肝癌衍生生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與腫瘤微血管密度的相關(guān)性研究

符黃德，羅起勝，鄧元央，黃華東，羅琨祥，李傳玉，韋傳東，陳源紅，黃海能

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·論著·

肝癌衍生生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與腫瘤微血管密度的相關(guān)性研究

符黃德，羅起勝，鄧元央，黃華東，羅琨祥，李傳玉，韋傳東，陳源紅，黃海能

533000廣西百色市，右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科(符黃德，羅起勝，鄧元央，黃華東，羅琨祥，李傳玉，黃海能)，檢驗(yàn)科(韋傳東)；右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物和免疫教研室(陳源紅)

【摘要】目的探討肝癌衍生生長(zhǎng)因子(HDGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與腫瘤微血管密度(MVD)的相關(guān)性。方法選取2008年3月—2013年6月于右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院診治的腦膠質(zhì)瘤患者52例為腦膠質(zhì)瘤組，另選取同期于本院行顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)患者52例為對(duì)照組。收集腦膠質(zhì)瘤組腫瘤組織和對(duì)照組正常腦組織，冷凍保存。實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR法測(cè)定HDGF、VEGF mRNA表達(dá)水平。將腫瘤組織和正常腦組織裂解后提取蛋白，分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和Western blotting測(cè)定HDGF、VEGF表達(dá)水平。以CD105作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，顯微鏡下觀察5個(gè)視野內(nèi)微血管數(shù)計(jì)算MVD。自病理檢查確診起，追蹤隨訪觀察腦膠質(zhì)瘤患者至2015-07-30，隨訪終點(diǎn)為死亡。結(jié)果腦膠質(zhì)瘤組HDGF、VEGF mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組，經(jīng)ELISA、Western blotting測(cè)定的HDGF、VEGF表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腦膠質(zhì)瘤組MVD為(74.3±10.4)個(gè)/視野，高于對(duì)照組的(9.6±1.4)個(gè)/視野，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.941,P<0.001)。腦膠質(zhì)瘤組HDGF mRNA、蛋白(分別經(jīng)ELISA、Western blotting測(cè)定)表達(dá)水平與MVD呈正相關(guān)(r=0.562、0.382、0.225，P<0.05)，VEGF mRNA、蛋白(分別經(jīng)ELISA、Western blotting測(cè)定)表達(dá)水平與MVD呈正相關(guān)(r=0.676、0.471、0.184，P<0.05)。HDGF表達(dá)低水平、高水平的腦膠質(zhì)瘤患者中位生存時(shí)間分別為13.6〔95%CI(11.0,16.1)〕、8.4〔95%CI(6.6,10.2)〕個(gè)月，其生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.938，P=0.002)。VEGF表達(dá)低水平、高水平的腦膠質(zhì)瘤患者中位生存時(shí)間分別為14.3〔95%CI(12.2,16.8)〕、12.6〔95%CI(10.0,15.1)〕個(gè)月，其生存曲線比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.735，P=0.391)。MVD低水平、高水平的腦膠質(zhì)瘤患者中位生存時(shí)間分別為14.8〔95%CI(12.3,17.3)〕、10.4〔95%CI(8.1,12.6)〕個(gè)月，其生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.307，P=0.038)。結(jié)論腦膠質(zhì)瘤組織中HDGF、VEGF表達(dá)水平異常升高與腫瘤微血管形成緊密相關(guān)，可作為判斷腫瘤血管生成和疾病預(yù)后的參考標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】神經(jīng)膠質(zhì)瘤；肝癌衍生生長(zhǎng)因子；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；腫瘤微血管密度

符黃德，羅起勝，鄧元央，等.肝癌衍生生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與腫瘤微血管密度的相關(guān)性研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2016，19(17)：2019-2023.[www.chinagp.net]

