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    超快速液相-質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定液體奶和奶粉中磺胺和喹諾酮類藥物殘留*

    2016-07-20 08:07:03閆正任孟偉張麗冰布雅楠楊照生李揮
    化學(xué)分析計(jì)量 2016年1期
    關(guān)鍵詞:串聯(lián)質(zhì)譜法殘留磺胺

    閆正,任孟偉,張麗冰,布雅楠,楊照生,李揮

    (1.河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河北保定 071002; 2.河北省食品檢驗(yàn)研究院,河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石家莊 050091)

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    超快速液相-質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定液體奶和奶粉中磺胺和喹諾酮類藥物殘留*

    閆正1,任孟偉1,張麗冰1,布雅楠1,楊照生1,李揮2

    (1.河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河北保定 071002; 2.河北省食品檢驗(yàn)研究院,河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石家莊 050091)

    摘要建立超快速液相-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定乳制品中磺胺和喹諾酮類藥物殘留的方法。試樣加入乙腈沉淀蛋白,用0.22 μm濾膜過濾,經(jīng)EndeavorsilTMC18柱分離,選用乙腈-0.1%甲酸為流動(dòng)相。在0.05~100.00 μg/L范圍內(nèi),17種獸藥的質(zhì)量濃度均與色譜峰面積均呈良好的線性,相關(guān)系數(shù)(r2)為0.990 6~0.999 8,方法檢出限為0.05~0.10 μg/kg,加標(biāo)回收率為75.88%~116.00%,測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%~13%(n=5)。該方法快速、靈敏,可以滿足對(duì)乳制品中多種獸藥殘留的快速檢測(cè)要求。

    關(guān)鍵詞超快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;磺胺;喹諾酮類;殘留

    磺胺類(SAs)和喹諾酮類(QNs)藥物均為廣譜抑菌藥,因具有抗菌譜廣、高效、價(jià)格低廉等特點(diǎn),在畜牧水產(chǎn)等養(yǎng)殖生產(chǎn)中廣泛使用[1]?;前奉愃幬锸侨斯ず铣傻木哂袑?duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類抗菌藥物的總稱[2],喹諾酮類是具有1,4-二氫-4-氧代喹啉-3-羧酸結(jié)構(gòu)的人工合成抗菌藥物?;前奉惡袜Z酮類藥物均具有抗原性,可誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥性菌株甚至誘發(fā)癌癥。有些養(yǎng)殖戶法律意識(shí)淡薄,擅自加大用藥量,不遵守休藥期等,導(dǎo)致磺胺類和喹諾酮類藥物的殘留問題日趨嚴(yán)重[3]。

    世界各國(guó)對(duì)SAs和QNs類藥物殘留非常重視,國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)和歐美等許多國(guó)家規(guī)定,食品中SAs總量以及磺胺二甲嘧啶等單個(gè)磺胺的最大殘留限量(MRL)不得超過0.10 mg/kg[4]。目前SAs和QNs藥物的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法[5-6]、微生物法[7]、高效液相色譜-熒光法[8]、高效液相色譜法[9]、高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法[10]等。酶聯(lián)免疫法和微生物法不能有效定性,高效液相法的檢出限相對(duì)較低。液質(zhì)聯(lián)用具有良好的適用性、定性定量功能及高靈敏度,已成為藥物殘留檢測(cè)的主要方法。筆者在總結(jié)文獻(xiàn)方法的基礎(chǔ)上,建立了17種獸藥的高效液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法,縮短了分離時(shí)間,提高了工作效率,為乳制品的快速篩查提供了準(zhǔn)確可靠的方法。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 主要儀器與試劑

    液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀:Q-TRAP 5500型,配有H-ESI源,美國(guó)AB公司;

    UFLC液相色譜系統(tǒng):LC-20AC型,日本島津公司;

    離心機(jī):3K15型,德國(guó)Sigma公司;

    渦旋儀:VORTEX GENIUS3型,德國(guó)IKA公司;

    超聲清洗儀:KQ-500E型,中國(guó)昆山市超聲儀器有限公司;

    電子天平:AB265-S型,瑞士梅特勒公司;

    磺胺脒、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、氧氟沙星、磺胺甲噻二唑、丹諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、司帕沙星、磺胺甲基異惡唑、磺胺多辛、磺胺二甲異惡唑、磺胺苯酰、磺胺苯吡唑、磺胺喹惡啉、磺胺硝苯標(biāo)準(zhǔn)品:德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司;

