，無明顯的心、腦血管疾病，無先天性免疫缺陷性疾病和自身免疫性疾病，近期無感染性疾病，無急性時相反應(yīng)，無HBV、HCB、HIV和梅毒等慢性感染性疾病，近期未使用過影響免疫系統(tǒng)的藥物。根據(jù)《諸福棠實用兒科學(xué)》[4]，按年齡分為新生兒組（0～28d）83例、嬰兒組（～12個月）97例、幼兒組（～3歲）98例、學(xué)齡前組（～7歲）106例、學(xué)齡組（～12歲）103例和少青組（～18歲）106例，共593例，其中男308例，女285例。采集外周靜脈血2ml，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝。

1.2檢測方法⑴儀器：美國BD公司的FACSCalibur型流式細(xì)胞儀。⑵試劑：采用美國BD公司的淋巴細(xì)胞亞群分析試劑，熒光標(biāo)記4色單克隆抗體，CD3 -FITC/CD8 -PE/CD45 -PerCP/CD4 -APC、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC，CD8-FITC/CD38-PE/CD3-PerCP/Anti-HLA-DRAPC、CD4-FITC/CD38-PE/CD3-PerCP/Anti-HLADR-APC，使用配套的溶血劑(FACS Lysing Solution)，熒光校正微球（CaliBRITEBeads）分別為：Unlabeled Beads、APC Beads、FITC Beads、PE Beads、PerCP Beads。⑶標(biāo)本制備：按照試劑使用說明書的要求，每份樣本用流式細(xì)胞儀專用試管，分別加入20μl MultiTEST單抗試劑于TruCONT管中，加入50μl EDTA抗凝全血，混勻在室溫暗處放置15min，加入450μl10%FACS溶血素，混勻在室溫暗處放置15min，上機(jī)獲取標(biāo)本數(shù)據(jù)。⑷儀器校正：上機(jī)前使用BD公司專用的熒光校正微球?qū)α魇郊?xì)胞儀進(jìn)行校正，包括光電倍增管電壓的調(diào)節(jié)、熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)，以及靈敏度的測試等，使流式細(xì)胞儀處于最佳的運行狀態(tài)。⑸結(jié)果分析：應(yīng)用Multi-SET軟件測定淋巴細(xì)胞亞群包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+56+的百分率和絕對計數(shù)及CD4+/CD8+比值；用CellQUEST Pro軟件測定淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+，CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數(shù)并分析結(jié)果。⑹質(zhì)量控制：數(shù)據(jù)均由同一技術(shù)人員（本文第一作者）在同一標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行讀取，數(shù)據(jù)分析和離群值的剔除則由本文3名作者共同完成。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，檢測結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間均數(shù)差異比較采用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。以百分位數(shù)法確定95%可信區(qū)間建立正常值范圍。

2　結(jié)果

2.1不同年齡組健康兒童淋巴細(xì)胞亞群及活化結(jié)果淋巴細(xì)胞亞群及淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)除CD3-CD16+56+絕對計數(shù)在各年齡組間無差異（P>0.05）外，其余各個指標(biāo)在不同年齡組之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但各年齡組各種免疫表型均數(shù)與合并年齡組后的總體差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05），結(jié)果見表1、表2。結(jié)果顯示，CD3+絕對計數(shù)、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和絕對計數(shù)、CD4+/ CD8+比值隨著年齡的增長呈降低趨勢，CD4+Anti-HLA-DR+的百分率隨著年齡的增長呈增高趨勢。新生兒組CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和絕對計數(shù)及CD4+/CD8+比值明顯高于其它年齡組，CD3-CD19+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數(shù)明顯低于其它年齡組。