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腦膠質(zhì)瘤是源自神經(jīng)上皮的腫瘤，又稱膠質(zhì)細(xì)胞瘤，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的、預(yù)后較差的原發(fā)性腫瘤，年發(fā)病率約5/10萬(wàn)，發(fā)病高峰年齡在30～40歲[1]。目前，對(duì)于腦膠質(zhì)瘤的治療手段主要以手術(shù)為主，術(shù)后輔以放療、化療，但術(shù)后平均存活時(shí)間僅3～5年，世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)者為1～2年，其總體治療效果仍不理想。因此，尋找新的治療途徑或靶點(diǎn)是腦膠質(zhì)瘤的主要研究方向[2]。肝癌衍生生長(zhǎng)因子(HDGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)均是血管生成的關(guān)鍵促進(jìn)因子，能刺激腫瘤新生血管的形成，并參與介導(dǎo)肝癌、肺癌、腎癌和顱內(nèi)腫瘤等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[3-4]。學(xué)者普遍認(rèn)為，抑制腫瘤血管生成是顱內(nèi)惡性腫瘤(如腦膠質(zhì)瘤等)的分子治療新策略之一[5]。本研究旨在探討腦膠質(zhì)瘤組織中HDGF和VEGF表達(dá)與腫瘤血管生成的關(guān)系，并初步討論其臨床意義。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2008年3月—2013年6月于右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院診治的腦膠質(zhì)瘤患者52例為腦膠質(zhì)瘤組，其中間變性星形細(xì)胞瘤31例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤15例，少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤6例；左側(cè)顳葉15例，右側(cè)顳葉12例，右側(cè)顳枕部10例，左側(cè)額葉6例，右側(cè)額葉3例，右側(cè)丘腦2例，左側(cè)頂葉2例，胼胝體部1例，右側(cè)頂葉1例；世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)Ⅰ級(jí)11例，Ⅱ級(jí)19例，Ⅲ級(jí)18例，Ⅳ級(jí)4例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)術(shù)后病理學(xué)診斷證實(shí)為腦膠質(zhì)瘤；(2)白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4×109/L，血小板計(jì)數(shù)≥100×109/L；(3)無(wú)明顯心、肝、腎、肺功能異常；(4)無(wú)免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)等其他系統(tǒng)的基礎(chǔ)疾病，無(wú)嚴(yán)重感染或乙型肝炎、HIV和人乳頭狀瘤病毒感染等；(5)Karnofsky功能評(píng)分>70分，近1.0個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)任何抗腫瘤治療；(6)預(yù)計(jì)生存時(shí)間>3.0個(gè)月。另選取同期于本院行顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)患者52例為對(duì)照組，并排除患有其他可能影響HDGF、VEGF表達(dá)水平的血管系統(tǒng)腫瘤者?；颊呒凹覍倬橥獗狙芯浚炇鹬橥鈺?，研究方案亦通過(guò)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集將腦膠質(zhì)瘤組腫瘤組織和對(duì)照組正常腦組織標(biāo)本取出后，部分組織迅速置于液氮中冷凍，隨后置于-80 ℃冰箱保存，用于實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和Western blotting檢測(cè)；余組織采用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，用于腫瘤微血管密度(MVD)的觀察。

1.2.2實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR

1.2.2.1主要儀器和試劑總RNA提取試劑盒由南京凱基生物科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)(批號(hào)KGA1203)；TaKaRa反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR擴(kuò)增試劑盒均購(gòu)于寶生物工程(大連)有限公司(批號(hào)D6110A和DRR081A)；熒光定量PCR儀由美國(guó)Thermo Fisher公司生產(chǎn)，型號(hào)7500 Fast型；低溫冷凍超速離心機(jī)和NanoDrop 2000c分光光度計(jì)均由美國(guó)Thermo Fisher公司提供。PCR引物的合成均由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，HDGF、VEGF引物序列參考文獻(xiàn)[6-7]，HDGF上游引物序列：5′-CCGCTCGAGCTACATGTCGCGATCCAACCGG-3′，下游引物序列：5′-CGAAGCTTCCACCAGGCTCTCATGATCTCT-3′；VEGF上游引物序列：5′-CTACCTCCACCATGCCAAGT-3′，下游引物序列：5′-ATGATTCTGCCCTCCTCCTT-3′；β-actin上游引物序列：5′-CAGCTACGAGCTGCCTGACG-3′，下游引物序列：5′-CCTAGAAGCATTTGCGGTGG-3′。

