慢性乙型肝炎病毒感染者外周血輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的變化及二者平衡的研究

婁 鳴，游 晶，劉懷鄂，陳紅英，涂 琛，丁 潔，靳 智

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·論著·

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的變化及二者平衡的研究

婁 鳴，游 晶，劉懷鄂，陳紅英，涂 琛，丁 潔，靳 智

650032云南省昆明市，昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科

【摘要】目的分析慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血輔助性T淋巴細(xì)胞17(Th17)和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)的變化及Th17/Treg平衡狀態(tài)，并探討Th17/Treg平衡在慢性HBV感染疾病發(fā)展過程中的作用。方法選取2013年11月—2015年12月昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院診治的慢性HBV感染者142例為研究對(duì)象，其中慢性無癥狀HBV(ASC)攜帶者23例(ASC組)、慢性乙型肝炎(CHB)患者51例(CHB組)、乙型肝炎肝硬化(LC)患者37例(LC組)、乙型肝炎相關(guān)性肝細(xì)胞癌(HCC)患者31例(HCC組)。同期選取本院體檢健康者26例為正常對(duì)照組。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定外周血Th17、Treg表達(dá)率，并計(jì)算Th17/Treg比值，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測(cè)定患者血清HBV-DNA載量，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)水平。結(jié)果CHB組、LC組、HCC組外周血Th17、Treg表達(dá)率均高于正常對(duì)照組和ASC組(P<0.05)；LC組外周血Th17表達(dá)率高于CHB組，HCC組外周血Th17表達(dá)率低于CHB組和LC組(P<0.05)；HCC組外周血Treg表達(dá)率高于CHB組和LC組(P<0.05)；HCC組外周血Th17/Treg比值低于正常對(duì)照組、CHB組、LC組(P<0.05)。CHB組、LC組、HCC組患者血清HBV-DNA載量均低于ASC組(P<0.05)。CHB組、LC組、HCC組患者ALT、AST、TBIL水平均高于正常對(duì)照組和ASC組(P<0.05)；LC組ALT、TBIL水平高于CHB組(P<0.05)；HCC組ALT水平低于CHB組和LC組，AST水平高于CHB組和LC組，TBIL水平低于LC組(P<0.05)。CHB組Th17表達(dá)率與ALT、AST和TBIL呈正相關(guān)，Th17/Treg比值與ALT、AST水平呈正相關(guān)(P<0.05)；LC組Th17表達(dá)率與ALT水平呈正相關(guān)，Treg表達(dá)率與ALT、AST水平呈正相關(guān)(P<0.05)；其余各指標(biāo)間無直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。結(jié)論Th17和Treg在慢性HBV感染相關(guān)肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，Th17/Treg失衡可能與慢性乙型肝炎病程進(jìn)展密切相關(guān)，為臨床進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒；乙型肝炎，慢性；T淋巴細(xì)胞，輔助；T淋巴細(xì)胞,調(diào)節(jié)性

婁鳴，游晶，劉懷鄂，等.慢性乙型肝炎病毒感染者外周血輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的變化及二者平衡的研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2016，19(18)：2115-2120.[www.chinagp.net]

Lou M，You J，Liu HE,et al.Changes of peripheral Th17 and Treg and Th17/Treg balance in patients with chronic hepatitis B virus infection[J].Chinese General Practice，2016，19(18)：2115-2120.