表1　不同年齡組健康兒童T淋巴細(xì)胞亞群免疫表型結(jié)果（±s）

表1　不同年齡組健康兒童T淋巴細(xì)胞亞群免疫表型結(jié)果（±s）

CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋年齡組　例數(shù)　百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）CD3＋CD4＋CD8＋CD3-CD19＋CD3-CD16＋56＋絕對計數(shù)（個/μl)新生兒組嬰兒組幼兒組學(xué)齡前組學(xué)齡組少青組合計F值P值83 97 98 106 103 106 593 78.5±7.0 64.6±7.0 66.8±5.6 67.6±5.9 66.4±5.5 65.2±7.1 67.5±7.4 43.0 <0.05 4484±1130 4691±1741 3590±1093 2566±671 2178±715 2030±705 3053±1428 111 P<0.05 54.5±7.6 40.9±6.4 37.4±5.8 34.1±5.9 31.5±5.6 31.9±5.5 36.8±9.1 145 <0.05 3111±831 2970±1181 2006±681 1289±372 1037±426 993±368 1724±1031 175 <0.05 22.9±7.3 21.1±6.4 24.1±4.6 26.2±5.7 27.2±6.7 27.39±6.1 25.2±6.5 14.8 <0.05 1330±564 1549±887 1299±477 1008±363 879±335 850±325 1110±556 28.4 <0.05百分比（%）0.45±0.50 0.92±0.29 0.05±0.26 0.02±0.13 0.11±0.37 0.14±0.38 0.13±0.38 4.8 <0.05絕對計數(shù)（個/μl) CD4＋/CD8＋百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl) 27.9±14.7 20.2±18.1 11.1±13.9 7.7±5.6 8.8±9.1 10.3±8.1 13.1±14.6 33.9 <0.05 2.61±0.99 2.16±0.91 1.63±0.49 1.39±0.54 1.20±0.34 1.24±0.40 1.60±0.80 74.7 <0.05 11.1±4.2 26.1±6.8 21.9±4.8 19.8±10.3 16.1±4.5 15.4±4.1 18.5±7.7 53.1 <0.05 641±255 1894±796 1165±395 726±284 548±310 489±212 872±615 148 <0.05 8.7±6.1 7.3±4.3 7.8±4.6 8.8±4.0 11.2±4.9 16.1±6.8 10.3±6.0 39.9 <0.05 542±515 557±508 431±316 330±178 376±218 513±281 443±340 2.2 >0.05

表2　不同年齡組健康兒童淋巴細(xì)胞活化結(jié)果（±s）

表2　不同年齡組健康兒童淋巴細(xì)胞活化結(jié)果（±s）

年齡組　例數(shù)　百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl) CD4＋CD38＋CD4＋Anti-HLA-DR＋新生兒組嬰兒組幼兒組學(xué)齡前組學(xué)齡組少青組合計F值P值83 97 98 106 103 106 593 52.1±5.8 44.8±8.1 35.1±6.6 27.8±6.0 22.9±6.1 19.3±5.7 31.3±12.5 320.5 <0.05 3101±902 2824±1020 1777±659 1050±309 852±627 616±285 1506±1088 216 <0.05 2.09±1.88 2.17±1.40 2.19±0.97 2.18±0.82 2.31±0.80 2.73±1.11 2.30±1.16 4.2 <0.05 CD8＋CD38＋CD8＋Anti-HLA-DR＋126±121 128±76 110±65 87±59 88±102 87±46 101±80 5.1 <0.05 21.5±6.5 21.4±6.0 21.9±5.6 18.5±4.5 16.0±3.9 12.9±4.0 18.3±6.0 51.7 <0.05 1307±560 1341±656 1067±419 699±274 554±278 402±187 828±528 87.2 <0.05百分比（%）1.39±2.33 4.38±4.07 5.69±3.55 4.94±2.37 5.78±4.26 5.83±2.76 4.96±3.57 18.0 <0.05絕對計數(shù)（個/μl) 90±140 287±352 287±226 186±106 192±152 182±106 208±200 11.4 <0.05

2.2不同性別淋巴細(xì)胞亞群及活化結(jié)果CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和絕對計數(shù)在不同性別組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表現(xiàn)為女童明顯低于男童，但男女分別與合并性別后的總體差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見表3、表4。

2．3福州地區(qū)健康兒童淋巴細(xì)胞亞群及活化指標(biāo)參考值范圍盡管性別和年齡對健康兒童淋巴細(xì)胞亞群及活化指標(biāo)分布有差別，由于這種差別細(xì)微，可以建立統(tǒng)一的參考值范圍。本研究以百分位數(shù)法，采用國際臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)推薦的95%可信區(qū)間確定參考值，結(jié)果見表5、表6。