1.2.2.2總RNA提取利用Trizol法提取總RNA，整個(gè)提取過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，利用分光光度計(jì)測(cè)定提取的RNA濃度，取1 μg RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA(20 μl體系)，結(jié)束后將cDNA稀釋10倍后置于-80 ℃冰箱備用。

1.2.2.3DNA擴(kuò)增以25 μl體系的模板量進(jìn)行擴(kuò)增，并保持所有目的基因引物量一致，以β-actin作為內(nèi)參對(duì)照；PCR條件均為94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性60 s,58 ℃退火60 s，72 ℃延伸120 s，持續(xù)30個(gè)循環(huán)；65～95 ℃繪制溶解曲線；選擇SYBR Green I/HRM Dye通道，讀取Ct值；每個(gè)樣本各目的基因設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，分別計(jì)算各樣本基因的Ct值，以2-ΔΔCt方法進(jìn)行定量分析，并用β-actin的Ct值進(jìn)行校正。

1.2.3ELISA將腫瘤組織和正常腦組織裂解后提取蛋白，取上清液用于ELISA；HDGF試劑盒由上海凱博生化試劑有限公司提供，VEGF試劑盒購(gòu)于北京博凌科為生物科技有限公司，檢測(cè)過(guò)程由專業(yè)檢驗(yàn)技術(shù)人員嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作完成。

1.2.4Western blotting將腫瘤組織和正常腦組織裂解后提取蛋白，BCA蛋白定量，取每例樣本各15 μg蛋白行十二烷基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳、轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，再分別孵育HDGF一抗(1∶500)、VEGF一抗(1∶500)和β-actin(1∶200)(均由美國(guó)Santa Cruz公司提供)，4 ℃過(guò)夜；洗滌后1∶5 000孵育辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗(購(gòu)自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，ECL化學(xué)發(fā)光后，凝膠成像系統(tǒng)顯像，采用Image J軟件進(jìn)行蛋白定量分析。

1.2.5MVD以CD105作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，其染色可呈棕色或棕黃色，以10%胞質(zhì)呈棕黃色者定義為表達(dá)陽(yáng)性；陽(yáng)性計(jì)數(shù)參照Eichten等[8]報(bào)道的方法，將與相鄰微血管、腫瘤細(xì)胞或其他結(jié)締組織不相連的任何棕黃色區(qū)域均作為一條獨(dú)立的微血管；先在100倍顯微鏡下全面觀察切片，確定腫瘤組織內(nèi)血管密度最富集的區(qū)域；再在200倍顯微鏡下，將與周圍腫瘤細(xì)胞和結(jié)締組織成分明顯區(qū)別的任何棕黃色內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢作為一條微血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也作為一條微血管，觀察5個(gè)視野內(nèi)微血管數(shù)計(jì)算MVD。

1.3隨訪觀察自病理檢查確診起，追蹤隨訪觀察腦膠質(zhì)瘤患者至2015-07-30，第1年每個(gè)月隨訪1次，之后每3個(gè)月隨訪1次；隨訪終點(diǎn)為死亡或截止時(shí)間。

2結(jié)果

2.1一般資料兩組患者性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、Karnofsky功能評(píng)分比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)表1)。

表1　兩組患者一般資料比較

注：BMI=體質(zhì)指數(shù)；a為χ2值

2.2HDGF、VEGF mRNA及蛋白表達(dá)水平腦膠質(zhì)瘤組HDGF、VEGF mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組，經(jīng)ELISA、Western blotting測(cè)定的HDGF、VEGF表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。

