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    高危型人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒-Care HPV用于宮頸癌及癌前病變篩查的臨床價值

    2016-07-27 05:23:48婧,洪
    中國婦幼健康研究 2016年4期
    關(guān)鍵詞:宮頸癌前病變人乳頭瘤病毒宮頸癌

    方 婧,洪 穎

    (南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 南京 210008)

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    高危型人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒-Care HPV用于宮頸癌及癌前病變篩查的臨床價值

    方婧,洪穎

    (南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 南京 210008)

    [摘要]目的評價care HPV用于宮頸癌及癌前病變篩查的臨床價值。方法收集2010年至2012年南京鼓樓醫(yī)院婦科就診的年齡在30~59歲之間的婦女宮頸樣本,行care HPV、第二代雜交捕獲技術(shù)(HC2)、HPV聚合酶鏈反應(yīng)(HPV-PCR)及宮頸液基細胞學(TCT)檢查,TCT≥ASC-US者行陰道鏡宮頸活檢及必要時宮頸管診刮,以組織病理學為金標準。病理診斷≥CIN2者為高危病變組,炎癥/CIN 1為良性病變組。結(jié)果共收集404例有效樣本。高危組42例、良性組50例,正常組312例。care HPV和HC2檢測結(jié)果的一致性為Kappa=0.833(P<0.0001),一致率93.81%;care HPV和HPV-PCR檢測結(jié)果的一致性為Kappa=0.707(P<0.0001),一致率88.12%;care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度為85.71%,特異度為83.15%。結(jié)論care HPV與HC2、HPV-PCR試劑具有高度一致性。care HPV在檢出HPV感染上具有很好的靈敏度和特異性,檢測耗時短,有望成為醫(yī)療資源相對貧乏地區(qū)子宮頸癌及癌前病變篩查的主要方法。

    [關(guān)鍵詞]人乳頭瘤病毒(HPV);care HPV檢測;宮頸癌;宮頸癌前病變

    宮頸癌是導致女性死亡的常見腫瘤之一,2012年全球?qū)m頸癌發(fā)病人數(shù)52.8萬,年死亡人數(shù)26.6萬。隨著宮頸癌篩查技術(shù)的發(fā)展和普及,在發(fā)達國家,宮頸癌的發(fā)病率和死亡率在過去50年里降低了75%,而85%的宮頸癌發(fā)生在發(fā)展中國家。我國每年宮頸癌新發(fā)病例在13萬以上[1]。宮頸癌篩查以細胞學為基礎(chǔ),而細胞學檢測技術(shù)人員需經(jīng)長期嚴格培訓才能穩(wěn)定、準確判別結(jié)果,在衛(wèi)生資源較少的國家和地區(qū),實施該方法困難,不適于醫(yī)療資源不足地區(qū)的大規(guī)模人群篩查[2]。如何找到適合發(fā)展中國家使用的簡單、快速、有效并且便宜的篩查方法成為子宮頸癌防治中亟待解決的問題[3]。

    1資料與方法

    1.1研究對象

    2010年至2012年于南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院婦科門診就診的30~59歲女性,有性行為史,宮頸存在,排除妊娠狀態(tài),自愿接受宮頸癌篩查。孕婦在妊娠結(jié)束后8周可入組。

    1.2標本采集和臨床檢查

    收集2份宮頸脫落細胞標本待檢,用于Care HPV、HC2/HPV-PCR檢測。依照病人入組順序依次編號,奇數(shù)的研究對象先取care HPV標本,偶數(shù)的研究對象先取HC2/HPV-PCR標本。HC2和HPV-PCR檢測共用一管標本。接著再采集一份宮頸脫落細胞標本,進行液基細胞學(LBC)檢測。LBC結(jié)果陰性者,進入正常組; LBC≥ASC-US者,接受陰道鏡檢查,若鏡下發(fā)現(xiàn)病變,則進行直接活檢。當陰道鏡檢查不滿意時(看不到完整的鱗柱交界,或病變伸入頸管內(nèi)觀察不到其全貌,或活檢鉗不能觸及病變,或疑有腺體病變時),則進行宮頸管診刮術(shù)(ECC)。陰道鏡下正常或活檢結(jié)果正常者進入正常組,陰道鏡下為炎癥或活檢結(jié)果為炎癥/CIN 1者進入良性病變組;活檢結(jié)果≥CIN 2者進入高危病變組。