2．4國內(nèi)外不同地域健康人淋巴細(xì)胞亞群參考值比較本研究建立的健康兒童淋巴細(xì)胞亞群參考值與BD公司提供的歐美人以及國內(nèi)外文獻(xiàn)建立的正常成人或兒童的參考值比較，表現(xiàn)為各項目的百分率范圍及CD4＋/CD8＋的比值均較一致，而絕對計數(shù)均高于文獻(xiàn)中的成人范圍，與以兒童為研究對象[9，18]的結(jié)果接近，結(jié)果見表7。

3　討論

本研究采用美國BD公司的流式細(xì)胞儀及配套的四色淋巴細(xì)胞亞群分析試劑盒，該試劑盒具有良好的穩(wěn)定性，并應(yīng)用MultiSET軟件以CD45-SSC點圖設(shè)門（Gating）測定淋巴細(xì)胞亞群，應(yīng)用CellQuest Pro軟件以CD3-SSC點圖設(shè)門測定淋巴細(xì)胞的活化指標(biāo)。上機(jī)前使用專用的熒光校正微球?qū)α魇郊?xì)胞儀進(jìn)行校正，使儀器各項指標(biāo)在質(zhì)控允許值范圍，保證了數(shù)據(jù)產(chǎn)生的一致性和可靠性。流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展使細(xì)胞免疫功能的檢測邁上了一個新臺階，目前，臨床使用流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞亞群靈敏度高、重復(fù)性好，是一種快速、準(zhǔn)確的評估和檢測機(jī)體免疫狀態(tài)的方法[5]。

受生態(tài)環(huán)境、社會經(jīng)濟(jì)等多種因素影響，不同地區(qū)、不同種族、不同年齡、不同性別正常人群淋巴細(xì)胞亞群存在差異。Klose等研究比較發(fā)現(xiàn)，德國布基那法索地區(qū)、新加坡和坦桑尼亞地區(qū)正常成年人CD3+、CD4+及CD19+絕對計數(shù)有顯著差異[6]；浙江省與北京地區(qū)健康成年人相比，CD3+絕對值有顯著差異，這種差異也存在于國內(nèi)其它地區(qū)

表3　不同性別健康兒童淋巴細(xì)胞免疫表型結(jié)果（±s）

表3　不同性別健康兒童淋巴細(xì)胞免疫表型結(jié)果（±s）

CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋年齡組　例數(shù)　百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）CD3＋CD4＋CD8＋CD3-CD19＋CD3-CD16＋56＋絕對計數(shù)（個/μl)男女合計308 285 593 t（男～女）值t（男～合）值t（女～合）值P（男～女）值P（男～合）值P（女～合）值67.9±7.6 67.1±7.1 67.5±7.4 1.33 3073±1476 2852±1349 3053±1428 1.90 37.5±9.2 36.0±8.9 36.8±9.1 2.02 1.08 1.24 <0.05 >0.2 >0.2 1845±1055 1590±988 1731±1044 3.03 1.54 1.57 <0.005 >0.1 >0.1 25.2±6.3 25.3±6.6 25.2±6.5 0.19絕對計數(shù)（個/μl) CD4＋/CD8＋百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl) 1178±525 1035±458 1110±556 0.002 >0.05>0.05>0.05百分比（%）0.14±0.38 0.11±0.39 0.13±0.38 0.97 14.6±6.6 14.5±5.5 13.1±14.6 0.2 1.63±0.79 1.57±0.71 1.60±0.75 0.5 9.8±6.0 10.7±5.9 10.3±6.0 1.84 449±352 437±328 443±340 0.29 >0.05>0.2 >0.2>0.5 19.2±8.7 17.7±6.1 18.5±7.7 2.44 1.19 1.67 <0.01 >0.2 >0.05 950±679 786±522 872±614 3.3 1.69 1.95 <0.01 >0.05 >0.05 >0.05>0.05