2.3MVD腦膠質(zhì)瘤組MVD為(74.3±10.4)個(gè)/視野，高于對(duì)照組的(9.6±1.4)個(gè)/視野，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.941,P<0.001)。

2.4HDGF、VEGF mRNA及蛋白表達(dá)水平與MVD的相關(guān)性腦膠質(zhì)瘤組HDGF mRNA、蛋白(分別經(jīng)ELISA、Western blotting測(cè)定)表達(dá)水平與MVD呈正相關(guān)(r=0.562、0.382、0.225，P<0.05)，VEGF mRNA、蛋白(分別經(jīng)ELISA、Western blotting測(cè)定)表達(dá)水平與MVD呈正相關(guān)(r=0.676、0.471、0.184，P<0.05)。對(duì)照組患者VEGF、HDGF mRNA及蛋白表達(dá)水平與MVD未見(jiàn)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。

Table 2Comparison of HDGF and VEGF mRNA and protein expression between the two groups

組別例數(shù)HDGFmRNA 蛋白(ELISA,ng/L) 蛋白(Westernblotting)VEGFmRNA 蛋白(ELISA,ng/L) 蛋白(Westernblotting)對(duì)照組521.035.9±3.51.01.017.9±1.51.0膠質(zhì)瘤組524.7±0.550.8±5.33.0±0.36.4±0.521.6±4.63.6±0.6t值4.8576.4294.5925.14010.3256.192P值0.012<0.0010.0090.004<0.001<0.001

注：HDGF=肝癌衍生生長(zhǎng)因子，VEGF=血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,ELISA=酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

2.5生存分析HDGF表達(dá)低水平、高水平的腦膠質(zhì)瘤患者中位生存時(shí)間分別為13.6〔95%CI(11.0,16.1)〕、8.4〔95%CI(6.6,10.2)〕個(gè)月，其生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.938，P=0.002，見(jiàn)圖1)。VEGF表達(dá)低水平、高水平的腦膠質(zhì)瘤患者中位生存時(shí)間分別為14.3〔95%CI(12.2,16.8)〕、12.6〔95%CI(10.0,15.1)〕個(gè)月，其生存曲線比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.735，P=0.391，見(jiàn)圖2)。MVD低水平、高水平的腦膠質(zhì)瘤患者中位生存時(shí)間分別為14.8〔95%CI(12.3,17.3)〕、10.4〔95%CI(8.1,12.6)〕個(gè)月，其生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.307，P=0.038，見(jiàn)圖3)。

圖1　不同HDGF表達(dá)水平的腦膠質(zhì)瘤患者生存曲線

Figure 1Survival curve of glioma patients with different HDGF expression levels

3討論

腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，其可呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，與正常腦組織界限不清，難以完全切除，且對(duì)放療、化療不甚敏感，極易復(fù)發(fā)，具有典型的“三高一低”(高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高病死率、低治愈率)的特征[9]。當(dāng)前臨床上針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療策略主要以手術(shù)為主，術(shù)后輔以放療、化療，但患者的2年和5年生存率分別僅有20%和5%，治療效果并不理想[10]。因此，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，生物靶向治療逐步成為腦膠質(zhì)瘤治療的主要研究方向，尋找腫瘤診斷和預(yù)后的特異性分子標(biāo)志物以及藥物治療的靶標(biāo)也成為研究熱點(diǎn)。