    1.3標本編盲及檢測

    采用隨機盲法編號,care HPV、HC2/HPV-PCR檢測各自獨立進行。

    1.4 Care HPV檢測技術(shù)原理

    Care HPV是一種快速HPV-DNA測定方法。主要原理為抗體結(jié)合順磁性磁珠技術(shù)。使用裂解液溶解樣本細胞,暴露HPV-DNA并使其解鏈為單鏈DNA;將單鏈DNA與全長的互補RNA雜交,形成HPV-DNA/RNA雜交物;將包被有單克隆抗體的磁珠與HPV-DNA/RNA雜交物混合;加入與單克隆抗體結(jié)合的堿性磷酸酶;加入與堿性磷酸酶結(jié)合的顯色底物,顯色底物產(chǎn)生的光強度反映樣本中所包含的HPV-DNA數(shù)量。診斷結(jié)果用相對光單位(RLU)與最小陽性對照的RLU均值的比(RLU/CO)來表示。診斷陽性標準定義為標本中檢出的HPV-DNA 0.5pg/mL。截斷點為RLU/CO 1.0,≥1.0時認為HPV-DNA檢測陽性,<1.0時為陰性。該技術(shù)可定量檢測14種高危HPV型別(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68),單次檢測樣本量可達80余份,檢測時間約2.5小時。檢測過程由中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院實驗員進行質(zhì)控。

    1.5統(tǒng)計學方法

    使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件分析,計算Kappa值和一致率,比較care HPV檢測試劑和已被SFDA批準的HC2、HPV-PCR檢測試劑的一致性;以陰道鏡活檢的病理診斷為金標準,計算care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值。

    2結(jié)果

    最終獲得404例有效樣本。其中高危組(≥CIN 2)組42例、良性病變組(炎癥/ CIN 1)組50例,正常組有312例。

    2.1 Care HPV、HC2和HPV-PCR檢測的陽性率

    Care HPV、HC2和HPV-PCR檢測的陽性率分別是24.01%(97/404)、25.25%(102/404)和31.93%(129/404)。

    2.2 Care HPV和第二代雜交捕獲技術(shù)檢測結(jié)果的一致性

    Kappa=0.833(P<0.0001),一致率=379/404=93.81%(95%CI:91.13%~95.87%),見表1。

    表1Care HPV 檢測和HC2檢測的一致性[n(%)]

    Table 1 Consistency between care HPV test and HC2 test [n(%)]

    2.3 Care HPV和HPV-PCR檢測結(jié)果的一致性

    Kappa=0.707(P<0.0001),一致率=356/404=88.12%(95%CI:84.68%~91.01%),見表2。

    2.4 Care HPV檢出≥CIN 2的準確性和有效性

    Care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度為85.71%(95%CI:72.64%~94.00%);特異度為83.15%(95%CI:79.03%~86.74%);Yonden指數(shù)為68.86%(95%CI:64.34%~73.38%);陽性預測值為37.11%(95%CI:27.94%~47.04%);陰性預測值為98.05%(95%CI:95.98%~99.20%),見表3。

    表2Care HPV 檢測和HPV-PCR檢測的一致性[n(%)]

    Table 2   Consistency between careHPV test and HPV-PCR test[n(%)]

    表3Care HPV檢出≥CIN 2的準確性和有效性[n(%)]

    Table 3 Accuracy and validity of careHPV in detecting lesions ≥CIN 2[n(%)]

    2.5 Care HPV檢出≥CIN 2的ROC曲線

    Care HPV檢出≥CIN 2的ROC曲線下面積為:Z=0.844(95%CI:0.779~0.909,P<0.0001)。ROC曲線下面積越大,診斷價值越高,見圖1。

