2 816例婦女宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒的檢測結(jié)果分析

楊笑瓊,肖　翔,鐘陽青,張達(dá)秀

(廣東省東莞市塘廈醫(yī)院檢驗(yàn)科　523721)

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·臨床研究·

2 816例婦女宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒的檢測結(jié)果分析

楊笑瓊,肖翔,鐘陽青,張達(dá)秀

(廣東省東莞市塘廈醫(yī)院檢驗(yàn)科523721)

摘要:目的了解東莞地區(qū)婦女宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒(HPV)的感染情況和基因型分布特點(diǎn)。方法收集2014年1月至2015年10月該院就診的婦女宮頸脫落細(xì)胞，進(jìn)行HPV基因分型檢測。采用深圳亞能公司生產(chǎn)的核酸提取試劑、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑和反向斑點(diǎn)雜交(RDB)試劑檢測23種常見的HPV基因型。統(tǒng)計(jì)HPV的感染率和基因型分布特點(diǎn)。結(jié)果總共檢測2 816例標(biāo)本，HPV陽性標(biāo)本數(shù)為1 018例，總感染率為36.15%，其中高危型占68.86%(701/1 018)，低危型占31.14%(317/1 018)。高危型以HPV52、58、18 3種亞型為主，分別占13.7%(139/1 018)、7.0%(71/1 018)和4.9%(50/1 018)，低危型以HPV6、16、43 3種亞型為主，分別占11.3%(115/1 018)、10.6%(108/1 018)、9.3%(95/1 018)。<20歲、20～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲、>60歲年齡組的HPV感染率分別為24.36%、33.27%、41.96%、38.24%、30.11%、33.62%。HPV單一感染率為68.27%，混合感染率為31.73%。結(jié)論東莞地區(qū)HPV感染率較高，應(yīng)加強(qiáng)HPV的篩查。

關(guān)鍵詞:人乳頭瘤病毒;基因型;流行病學(xué)調(diào)查

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。HPV持續(xù)感染是引起宮頸癌的必要因素，90%以上的患者有HPV感染[1]。據(jù)報(bào)道，全球約有2.91億婦女感染HPV，宮頸癌已成為全世界女性常見的惡性腫瘤。不同的HPV基因型具有不同的致病性，一般將其分為高危型和低危型。HPV感染在不同國家、不同地區(qū)存在著較大差異。因此，獲得東莞地區(qū)的HPV基因型分布特點(diǎn)有助于臨床疾病的篩查和診療。本研究對2 816例婦科門診患者的宮頸脫落細(xì)胞HPV感染率進(jìn)行分析得到東莞地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)，為臨床診療提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料2014年1月至2015年7月在本院就診的門診或住院患者共2 816例。年齡15～83歲，平均36.4歲。

1.2儀器與試劑DNA快速提取試劑盒； 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增儀；PCR-反向斑點(diǎn)雜交(PCR-RDB)試劑盒；分子雜交箱。以上試劑設(shè)備均由深圳亞能公司提供。

1.3方法

1.3.1宮頸脫落細(xì)胞的采集采集使用專用的宮頸脫落細(xì)胞采集器，先用窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用棉拭子將陰道及宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，再用試劑盒提供的專用宮頸刷插入子宮頸外口，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細(xì)胞標(biāo)本，然后將其放入含專用細(xì)胞保存液的試管中，2～8 ℃冰箱保存，每隔3 d檢測1次。

1.3.2DNA提取與擴(kuò)增 吸取500 μL細(xì)胞懸液標(biāo)本，14 000 r/min離心1 min，棄去上清液，然后按試劑盒的DNA提取步驟抽提DNA。取1 μL DNA抽提液，加入HPV擴(kuò)增體系，采用擴(kuò)增儀擴(kuò)增，95 ℃ 預(yù)變性10 min，95 ℃ 變性10 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min，PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物立即雜交分型或-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3分子雜交PCR擴(kuò)增產(chǎn)物95 ℃ 變性5 min，立即放入冰盒2 min，與1 mL預(yù)熱至45 ℃的雜交緩沖液混合，在導(dǎo)流雜交儀上45 ℃孵育10 min后導(dǎo)流雜交，加入封阻液封閉，酶標(biāo)，沖洗，顯色，在30 min內(nèi)查看分析結(jié)果，每次試驗(yàn)必須具備反應(yīng)質(zhì)控點(diǎn)，雜交顯色質(zhì)控點(diǎn)，陽性對照點(diǎn)顯色，陰性對照點(diǎn)不顯色，表示同時(shí)在控，試驗(yàn)結(jié)果有效。