    甲醇、乙 腈:色譜 純,美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;

    甲酸:質(zhì)譜純,德國(guó)Sigma公司;

    實(shí)驗(yàn)用水由Milipore純水系統(tǒng)制備。

    1.2 儀器工作條件

    1.2.1 色譜條件

    色 譜 柱:EndeavorsilTMC18(50 mm×2.1 mm,1.8 μm);流動(dòng)相:0.1 %甲酸水溶液(A)-乙腈(B);柱溫:室溫;進(jìn)樣體積:2 μL;流量:0.3 mL/min;梯度洗脫:0.1~2 min B為5%,2~6 min B為5%~15%,6~11 min B為15%~20%,11~14 min B為20%~90%,14~16 min B為90%,16.1~19 min B為5。

    1.2.2 質(zhì)譜條件

    掃描方式:正離子掃描;監(jiān)測(cè)方式:MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè);噴霧電壓:5 500 V;離子源溫度:500℃;噴霧氣壓力:345 kPa(50 Psi);輔助加熱氣壓力:345 kPa(50 Psi);氣簾氣壓力:207 kPa (30 Psi);碰撞氣流速:中等。

    1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

    分別稱取17種抗生素標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解定容,配制成1 000 mg/L的儲(chǔ)備液,于-20℃保存,可穩(wěn)定保存6個(gè)月。

    1.4 樣品前處理

    1.4.1 液體奶

    準(zhǔn)確稱取5 g液體奶至離心管,加入5 mL乙腈,漩渦震蕩1 min,在4℃條件下以5 000 r/min離心5 min,將上層清液轉(zhuǎn)移至新離心管,原離心管中加入5 mL乙腈重復(fù)提取,合并提取液,取1 mL上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶。

    1.4.2 奶粉

    準(zhǔn)確稱取1 g奶粉試樣,加入4 mL超純水溶解,后續(xù)處理步驟同液體奶。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 樣品前處理?xiàng)l件優(yōu)化

    乳制品中含有的大量蛋白會(huì)影響液質(zhì)分析的準(zhǔn)確度,因此一般選擇乙腈沉淀蛋白法。比較了樣品與乙腈體積比為1∶1,1∶1.5,1∶2,1∶3時(shí)獸藥的回收率。當(dāng)體積比大于1∶2時(shí),獸藥平均回收率普遍大于70%。因此選擇樣品與乙腈的體積比為1∶2。

    2.2 LC條件優(yōu)化

    QNs的叔胺基與羧基官能團(tuán)解離會(huì)被色譜柱中殘留的硅羥基強(qiáng)烈吸附,造成峰形拖尾、色譜峰形異常及分離度降低等現(xiàn)象,所以色譜柱選擇C18柱。酸性流動(dòng)相可以降低殘留的硅羥基對(duì)目標(biāo)化合物中堿性基團(tuán)的吸附作用。SAs類藥物具有酸堿兩性,當(dāng)流動(dòng)相的pH值較高或者不添加酸時(shí),待測(cè)組分峰形較差。當(dāng)流動(dòng)相分別添加0.1%,0.2%甲酸時(shí),分離結(jié)果相近。過低的酸度會(huì)影響色譜系統(tǒng)的使用壽命,故選擇乙腈-0.1 %甲酸。因?yàn)闇y(cè)定獸藥數(shù)量較多,采用梯度洗脫程序進(jìn)行分離,在14 min內(nèi)完成了對(duì)17種化合物的分析,見圖1。

    圖1 17種獸藥總離子流色譜圖

    2.3 MS條件優(yōu)化

    將1 mg/L的各標(biāo)準(zhǔn)溶液用針泵以5 μL/min的流量進(jìn)樣,在正離子模式下進(jìn)行掃描,確定母離子和子離子,以MRM模式優(yōu)化去簇電壓DP和碰撞電壓CE,使子離子在保證分辨率的條件下靈敏度最佳。以強(qiáng)度較大的子離子作為定量離子,強(qiáng)度稍小的作為定性離子,具體參數(shù)見表1。

    表1 17種獸藥的質(zhì)譜條件及色譜參數(shù)

    2.4 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)