    圖1Care HPV檢出≥CIN 2的ROC曲線

    Fig.1ROC curves of careHPV in detecting lesions ≥CIN 2

    3討論

    3.1 HPV-DNA檢測作為宮頸癌初篩方法的理論支持

    宮頸癌是唯一病因明確的惡性腫瘤,其發(fā)病與高危型人乳頭狀瘤病毒(HPV)持續(xù)感染有關(guān)[4]。2002-2012年世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)布的宮頸癌流行病學數(shù)據(jù)表明,宮頸癌的年死亡病例數(shù)近十年沒有明顯下降,這說明目前以細胞學為基礎(chǔ)的宮頸癌篩查方案遇到了瓶頸,以HPV為基礎(chǔ)的宮頸癌篩查策略可能帶來新的希望[5]。2013年WHO制定最新《宮頸癌前病變篩查和管理指南》,重點推薦HPV-DNA檢測作為宮頸癌初篩方法[6],2015年的《美國宮頸癌篩查過渡期指南》也推薦將高危型HPV初篩作為目前宮頸癌篩查的替代方案,該指南中指出高危型HPV初篩與細胞學篩查相比在相同的時間間隔可以確保更低的罹患宮頸癌的風險[7]。2014年5月,在中國召開的HPV和宮頸癌篩查策略研討會上,專家達成共識:對以人群為基礎(chǔ)的篩查,HPV檢測更適用于一線初篩;而對有經(jīng)濟能力的個體篩查,HPV-細胞學聯(lián)合檢測仍是最佳選擇。然而,中國廣大欠發(fā)達地區(qū)經(jīng)濟能力有限,細胞學檢查醫(yī)師匱乏,用HPV聯(lián)合細胞學方法來篩查宮頸癌尚難以推廣[8]。國內(nèi)外均有學者在其研究中指出,HPV檢測作為宮頸癌初篩的方法,可以在尚未建立細胞學篩查體系的地區(qū)應(yīng)用[9-10]。

    3.2 Care HPV檢測的優(yōu)勢

    HC2及HPV-PCR是目前臨床廣泛應(yīng)用的HPV-DNA檢測方法,但該兩項方法不僅需要先進的檢測設(shè)備,而且費用較高,很難在發(fā)展中國家的普通人群中推廣。2003年到2007年間,在中國和印度開展了一項由Bill & Melinda Gates基金會資助的國際研究,力求研發(fā)適用于發(fā)展中國家的全新、快速、經(jīng)濟的宮頸癌篩查方法,其中一種方法就是本研究中使用的高危型HPV核酸檢測試劑盒-careHPV 檢測[11]。careHPV是特別為醫(yī)療資源薄弱地區(qū)的30歲以上婦女宮頸癌篩查所設(shè)計的,該方法可定量檢測14種高危HPV型別(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68),2.5小時可以檢測80余份標本,提高了檢測速度和效率,篩查者當天即可得到HPV檢測結(jié)果,并采取相應(yīng)的隨訪和治療手段,對于資源貧乏地區(qū)成功進行完整的篩查-治療程序十分重要。與HC2/HPV-PCR相比,其優(yōu)點在于該檢測簡單易行,檢測時間短,取樣人員范圍寬。2009年由比爾及梅林達·蓋茨基金會資助的、適合于發(fā)展中國家和地區(qū)的HPV快速篩查技術(shù)( careHPV) 在中國獲得成功,為發(fā)展中國家和地區(qū)宮頸癌的早診早治提供了行之有效的手段[3]。張榮等[12]在對山西襄垣地區(qū)婦女運用careHPV進行宮頸癌篩查時指出,careHPV是一種簡單、快捷,受檢者易于接受的HPV-DNA檢測方法,可由新培訓的無實驗室經(jīng)驗、受教育程度較低的技術(shù)員取樣,檢測時對實驗室條件要求較HC2低,只需要適宜的溫濕度,充足的光線,一定的空間,對水電設(shè)備無特殊要求,價格亦低于HC2。