圖2　不同VEGF表達(dá)水平的腦膠質(zhì)瘤患者生存曲線

Figure 2Survival curve of glioma patients with different VEGF expression levels

圖3　不同MVD水平的腦膠質(zhì)瘤患者生存曲線

在腦膠質(zhì)瘤眾多相關(guān)潛在分子標(biāo)志物中，HDGF備受矚目，其不僅參與細(xì)胞的增殖、分化，組織器官生長(zhǎng)發(fā)育，損傷后組織修復(fù)等病理生理過(guò)程，還被發(fā)現(xiàn)在肝癌、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌、黑色素瘤等多腫瘤組織中表達(dá)增高[11]。有研究表明，HDGF的表達(dá)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后緊密相關(guān)，很可能是在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮作用的重要癌基因[12]。然而，HDGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)研究目前仍較少，具體作用尚未十分明確。本研究結(jié)果顯示，在腦膠質(zhì)瘤組織中，HDGF mRNA、蛋白表達(dá)水平均明顯高于正常腦組織，與國(guó)外報(bào)道結(jié)果基本一致[13]。相關(guān)性分析顯示，HDGF mRNA、蛋白表達(dá)水平與MVD呈正相關(guān)，說(shuō)明HDGF在腫瘤血管生成中發(fā)揮重要作用。一方面，該結(jié)果提示通過(guò)阻斷或遏制HDGF的過(guò)表達(dá)能夠抑制腫瘤血管的生成，實(shí)現(xiàn)對(duì)腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的抑制；另一方面也表明HDGF可能不僅參與介導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程，還可調(diào)控腦膠質(zhì)瘤的血供系統(tǒng)。隨訪發(fā)現(xiàn)，HDGF表達(dá)低水平患者的生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于高水平者，印證了HDGF高表達(dá)促進(jìn)腫瘤形成的結(jié)論，也說(shuō)明HDGF表達(dá)水平可能與腦膠質(zhì)瘤的疾病預(yù)后緊密相關(guān)，靶向干預(yù)HDGF可能取得良好的效果。

腫瘤的血管產(chǎn)生是十分復(fù)雜的病理生理過(guò)程，只有充分的血供才能支持腫瘤組織的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。VEGF是促進(jìn)腫瘤血管生成的關(guān)鍵刺激因子，幾乎參與了腫瘤血管生成的每個(gè)環(huán)節(jié)[14]。VEGF可以通過(guò)旁分泌等方式，加快血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖速度，重構(gòu)血管，促進(jìn)新生血管的形成。一方面，VEGF可能促進(jìn)原有血管網(wǎng)的擴(kuò)張和過(guò)度生長(zhǎng)，另一方面，也能刺激血管內(nèi)皮祖細(xì)胞形成新生血管。由于血管生成前腫瘤細(xì)胞極少能夠進(jìn)入血液循環(huán)，因此MVD常被用于判定腫瘤血管的生成情況[15]。本研究利用CD105標(biāo)記腫瘤微血管，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤患者M(jìn)VD明顯高于對(duì)照組，而且VEGF mRNA、蛋白表達(dá)水平與MVD呈正相關(guān)，提示VEGF在腦膠質(zhì)瘤形成中扮演血管生長(zhǎng)因子的角色，參與腫瘤血管的形成，為腫瘤組織提供養(yǎng)分，從而促進(jìn)其過(guò)度增殖。同時(shí)，在腦膠質(zhì)瘤組織中VEGF mRNA、蛋白表達(dá)水平同樣高于對(duì)照組，提示VEGF可作為判斷腫瘤細(xì)胞血管生成的參考標(biāo)志物。但是，在隨訪中并未發(fā)現(xiàn)不同VEGF表達(dá)水平患者生存時(shí)間存在差異，分析其原因可能有：納入研究的樣本數(shù)量較少，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)分析缺乏差異；VEGF的表達(dá)可能僅參與了腦膠質(zhì)瘤血管生成的前期，而當(dāng)病灶逐漸形成之后，對(duì)血供的需求下降，進(jìn)而VEGF的表達(dá)也相應(yīng)降低，導(dǎo)致這一結(jié)果的具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤組織中HDGF、VEGF表達(dá)水平異常升高與腫瘤微血管形成過(guò)程緊密相關(guān)，可作為判斷腫瘤血管生成和疾病預(yù)后的參考標(biāo)志物；靶向阻斷HDGF和VEGF的表達(dá)，能夠抑制腫瘤血管的生成，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)遏制腫瘤生長(zhǎng)的目的，是潛在的抗腦膠質(zhì)瘤治療策略。