全世界約有20億人感染過乙型肝炎病毒(HBV)，其中3.5～4.0億人轉(zhuǎn)變?yōu)槁訦BV攜帶者，每年有50～120萬(wàn)人死于HBV相關(guān)肝硬化(LC)和肝癌[1]。目前，HBV持續(xù)感染的機(jī)制尚不完全清楚，但有研究表明，其與宿主的病毒特異性細(xì)胞免疫缺陷有關(guān)，這可能是慢性HBV感染者不能得到有效治療的一個(gè)重要原因[2]。HBV特異性的CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞在HBV感染中發(fā)揮了重要作用[3-4]。輔助性T淋巴細(xì)胞17(T helper cell 17,Th17)和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(T regulatory cell,Treg)是近年來新發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)CD4+T細(xì)胞亞群，正常情況下，機(jī)體內(nèi)的Th17/Treg處于相對(duì)穩(wěn)定的免疫平衡狀態(tài)[5]。Th17/Treg失衡與HBV感染相關(guān)肝臟疾病的病情變化和臨床轉(zhuǎn)歸有關(guān)[6]。本研究分析慢性HBV感染者外周血Th17和Treg的變化及Th17/Treg平衡狀態(tài)，探討Th17/Treg平衡在慢性HBV感染疾病發(fā)展過程中的可能作用，為進(jìn)一步了解HBV感染相關(guān)肝臟疾病的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制及 HBV感染慢性化、疾病進(jìn)展的機(jī)制提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年11月—2015年12月昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院診治的慢性HBV感染者142例為研究對(duì)象，其中慢性無癥狀HBV(chronic asymptomatic HBV carrier,ASC)攜帶者23例(ASC組)、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者51例(CHB組)、乙型肝炎LC患者37例(LC組)、乙型肝炎相關(guān)性肝細(xì)胞癌(HBV-related hepatocellular carcinoma,HCC)患者31例(HCC組)。同期選取本院體檢健康者26例為正常對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者發(fā)病前均未行抗病毒治療；(2)患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟疾病學(xué)會(huì)分會(huì)與感染病學(xué)分會(huì)2010年聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]和2009年制訂的原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)其他肝炎病毒感染患者；(2)酒精性肝炎、自身免疫性肝炎等非病毒性肝炎患者；(3)其他嚴(yán)重的全身性疾病患者。本研究已通過本院倫理委員會(huì)同意，研究對(duì)象均知情同意。5組研究對(duì)象性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而年齡比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集用含肝素鈉的抗凝管采集研究對(duì)象外周靜脈血約5 ml，混勻，待用。

表1　5組一般資料比較

注：a為χ2值，ASC=慢性無癥狀乙型肝炎病毒，CHB=慢性乙型肝炎，LC=肝硬化，HCC=乙型肝炎相關(guān)性肝細(xì)胞癌

1.2.2外周血中Th17及Treg的培養(yǎng)及測(cè)定

1.2.2.1外周血細(xì)胞體外刺激培養(yǎng)將上述采集的含肝素鈉抗凝管中的外周靜脈血混勻，取300 μl加入容量為15 ml離心管中，取含10%胎牛血清的PRMI 1640培養(yǎng)基900 μl于上述離心管中，依次加入蛋白酶抑制劑(Protein Transport Inhibitor)0.8 μl、濃度為1 μg/ml的離子霉素(Ion)1.2 μl、濃度為50 ng/ml的佛波酯(PMA)1.2 μl,用巴氏吸管吹打混勻，將離心管中液體移入T25培養(yǎng)瓶中，將T25培養(yǎng)瓶移至溫度為37 ℃、濃度為5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 h。試驗(yàn)過程應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作。

1.2.2.2流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定外周血Th17、Treg表達(dá)率將培養(yǎng)后的外周血細(xì)胞移至2 ml EP管內(nèi)，以3 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，加入Human Foxp3 Buffer A(按10×BufferA：dH2O=1∶9配備)(稀釋1×)1 500 μl，充分混勻，避光保存20 min后以4 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，加入(1×)磷酸鹽緩沖液(PBS)1 000 μl，混勻后以4 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，加入Human Foxp3 Buffer C (按Buffer B：1×Bufer A=1∶50配備)500 μl，充分混勻，避光保存30 min后以4 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，加入(1×)PBS 1 000 μl，混勻后以4 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，再次加入(1×)PBS 1 000 μl，混勻后以4 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，加入(1×)PBS 50 μl和Human Th17/Treg Phenotyping Cocktail 4 μl，充分混勻，避光保存40 min后加入(1×)PBS 500 μl，以4 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)；棄上清液，保留沉淀，加入(1×)PBS 350 μl，混勻后移入流式細(xì)胞管中上機(jī)測(cè)定外周血Th17、Treg表達(dá)率，計(jì)算Th17/Treg比值。

1.2.3血清HBV-DNA載量測(cè)定采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測(cè)定患者血清HBV-DNA載量。RT-PCR檢測(cè)系統(tǒng)(FQD-33A型)及試劑均由深圳市匹基生物工程股份有限公司提供，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。最終將血清HBV-DNA載量進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行比較。

1.2.4肝功能測(cè)定采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)水平，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2結(jié)果