    基質(zhì)效應(yīng)是指基質(zhì)中的提取物干擾目標(biāo)化合物的離子化,使目標(biāo)化合物在儀器檢測(cè)上的增強(qiáng)或抑制現(xiàn)象?;|(zhì)效應(yīng)會(huì)影響方法的檢出限、定量限、準(zhǔn)確度和精密度等[11]?;|(zhì)效應(yīng)=[(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率)-1]×100%[12]。在液體奶基質(zhì)樣品中有5種獸藥出現(xiàn)了基質(zhì)增強(qiáng),在奶粉基質(zhì)樣品中有7種獸藥出現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng),其余均為抑制效應(yīng)。由于基質(zhì)效應(yīng)明顯,故采用基質(zhì)匹配外標(biāo)溶液對(duì)樣品中的獸藥殘留進(jìn)行定量。

    2.5 工作曲線方程與檢出限和定量限

    以空白基質(zhì)配制0.05,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00,20.00,50.00,100.00 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別進(jìn)行測(cè)定。以被測(cè)組分的質(zhì)量濃度(X )對(duì)色譜峰面積(Y )繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以3倍信噪比的響應(yīng)值對(duì)應(yīng)的樣品濃度作為方法檢出限(LOD),以10倍信噪比計(jì)算定量限(LOQ)。工作曲線方程、檢出限與定量限見表2。由表2可知,17種獸藥均有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)(r2)為0.990 6~0.999 8,方法檢出限為0.05~0.10 μg/kg,定量限為0.10~0.50 μg/kg。

    表2 17種獸藥線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

    2.6 回收試驗(yàn)

    根據(jù)歐盟獸藥殘留檢測(cè)準(zhǔn)則要求,平均回收率需在70%~120%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)需小于20%[13]。在液體奶和奶粉中進(jìn)行回收試驗(yàn),分別考察10.00,20.00,50.00 μg/kg 3個(gè)加標(biāo)水平下17種獸藥的回收率,結(jié)果見表3。由表3可知,方法回收率為75.88%~116.00%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%~13%,表明方法的精密度和準(zhǔn)確度滿足檢測(cè)要求。

    2.7 精密度試驗(yàn)

    (1)儀器精密度。取10,100,1000 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,計(jì)算各組分提取離子色譜峰(XIC)面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。(2)批內(nèi)精密度。取1個(gè)空白樣品平行制備6份,加入1 000.00 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別在3,6,9,12 h內(nèi)進(jìn)行LC-MS分析,計(jì)算各組分提取離子色譜峰(XIC)面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。(3)批間精密度。取3個(gè)空白樣品,每個(gè)平行3份,加入1 000.00 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,連續(xù)測(cè)定3天,計(jì)算各組分提取離子色譜峰(XIC)面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,測(cè)定結(jié)果見表4。由表4可知,獸藥含量低的樣品其測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較大,說明獸藥含量對(duì)儀器精密度有影響;基質(zhì)為牛奶和奶粉時(shí),批內(nèi)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差比批間的低,說明不同品牌的牛奶和奶粉之間存在差異。

    表3 空白樣品中17種獸藥的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5) %

    表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6) %

    2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    考察濃度1 000.00 μg/kg的混合標(biāo)液在常溫條件下的穩(wěn)定性,分別在4,8,12,16,20,24,28,32,36,40,44,48 h上機(jī),計(jì)算各組分色譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.7%~9.3%之間,混合標(biāo)液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性符合檢測(cè)要求,結(jié)果見表4。

    2.9 實(shí)際樣品測(cè)定

    用所建方法對(duì)本地超市的30批不同批號(hào)和品牌的乳制品進(jìn)行篩查,用已優(yōu)化的色譜-質(zhì)譜條件和前處理方法,根據(jù)碎片離子和保留時(shí)間等信息確證。其中3個(gè)樣品檢出磺胺硝苯,含量分別為0.18,0.16,0.05 μg/kg。

    3 結(jié)語

    建立乳制品中獸藥的超快速液相-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用定量分析方法,該方法能在14 min完成17種獸藥的分析,方法檢出限為0.05~0.10 μg/kg。三重四級(jí)桿質(zhì)譜技術(shù)具有靈敏度和定量準(zhǔn)確性,在乳制品獸藥殘留檢測(cè)方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。該方法具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、綠色環(huán)保的特點(diǎn),滿足日常檢測(cè)要求,適合食品檢驗(yàn)行業(yè)對(duì)磺胺和喹諾酮類抗生素的檢測(cè)。

    參 考 文 獻(xiàn)

    [1] 歷文輝,史亞利,高立紅,等.加速溶劑萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同檢測(cè)魚肉中中喹諾酮類、磺胺與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2010,29(10): 987-992.

