和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

張青霞，張德芹，黃春麗，文　靜

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津　300193）

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和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

張青霞，張德芹，黃春麗，文靜

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津300193）

摘要：［目的］觀察和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠外周血神經(jīng)遞質(zhì)的影響。［方法］采用自然老化法建立初老大鼠模型，選用48只13月齡雌性SD大鼠，隨機(jī)分為模型對(duì)照組，莉芙敏組，補(bǔ)佳樂(lè)組，和顏坤泰膠囊高、中、低劑量組（8、4、2 g/kg），每組8只；另選8只4月齡雌性SD大鼠作為青年對(duì)照組。給藥90 d后，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)各組大鼠血清中去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）含量及血漿中促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、β-內(nèi)啡肽（β-EP）含量。［結(jié)果］與模型對(duì)照組比較，和顏坤泰膠囊可使初老大鼠血清中NE含量升高，5-HT、5-HIAA含量降低，血漿中β-EP含量升高，ACTH含量降低。［結(jié)論］和顏坤泰膠囊可調(diào)節(jié)初老大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平，為其改善神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：和顏坤泰膠囊；初老大鼠；神經(jīng)遞質(zhì)

中樞內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）及其相關(guān)物質(zhì)5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、色氨酸、酪氨酸等參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中多種生理過(guò)程，分析單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其相關(guān)物質(zhì)能為多種疾病的治療提供重要依據(jù)［1-4］。在衰老的過(guò)程中，腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的代謝發(fā)生紊亂，出現(xiàn)NE、DA、5-HT含量的下降，提示單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的平衡遭到破壞，這與一些老年性疾病如帕金森病、老年癡呆及腦功能的減退有關(guān)［5］。

和顏坤泰膠囊由6味中藥組成，是在東漢醫(yī)圣張仲景的《傷寒論》中記載的“黃連阿膠湯”的基礎(chǔ)上去雞子黃，重用熟地黃、加茯苓，減少了黃連的用量，具有滋陰清熱，安神除煩的功效。6藥合用，起到滋陰養(yǎng)血，補(bǔ)精益髓，交通心腎，調(diào)節(jié)陰陽(yáng)平衡的作用。文章基于前期實(shí)驗(yàn)［6-7］，通過(guò)對(duì)初老大鼠血清中NE、DA、5-HT、5-HIAA及血漿中促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、β-內(nèi)啡肽（β-EP）含量的檢測(cè)，探討和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物2月齡雄性SD大鼠21只，2月齡雌性SD大鼠102只，體質(zhì)量（220±20）g，4月齡雌性SD大鼠20只，體質(zhì)量（250±20）g，均由北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證編號(hào)：SCXK（京）2002-0003，飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)中心。

1.2藥物和顏坤泰膠囊（貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)130107），莉芙敏（德國(guó)夏普天然藥物制藥公司，批號(hào)200781），補(bǔ)佳樂(lè)（戊酸雌二醇，Delpharm LilleS.A.S生產(chǎn)，由拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司分包裝，批號(hào)106A2）。

1.3試劑NE試劑盒（批號(hào)L140926718），DA試劑盒（批號(hào)L141021448），5-HT試劑盒（批號(hào)L140908201），5-HIAA試劑盒（批號(hào)L141021430），ACTH試劑盒（批號(hào)L140826406），β-EP試劑盒（批號(hào)L140811158），以上試劑盒均由Uscn Life science Inc公司提供。

1.4儀器Enspire型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Perkin Elmer公司），LDZ5-2低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司），MDF-382E型-80℃低溫冰箱（日本Sanyo公司）。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1模型建立選取2月齡雌性和雄性SD大鼠，雌雄合籠交配，待雌鼠懷孕并自然生產(chǎn)后，選取產(chǎn)后雌性SD大鼠80只繼續(xù)分籠飼養(yǎng)至13月齡，應(yīng)用陰道脫落細(xì)胞涂片連續(xù)觀察15 d，選擇動(dòng)情周期紊亂的大鼠作為初老大鼠模型，另選取4月齡動(dòng)情周期規(guī)律的雌性SD大鼠作為青年對(duì)照組［8］。