表4　不同性別健康兒童淋巴細(xì)胞活化結(jié)果（±s）

表4　不同性別健康兒童淋巴細(xì)胞活化結(jié)果（±s）

性別　例數(shù)　百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl)百分比（%）絕對計數(shù)（個/μl) CD4CD38CD4Anti-HLA-DR男女合計308 285 593 t（男～女）值t（男～總）值t（女～總）值P（男～女）值P（男～總）值P（女～總）值32.3±12.4 29.7±12.4 31.3±12.5 2.55 1.14 1.78 <0.05 >0.2 >0.05 1605±1093 1399±1074 1506±1088 2.32 1.29 1.38 <0.05 >0.1 >0.1 2.43±1.17 2.17±1.13 2.30±1.16 2.12 1.19 1.22 <0.0 >0.2 >0.05 CD8CD38CD8Anti-HLA-DR 108±85 93±73 101±80 2.34 1.25 1.45 <0.05 >0.2 >0.1 19.0±6.4 17.5±5.5 18.3±6.0 3.07 1.59 1.72 <0.05 >0.1 >0.05 884±556 767±489 828±528 2.7 1.45 1.68 <0.05 >0.1 >0.05百分比（%）5.17±3.95 4.73±3.09 4.96±3.57 1.71 1.10 1.27 >0.05 >0.2 >0.2絕對計數(shù)（個/μl) 220±219 194±176 208±200 1.60 0.84 1.02 >0.1 >0.2 >0.2＋＋＋＋＋＋＋＋

表6　福州地區(qū)0～18歲健康兒童淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)正常參考范圍（百分位數(shù)法確定95%可信區(qū)間）

[7，8，11]。年齡和性別也存在差異，由于兒童處于生長發(fā)育階段，其免疫系統(tǒng)經(jīng)歷逐漸成熟的過程，不同的生長發(fā)育階段淋巴細(xì)胞亞群分布亦不同，國外研究表明[10]，淋巴細(xì)胞亞群分化及抗原表達(dá)與年齡緊密相關(guān)，嬰幼兒期表達(dá)CD4+和CD3-CD19+的百分率與絕對計數(shù)高于成人，且隨年齡增加而減低；而CD8+和CD3-CD16+CD56+的百分率與絕對計數(shù)高于成人，并隨著年齡增加而增加。肖婧等報道[8]兒童淋巴細(xì)胞亞群分布存在明顯年齡和性別的差異，男女兒童各年齡組間外周血淋巴細(xì)胞亞群分布總體上有顯著差異，而男女性別間CD3+、CD3+CD4+和CD3-CD56+的百分率和絕對值比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。因此不同地區(qū)的不同人群應(yīng)建立本地區(qū)統(tǒng)一的正常參考值范圍。但是由于使用流式細(xì)胞術(shù)調(diào)查外周血淋巴細(xì)胞亞群正常參考值的成本較高等因素，目前尚無中國健康兒童不同年齡外周血淋巴細(xì)胞亞群較為科學(xué)的參考范圍，只有為數(shù)不多的實驗室建立了自己的參考值[7-9，11，12]，大多數(shù)實驗室使用的都是國外的參考值，顯然不適合中國人的疾病診斷和治療。T細(xì)胞活化是T細(xì)胞特異性識別抗原提呈細(xì)胞所提呈的抗原肽-組織相容性復(fù)合物分子，并被激活和發(fā)生增殖，進(jìn)而分化為效應(yīng)細(xì)胞的過程，與病毒感染有關(guān)，活化指標(biāo)比常規(guī)使用的T細(xì)胞亞群更敏感，可用于監(jiān)測抗病毒治療后患者是否出現(xiàn)全面的免疫重建，健康兒童淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)的調(diào)查及正常參考范圍國內(nèi)未見報道?；罨馨图?xì)胞的標(biāo)志表達(dá)在T細(xì)胞活化的不同時期[13，14]，CD38表達(dá)在胸腺細(xì)胞、活化T淋巴細(xì)胞等免疫系統(tǒng)中，CD38分子通過對激活信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進(jìn)T細(xì)胞的激活，在T、B淋巴細(xì)胞分化的早期表達(dá)，在成熟中期丟失，在成熟晚期又出現(xiàn)，被認(rèn)為是常用的活化淋巴細(xì)胞標(biāo)志物；HLA-DR是MHCⅡ類抗原，表達(dá)在B細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、活化T細(xì)胞、活化NK細(xì)胞和人祖細(xì)胞，HLA-DR是T細(xì)胞晚期活化的標(biāo)志。文獻(xiàn)報道[15，16]，在兒童常見感染性疾病中，EB病毒(EBV)感染后患兒急性期CD3+、CD8+、CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+和CD8+CD38+比例明顯增高，CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD8+CD38+比例與患兒體溫呈負(fù)相關(guān)，巨細(xì)胞病毒(CMV)感染患兒CD8+CD38+比例顯著高于肺炎支原體(MP)感染患兒，MP感染患兒急性期淋巴細(xì)胞CD3+細(xì)胞比例顯著低于正常兒童，CD8+CD38+細(xì)胞比例顯著低于柯薩奇病毒(COX)感染患兒。SARS患者CD4+CD38+的表達(dá)降低[17]，降低的水平與SARS病情嚴(yán)重程度相關(guān)，CD4+CD38+的表達(dá)的檢測有助于SARS與肺炎支原體感染的鑒別。為此，本研究對593例健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞部分活化指標(biāo)CD38、HLA-DR進(jìn)行了檢測，以建立福州地區(qū)健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化正常參考范圍，以便為臨床研究機(jī)體的免疫功能以及免疫相關(guān)性疾病提供可靠的診斷依據(jù)。