    3.3本次研究結(jié)果分析

    本研究數(shù)據(jù)顯示care HPV與HC2試劑、HPV-PCR試劑具有高度一致性,care HPV與HC2檢測的Kappa值為0.833(P<0.0001),一致率為93.81%(95%CI:91.13%~95.87%);與HPV-PCR檢測的Kappa為0.707(P<0.0001),一致率為88.12%(95%CI:84.68%~91.01%)。Care HPV與HC2對HPV感染陽性的檢出率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為85.71%(95%CI:72.64%~94.00%)、83.15%(95%CI:79.03%~86.74%)、37.11%(95%CI:27.94%~47.04%)和98.05%(95%CI:95.98%~99.20%)。Care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度介于HC2 96.1%與傳統(tǒng)巴氏圖片53%之間,特異度低于兩者。通過繪制ROC曲線和計算ROC曲線下面積來反映care HPV的診斷價值,得出的ROC曲錢下面積為Z=0.844(95%CI:0.779~0.909,P<0.0001)。研究中出現(xiàn)HPV PCR檢測和care HPV陽性率的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),HPV-PCR檢測高于care HPV,出現(xiàn)以上結(jié)果可能與取樣順序及實驗室誤差有關(guān)。因HC2和HPV-PCR共用一個標本,需從HC2管中分出50微升樣品用于HPV-PCR檢測,同時標本檢測過程前后歷時數(shù)天,標本的反復凍溶也可能會對檢測結(jié)果造成一定影響。

    綜上,本研究結(jié)果顯示care HPV與HC2試劑、HPV-PCR試劑具有高度一致性,篩查和治療可在一次訪視中同時完成,有良好實際應(yīng)用價值,有希望代替HC2和HPV-PCR技術(shù)用于醫(yī)療資源貧乏或薄弱地區(qū)婦女的宮頸癌篩查,濃縮高危人群,實現(xiàn)早診早治的二級預防目標。

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    [專業(yè)責任編輯:安瑞芳]

    [收稿時間]2016-01-23

    [作者簡介]方婧(1986-),女,住院醫(yī)師,碩士畢業(yè),主要從事婦科腫瘤的研究。

    [通訊作者]洪穎,教授。

    doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.014

    [中圖分類號]R73.3

    [文獻標識碼]A

    [文章編號]1673-5293(2016)04-0457-03

    Clinical value of high-risk HPV nucleic acid detection kit careHPV in screening of cervical cancer and precancerous lesions

    FANG Jing, HONG Ying

    (Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Drum Tower Hospital Medical College of Nanjing University,Jiangsu Nanjing 210008, China)

    [Abstract]Objective To assess the clinical value of careHPV test in screening of cervical cancer and precancerous lesions. Methods From 2010 to 2012 cervical specimens were collected from women aged 30-59 years old visiting department of gynecology of Nanjing Drum Tower Hospital between. They were detected by careHPV test, HC2, HPV-PCR test and TCT. Women with TCT≥ASC-US had colposcopy with directed biopsy and endocervical curettage if necessary. Based on the gold standard of histopathology, patients with CIN2 or higher belonged to high-risk group and those with inflammation/CIN1 belonged to benign group. Results Totally 404 valid samples were collected. There were 42 cases in high-risk group, 50 cases in benign group, and 312 cases in normal group. The value of Kappa was 0.833 in indicating the consistency of detection results between careHPV test and HC2 (P<0.0001) and the concordance rate was 93.81%. The value of Kappa was 0.707 in indicating the consistency of detection results between careHPV test and HPV-PCR (P<0.0001) and the concordance rate was 88.12%. The sensitivity and specificity of careHPV test in detecting lesions ≥CIN 2 were 85.71% and 83.15%, respectively. Conclusion The careHPV test is highly consistent with HC2 and HPV-PCR test. CareHPV has good sensitivity and specificity in the detection of HPV infection with short time consuming, and is expected to be the main method for screening of cervical cancer and precancerous lesions in the areas with relatively insufficient medical resources.

    [Key words]human papillomavirus (HPV); careHPV test; cervical cancer; cervical precancerous lesion

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