2.2分組給藥篩選成模大鼠48只，采用隨機(jī)區(qū)組法分為6組（每組8只），分別為模型對(duì)照組，莉芙敏組（60 mg/kg）［9］，補(bǔ)佳樂(lè)組（0.2 mg/kg），和顏坤泰膠囊高、中、低劑量組（8、4、2 g/kg），另外設(shè)置青年對(duì)照組（8只）。各組分別灌胃給藥，灌服體積為10 mL/（kg·d），青年對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服同體積蒸餾水。

2.3標(biāo)本采集給藥90 d后大鼠禁食（不禁水）8 h，3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，離心15 min（3 500 r/min），分離血清；另取2 mL全血分別注入預(yù)先加有10%EDTA·Na230 μL、抑肽酶20 μL和預(yù)先加有肝素鈉60 μL的試管中，混勻并離心，置于-80℃冰箱冷貯備用。

2.4檢測(cè)方法

2.4.1一般情況觀察實(shí)驗(yàn)期間觀察動(dòng)物精神、活動(dòng)、毛色情況。

2.4.2血清中及血漿中相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)血清中NE、DA、5-HT、5-HIAA含量，血漿中ACTH、β-EP含量，利用多功能酶標(biāo)儀讀取450nm波長(zhǎng)下吸光度（A）并計(jì)算其含量。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0軟件分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett’s T3法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1一般指征與青年對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠神態(tài)萎靡，活動(dòng)較少，毛發(fā)脫落較明顯，色澤暗發(fā)黃；莉芙敏組、補(bǔ)佳樂(lè)組及和顏坤泰膠囊中、低劑量組大鼠上述體征與模型對(duì)照組比較均有所改善，且莉芙敏組、和顏坤泰膠囊低劑量組效果較明顯；青年對(duì)照組大鼠較其余各組大鼠攝食量大。

3.2各組大鼠血漿ACTH、β-EP含量的變化與青年對(duì)照組比較，模型對(duì)照組ACTH含量顯著上升（P＜0.01）、β-EP含量顯著下降（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，莉芙敏組、補(bǔ)佳樂(lè)組ACTH含量顯著下降（P＜0.01），β-EP含量顯著上升（P＜0.01），和顏坤泰膠囊低劑量組ACTH含量顯著下降（P＜0.01），中、低劑量組β-EP含量顯著上升（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1　和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠血漿ACTH、β-EP含量的影響（±s）

表1　和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠血漿ACTH、β-EP含量的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與青年對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

β-EP （ng/L）青年對(duì)照組　54.61±4.24　33.36±7.57模型對(duì)照組　85.67±10.57##16.32±1.84##莉芙敏組　58.39±7.20**28.60±5.53**補(bǔ)佳樂(lè)組　72.13±14.33**22.96±2.50**和顏坤泰膠囊高劑量組　80.55±7.50　18.37±2.18和顏坤泰膠囊中劑量組　76.28±9.38　21.20±2.60*和顏坤泰膠囊低劑量組　63.69±10.13**24.11±3.54**組別　ACTH （ng/L）n　8 8 8 8 8 8 8劑量（g/kg）--6×10-22×10-48 4 2

3.3各組大鼠血清NE、DA、5-HT、5-HIAA含量的變化與青年對(duì)照組比較，模型對(duì)照組NE、DA含量顯著降低（P＜0.01），5-HT、5-HIAA含量顯著上升（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，莉芙敏組NE、DA含量顯著上升（P＜0.01），補(bǔ)佳樂(lè)組NE含量顯著上升（P＜0.01），莉芙敏組、補(bǔ)佳樂(lè)組5-HT、5-HIAA含量顯著降低（P＜0.01），和顏坤泰膠囊中、低劑量組NE含量顯著上升（P＜0.01），5-HT、5-HIAA含量顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