表7　國內(nèi)外文獻(xiàn)建立淋巴細(xì)胞亞群參考值比較

本結(jié)果顯示健康兒童各年齡組之間淋巴細(xì)胞亞群及活化指標(biāo)除CD3-CD16+56+絕對計數(shù)外，其余各項指標(biāo)CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+的百分率和絕對計數(shù)以及CD3-CD16+56+的百分率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，CD3+絕對計數(shù)、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和絕對計數(shù)、CD4+/CD8+比值隨著年齡的增長呈降低趨勢，與國內(nèi)報道[8，12]一致。本研究顯示CD3＋CD8+、CD4+Anti-HLA-DR+的百分率隨著年齡的增長呈增高趨勢。本研究同時顯示不同性別之間淋巴細(xì)胞亞群及活化結(jié)果，CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和絕對計數(shù)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表現(xiàn)為女童明顯低于男童，與國內(nèi)報道[8]一致，但男女分別與合并性別后的總體差別無統(tǒng)計學(xué)意義。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+56+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數(shù)在不同性別組之間無顯著性差異。本研究建立的健康兒童淋巴細(xì)胞亞群參考值與BD公司提供的歐美人以及國內(nèi)外不同地區(qū)文獻(xiàn)[7-12]建立的正常成人或兒童的參考值比較，表現(xiàn)為各項目的百分率范圍及CD4+/CD8+的比值均相近，而絕對計數(shù)均高于文獻(xiàn)中的成人范圍，但與以兒童為研究對象的廣州地區(qū)[9]及美國芝加哥Thomas[18]的報道一致，而少青組的絕對計數(shù)接近成人水平，我們認(rèn)為主要與兒童期尤其是7歲以前淋巴細(xì)胞生理性增多有關(guān)，同時提示存在種族及地區(qū)差異，也與不同實驗室使用流式細(xì)胞儀不同和選擇參考值統(tǒng)計學(xué)方法不同有關(guān)。由于新生兒自身的免疫功能尚未完全的生理特點，本研究特色之處在于收集了83例新生兒分析淋巴細(xì)胞亞群及活化，國內(nèi)未見此年齡組的相關(guān)報道。結(jié)果顯示，新生兒組CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和絕對計數(shù)及CD4+/CD8+比值明顯高于其它年齡組，與國外報道[13]相似，但百分率的中位數(shù)（比國外）CD3+（78%比83%）、CD3+CD4+（55%比63%）均低于國外報道。而CD3-CD19+、CD8+Anti-HLA-DR＋的百分率和絕對計數(shù)明顯低于其它年齡組，與Maurice[19]報道在新生兒和成人之間CD8+Anti-HLA-DR+水平及B淋巴細(xì)胞的比例沒有差異不同。由于收集新生兒標(biāo)本難度，本組雖然例數(shù)相對較少，但研究中產(chǎn)生的正常范圍應(yīng)該為新生兒淋巴細(xì)胞亞群及活化的變化的評估提供了一個有意義的新工具。