    [2] 吳永寧,邵兵,沈建忠.獸藥殘留檢測(cè)與檢測(cè)技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2007: 189.

    [3] 岳振峰,謝麗琪,陳小霞,等.牛奶中16種喹諾酮類藥物殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2008,27 (3): 240-243.

    [4] 趙旭壯,李元明.動(dòng)物性食品中磺胺類藥物殘留檢測(cè)研究進(jìn)展[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2012,24(3): 292-296.

    [5] 王錢,李康,陳樹芬,等.膠體金免疫層析法對(duì)組織樣品中磺胺甲噁唑殘留的快速檢測(cè)[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2009,28(4): 458-461.

    [6] 鄭晶,黃曉蓉,李耀平,等.鰻魚中恩諾沙星殘留量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法[J].食品科學(xué),2004,25(10): 247-250.

    [7] 黃曉蓉,鄭晶,李壽崧,等.鰻魚及其制品中喹諾酮類藥物殘留的微生物快速檢測(cè)方法[J].淡水漁業(yè),2005,35(4): 3-6.

    [8] 李存,江海洋,吳銀良,等.高效液相色譜-熒光-紫外法測(cè)定動(dòng)物肌肉組織中多類藥物殘留[J].分析化學(xué),2009,37(8):1 102-1 106.

    [9] 董琳琳,劉艷華,汪霞,等.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定4種氟喹諾酮類藥物在雞可食性組織中的殘留[J].色譜,2005,23(3):285-288.

    [10] 楊方,龐國(guó)芳,劉正才.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中15種喹諾酮類藥物殘留量[J].分析試驗(yàn)室,2008,27(12):27-33.

    [11] 向平,沈敏,卓先義.液相色譜-質(zhì)譜分析中的基質(zhì)效應(yīng)[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2009,28(6): 753-756.

    [12] Kmellar B,F(xiàn)odor P,Pareja L,et al. Validation and uncertainty study of a comprehensive list of 160 pesticide residues in multi-class vegetables by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Chromatogr A,2008,1 215(12): 37-50.

    [13] Method validation and quality control procedures pesticide residue analysis in food and feed[EB/OL]. Document No.SANCO/ 12495/2011.[2012-12-08.]

    *河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目(15275505D)

    聯(lián)系人:閆正;E-mail: yanzh5165323@hbu.edu.cn

    中圖分類號(hào):O657.7

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1008-6145(2016)01-0005-05

    doi:10.3969/j.issn.1008-6145.2016.01.002

    收稿日期:2015-09-08

    Simultaneous Analysis of Sulfonamides and Quinolones in Milk and Milk Powder by UFLC-MS/MS

    Yan Zheng1, Ren Mengwei1, Zhang Libing1, Bu Yanan1, Yang Zhaosheng1, Li Hui2
    (1. College of Chemistry & Environmental Science, HeBei University, Baoding 071002, China;2. Hebei Key Laboraory of Food Safety, Hebei Food Inspecion and Research Institute, Shijiazhuang 050091, China)

    AbstractSulfonamides and quinolones in milk products were determined by ultra-performance liquid chromatographytandem mass spectrometry. The proteins in milk products were precipitated by acetonitrile,then cleaned by 0.22 μm millipore filter. The filtrate was separated on a EndeavorsilTMC18column by gradient elution with acetonitrile-0.1% formic acid as mobile phase. In the range of 0.05-100.00 μg/L, mass concentration of 17 veterinary drugs was linear with peak area with correlation coefficient (r2) of 0.990 6-0.999 8. The detection limit was 0.05-0.10 μg/kg. The recoveries ranged from 75.88% to 116.00%,and the relative standard deviations were in the range of 1.5%-13%(n=5). The method is rapid and accurate,it can meet the requirements of monitoring of antibiotics in milk products.

    KeywordsUFLC-MS/MS; sulfonamides; quinolones; residue

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