作者貢獻(xiàn)：符黃德進(jìn)行課題設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；羅起勝、鄧元央、黃華東、羅琨祥、李傳玉、韋傳東、陳源紅進(jìn)行課題實(shí)施、評(píng)估、資料收集；黃海能進(jìn)行質(zhì)量控制及審校。

本文無(wú)利益沖突。

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(本文編輯：吳立波)

Expression of Hepatoma-derived Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor and Their Correlation With Tumor Microvessel Density in Gliomas

FUHuang-de,LUOQi-sheng,DENGYuan-yang,etal.

DepartmentofNeurosurgery,theAffiliatedHospitalofYoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise533000,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of hepatoma-derived growth factor (HDGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) and their correlation with tumor microvessel density (MVD) in gliomas.MethodsFrom March 2008 to June 2013,we enrolled 52 patients with gliomas who received treatment in the Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities as gliomas group,and enrolled 52 patients who undertook decompression for traumatic brain injury as control group.We collected tumor tissue of glioma group and normal brain tissue of control group and made cryopreservation.Real-time reverse transcription-PCR was were employed to determine the expression of HDGF and VEGF mRNA.We split the tumor tissue and normal cerebral tissue and extracted protein,and ELISA and Western blotting were employed to determine the expression of HDGF and VEGF.With CD105protein as the specific marker for vascular endothelial cells,microvessel count was recorded in five fields of view through microscope,and MVD was calculated.The follow-up observation on the patients was performed since the pathological diagnosis until July 30,2015 or death.ResultsGlioma group were higher in HDGF and VEGF mRNA expression,HDGF and VEGF expression determined by ELISA and Western blotting than control group(P<0.05).The MVD of glioma group was(74.3±10.4)/field of view,higher than(9.6±1.4)/field of view of control group(t=15.941,P<0.001).For patients in glioma group,HDGF mRNA and protein expression determined by ELISA and Western blotting had positive correlation with MVD(r=0.562，0.382，0.225； P<0.05),and VEGF mRNA and protein expression determined by ELISA and Western blotting had positive correlation with MVD(r=0.676，0.471，0.184； P<0.05).The median survival time of patients with low HDGF expression and patients with high HDGF expression was 13.6〔95%CI(11.0,16.1)〕 and 8.4〔95%CI(6.6,10.2)〕 months respectively;patients with different HDGF expression level were significantly different in survival curve (χ2=9.938，P=0.002).The median survival time of patients with low VEGF expression and patients with high VEGF expression was 14.3〔95%CI(12.2,16.8)〕 and 12.6〔95%CI(10.0,15.1)〕 months respectively;patients with different VEGF expression level were not significantly different in survival curve (χ2=0.735，P=0.391).The median survival time of patients with low MVD level and patients with high MVD level was 14.8〔95%CI(12.3,17.3)〕 and 10.4〔95%CI(8.1,12.6)〕 months respectively;patients with different MVD levels were significantly different in survival curve(χ2=4.307，P=0.038).ConclusionThe abnormal elevation of HDGF and VEGF expression level in glioma tissue is closely correlated with the development of tumor microvessel,thus HDGF and VEGF expression level can be used as reference marks for tumor angiogenesis and disease prognosis.

【Key words】Glioma；Hepatoma-derived growth factor；Vascular endothelial growth factor；Tumor microvessel density

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(2014GXNSFBA118146)

通信作者：黃海能，533000廣西百色市，右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科；E-mail:bshuanghn@163.com

【中圖分類號(hào)】R 730.264

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.17.008

(收稿日期：2015-10-10；修回日期：2016-03-22)