通過以上分析，本文認(rèn)為不同地域、不同種族、不同性別、不同年齡間健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化指標(biāo)存在著差異，由于這種差別細(xì)微，可以在同一種族同一區(qū)域建立統(tǒng)一的正常參考值范圍。本研究所得結(jié)果基本能反映本地區(qū)健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化指標(biāo)的水平，本研究成功建立福州地區(qū)健康兒童淋巴細(xì)胞亞群及活化的正常參考范圍作為正常范圍參考值，對監(jiān)測和評價機(jī)體免疫功能，對疾病的診斷分期、治療評價、和預(yù)后判斷有重要指導(dǎo)意義。

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中圖分類號：R446.62

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0298-06

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.013

基金項目：福州市科技計劃項目（編號2013－S－127－4）

作者簡介：林珊，1968年2月出生，女，主任技師，主要從事臨床血液免疫學(xué)檢驗研究。

(收稿日期2016-03-10；修回日期2016-05-04)

Establishment of the reference ranges for normal values of peripheral blood lymphocyte subsets and the main related pa -rameters of activation for healthy children in Fuzhou areas

LIN Shan，GAO Hong，LI Jing，et al. Department of Clinical labo-ratory，F(xiàn)ujian Province Fuzhou Children Hospital，F(xiàn)uzhou 350005，F(xiàn)ujian Province，China.

Abstract：Objective To establish the reference range of peripheral blood Lymphocyte subsets and the main related parameters of activation for healthy children in Fuzhou areas. Methods A total of 593 peripheral blood samples were collected from healthy children aged from 0 to 18 years in the study. The included children were divided into newborn group(0-28d)，infant group (28d-12m)，toddler age group(1-3y)，preschool age group(3-7y)，school age group(7-12y) and adolescence age group(12-18y). The percentages and absolute counts of lymphocyte subsets of T cell CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，B cell CD3-CD19+，NK cell CD3-CD16+CD56+and activated T cells CD4+CD38+，CD4+Anti-HLA-DR+，CD8+CD38+，CD8+Anti-HLA-DR+were detected by flow cytometry with four-color fluorescent monoclonal antibody. MultiSET software was used to collect and analyze data，and statistical analysis was performed using SPSS 10.0. 95% confidence interval was used to determine normal reference values. Results Except for the absolute counts of CD3-CD16+56+，percentages and absolute counts of all the lymphocyte subsets and lymphocyte activation index showed significant differences between different age groups. Absolute counts of CD3+T cell，lymphocyte percentages and absolute counts of CD3+CD4+，CD4+CD38+and the ratio of CD4+/CD8+were declined with age. CD4+Anti-HLA-DR+percentage was increased with age. The percentages and absolute counts of CD3+，CD3+CD4+，CD4+CD38+，CD8+CD38+and the ratio of CD4+/CD8+in newborn group showed significantly higher than those in other age groups，while the percentages and absolute counts of CD3-CD19+and CD8+Anti-HLA-DR+showed significantly lower than those in other age group. The percentages and absolute counts of CD3+CD4+，CD3-CD19+，CD4+CD38+，CD4+Anti-HLA-DR+and CD8+CD38+showed significant differences between males and females，and those in females were significantly lower than males. The absolute counts of lymphocyte in children were higher than in adults. Conclusions The distribution of immunophenotype of peripheral blood lymphocyte in healthy children showed slight differ-ence in gender and among different age groups，so the uniform reference range of Lymphocyte subsets and activated T cells in healthy children could be established in the same area and the same race. The reference ranges of lymphocyte subsets and activated T cells could be proposed by the present study for healthy children in Fuzhou Areas.

Key words:Lymphocyte subsets；Activated lymphocyte；Flow cytometry；Child；Normal reference value