1.3.4結(jié)果判斷檢測結(jié)果按照說明書規(guī)定的判讀方法進(jìn)行結(jié)果判斷。本研究使用的是深圳亞能公司生產(chǎn)的PCR-RDB試劑盒，其可以檢測23中常見HPV基因型，包括18種高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4；5種低危型：HPV6、11、41、42、43。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理研究數(shù)據(jù)全部記錄在Excel表格中，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HPV總體感染情況在接受HPV檢查的2 816例患者中，共檢測出1 018例HPV感染者，HPV總感染率為36.15%，其中高危型占68.86%(701/1 018)，低危型占31.14%(317/1 018)。高危型以HPV52、58、18 3種亞型為主，分別占13.7%(139/1 018)、7.0%(71/1 018)和4.9%(50/1 018)，低危型以HPV6、16、43 3種亞型為主，分別占11.3%(115/1 018)、10.6%(108/1 018)、9.3%(95/1 018)。見圖1。

圖1　HPV不同亞型感染率(%)

2.2不同年齡段的感染情況各年齡段的HPV感染率分別為24.36%、33.27%、41.96%、8.24%、30.11%、33.62%。見表1。

表1　各年齡段HPV感染情況表

2.3多重感染情況本實(shí)驗(yàn)檢測的基因型有21種，2 816例受檢者中有單一型HPV基因型感染，有兩種基因型感染，還有多種基因型感染。本次研究得到的1 018例陽性標(biāo)本中有單一型感染695例，占陽性標(biāo)本的68.27%；混合感染323例，占陽性標(biāo)本的31.73%。

3討論

HPV是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。根據(jù)其致病性可將其分為高危型和低危型，研究表明HPV高危型持續(xù)感染是引起宮頸癌的必要因數(shù)，約有90%以上的宮頸癌患者中存在HPV感染[2]。近年來，宮頸癌已成為全球婦女最常見的惡性腫瘤之一。HPV感染屬于性傳播疾病，性活躍期婦女普遍易感，隨著易感人群的年輕化，HPV感染率持續(xù)升高。據(jù)統(tǒng)計(jì)每年宮頸癌的發(fā)病率按照2%～3%的速度增長[3]。

近年來，因?yàn)镠PV感染得到了大量的研究，研究表明不同地區(qū)、人群、篩查方法等原因得到的結(jié)果有較大差異。國外研究指出，宮頸癌患者中常見亞型感染依次為HPV16、18、45、31、33、58和52型，而亞洲地區(qū)58和52型高于歐美地區(qū)常見的31、33和45型[4-6]。我國幅員遼闊，人口眾多，各族人群的生活方式和習(xí)慣不同造成我國HPV感染呈現(xiàn)地區(qū)多態(tài)性。本研究顯示，HPV總感染率為36.15%，其中最長見的亞型為HPV52、6、16、43，與我國其他學(xué)者的研究差異較大。

本研究顯示，各個(gè)年齡段的HPV感染率都比較高，其中高峰出現(xiàn)在30～<40歲(41.96%)，低谷出現(xiàn)在小于20歲(24.36%)，與其他學(xué)者的研究結(jié)果之間出現(xiàn)了較大差異，這可能與東莞地區(qū)的人口結(jié)構(gòu)有一定的關(guān)系，東莞地區(qū)有大量的外來務(wù)工人員，這些人員中普遍文化程度不高，健康意識淡薄，且經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)不夠扎實(shí)，故來醫(yī)院檢查的人數(shù)較少。在20～<40歲年齡段中的女性普遍性活躍程度比較高，且有了一定的經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)和健康意識，故作檢查的人數(shù)和檢出率都比較高；而老年婦女可能是由于處于絕經(jīng)期，激素水平紊亂、降低、保護(hù)性乳酸桿菌的減少及陰道pH 值變化等而使得機(jī)體疫功能衰退，HPV易感性增加及清除HPV的能力降低[7-8]。

有文獻(xiàn)顯示，單一型HPV感染可以使宮頸癌的患病風(fēng)險(xiǎn)提高19.9倍，而多重HPV感染則使該風(fēng)險(xiǎn)增加31.8倍，且多重感染對宮頸病變有促進(jìn)作用[9]。本研究顯示，HPV單一型的感染率為68.27%,多重感染率為31.73%。因此，對HPV多基因型的聯(lián)合檢測有利于宮頸癌的早期診斷和治療。

綜上所述，本地區(qū)HPV感染率較高達(dá)到36.15%，最長見的基因亞型為HPV52、6、16、43。不同年齡段的感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且呈現(xiàn)年輕化趨勢。本地區(qū)HPV多重感染率較高，達(dá)到31.73%。HPV感染潛伏期長短不一，一般為3～6個(gè)月，但是也有長達(dá)幾年甚至十幾年者。因此，篩查HPV感染是疾病的早期預(yù)防和治療的必要手段。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.050

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1862-02

(收稿日期：2016-02-23修回日期：2016-05-02)