4　討論

表2　和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠血清NE、DA、5-HT、5-HIAA含量的影響（±s）

表2　和顏坤泰膠囊對(duì)初老大鼠血清NE、DA、5-HT、5-HIAA含量的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與青年對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

NE（ng/L）　DA（ng/L）　5-HT（μg/L）　5-HIAA（μg/L）青年對(duì)照組　38.49±3.74　516.52±44.74　391.96±20.32　1.73±0.11模型對(duì)照組　22.97±0.76##　413.15±57.34##　519.58±28.37##　3.36±0.57##莉芙敏組　35.24±4.19**　483.97±52.53**　420.93±42.53**　1.84±0.18**補(bǔ)佳樂(lè)組　31.88±2.91**　425.91±35.53　438.38±28.49**　2.06±0.20**和顏坤泰膠囊高劑量組　25.59±4.10　420.95±34.82　498.51±54.21　2.95±0.73和顏坤泰膠囊中劑量組　30.06±3.49**　421.72±42.46　446.38±38.61*　2.42±0.33*和顏坤泰膠囊低劑量組　33.85±5.04**　432.13±44.12　432.21±26.71**　2.02±0.20**組別n 8 8 8 8 8 8 8劑量（g/kg）--6×10-22×10-48 4 2

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，腦和海馬內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的水平與記憶障礙大鼠的學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)［10-12］，而NE在保持記憶方面有重要的作用，NE活性降低則能引起與年齡相關(guān)的記憶力減退，而改善記憶與促進(jìn)DA的釋放有關(guān)［13］，5-HT則參與調(diào)節(jié)動(dòng)機(jī)、食欲、情緒等。王濱等［14］研究發(fā)現(xiàn)圍絕經(jīng)期自然衰老大鼠NE含量明顯降低，5-HT、5-HIAA含量明顯升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示和顏坤泰膠囊中、低劑量組可不同程度的提高初老大鼠NE、β-EP含量，降低5-HT、5-HIAA、ACTH含量，推測(cè)和顏坤泰膠囊可有效的調(diào)整中樞類神經(jīng)遞質(zhì)的合成，對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂具有一定的改善作用。

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中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1673-9043（2016）03-0173-03

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2016.03.07

收稿日期：（2016-02-28）

*基金項(xiàng)目：國(guó)家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目（2012ZX09 304007）。

作者簡(jiǎn)介：張青霞（1989-），女，碩士研究生，從事中藥基本理論及臨床應(yīng)用研究。

通訊作者：張德芹，E-mail：deqin123@163.com。

Effects of Heyan Kuntai capsule on monoamine neurotransmitter levels in presenile rats

ZHANG Qing-xia，ZHANG De-qin，HUANG Chun-li，WEN Jing
（The Traditional Chinese Medicine Research Institute，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

Abstract:［Objective］To investigate the effects of Heyan Kuntai capsule on monoamine neurotransmitter levels of presenile rats.［Methods］Natural aging method was adopted to establish the presenile rats model.Forty-eight 13 months female SD rats were randomly divided into model group，remifemin group，progynova group，three dose of Heyan Kuntai group，eight in each.Then choose eight of four months female SD rats as youth group.All animals were sacrificed and serum samples were collected after ninety days.The serum levels of orepinephrine（NE），dopamine （DA），hydroxytryptamine（5-HT），5-hydroxy indole acetic acid（5-HIAA）and the plasma levels of adrenocorticotrophic hormone（ACTH），beta-endorphin（β-EP）were determined by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）. ［Results］Compared with the model group，Heyan Kuntai capsule markedly increase the serum levels of NE and decrease the serum levels of 5-HT，5-HIAA and the plasma levels of β-EP was significantly increased and the plasma levels of ACTH was decreased.［Conclusion］Heyan kuntai capsule could regulate the monoamine neurotransmitter levels of presenile rats，and provided an experimental evidence for regulating neuroendocrine functional disorder.

Key words:Heyan Kuntai capsule；natural aging rats；monoamine neurotransmitter