2.15組外周血Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值比較5組外周血Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組、LC組、HCC組外周血Th17、Treg表達(dá)率均高于正常對(duì)照組和ASC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；LC組外周血Th17表達(dá)率高于CHB組，HCC組外周血Th17表達(dá)率低于CHB組和LC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HCC組外周血Treg表達(dá)率高于CHB組和LC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HCC組外周血Th17/Treg比值低于正常對(duì)照組、CHB組、LC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。2.24組患者血清HBV-DNA載量比較4組患者血清HBV-DNA載量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組、LC組、HCC組患者血清HBV-DNA載量均低于ASC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表3)。2.35組ALT、AST、TBIL水平比較5組ALT、AST、TBIL水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組、LC組、HCC組患者ALT、AST、TBIL水平均高于正常對(duì)照組和ASC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常對(duì)照組與ASC組ALT、AST、TBIL水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；LC組ALT、TBIL水平高于CHB組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HCC組ALT水平低于CHB組和LC組，AST水平高于CHB組和LC組，TBIL水平低于LC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表4)。

2.45組外周血Th17表達(dá)率、Treg表達(dá)率、Th17/Treg比值與ALT、AST、TBIL水平的相關(guān)性分析CHB組Th17表達(dá)率與ALT、AST和TBIL呈正相關(guān)，Th17/Treg比值與ALT、AST水平呈正相關(guān)(P<0.05)；LC組Th17表達(dá)率與ALT水平呈正相關(guān)，Treg表達(dá)率與ALT、AST水平呈正相關(guān)(P<0.05)。其余各指標(biāo)間無直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05，見表5)。

Table 2Comparison of the expression rates of Th17 and Treg and Th17/Treg among the 5 groups

組別例數(shù)Th17表達(dá)率(%)Treg表達(dá)率(%)Th17/Treg比值正常對(duì)照組261.6±0.61.2±0.51.7±1.0ASC組231.3±1.41.3±0.81.4±1.7CHB組513.5±1.4ab2.4±0.8ab1.6±1.0LC組374.4±1.7abc2.6±1.2ab2.1±1.3HCC組312.6±1.2abcd3.4±0.7abcd0.8±0.4acdF值27.93431.4036.074P值<0.001<0.001<0.001

注：Th17=輔助性T淋巴細(xì)胞17，Treg=調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞；與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與ASC組比較，bP<0.05；與CHB組比較，cP<0.05；與LC組比較，dP<0.05

表3　4組患者血清HBV-DNA載量比較

注：HBV=乙型肝炎病毒；與ASC組比較，aP<0.05；b為經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換所得

表4　5組ALT、AST、TBIL水平比較

注：ALT=丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，AST=天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，TBIL=總膽紅素；與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與ASC組比較，bP<0.05；與CHB組比較，cP<0.05；與LC組比較，dP<0.05

3討論

目前，關(guān)于HBV感染相關(guān)肝臟疾病的致病機(jī)制尚未完全闡明，但大多數(shù)研究認(rèn)為，其與機(jī)體的免疫功能紊亂密切相關(guān)[7-9]。人體感染HBV后，機(jī)體自身免疫狀態(tài)是決定其轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素之一，大多數(shù)的慢性HBV感染患者是在自身的免疫缺陷、HBV基因突變逃避免疫清除等情況下形成的[10]。傳統(tǒng)研究認(rèn)為，HBV感染相關(guān)肝臟疾病的免疫紊亂主要與CD4+T淋巴細(xì)胞Th1、Th2有關(guān)[11]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，除了Th1、Th2外，另一對(duì)CD4+T細(xì)胞——Th17和Treg在HBV感染中也發(fā)揮重要的作用[12]。在正常人體內(nèi)，Th17、Treg表達(dá)率相對(duì)較低，其分化受體內(nèi)代謝環(huán)境的影響，但Th17/Treg保持相對(duì)穩(wěn)定[13]。由Th17產(chǎn)生的特異性白介素(IL)-17A與機(jī)體的自身免疫性疾病、腫瘤、宿主的抗病原微生物反應(yīng)密切相關(guān)，IL-17F主要與宿主黏膜免疫有關(guān)[14-15]。Treg能分泌IL-4、IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)等多種細(xì)胞因子，主要介導(dǎo)免疫耐受，也與自身免疫性疾病、腫瘤、移植免疫等密切相關(guān)[16-17]。HBV感染后，在患者體內(nèi)隨著病情進(jìn)展，Th17與Treg也可能存在動(dòng)態(tài)演變過程。

表55組受試者外周血Th17表達(dá)率、Treg表達(dá)率、Th17/Treg比值與ALT、AST、TBIL的相關(guān)性分析(r值)

Table 5Correlation analysis between the expression rates of Th17 and Treg and Th17/Treg and ALT,AST and TBIL in the subjects of the 5 groups

組別ALTASTTBIL正常對(duì)照組 Th17表達(dá)率0.2080.0630.058 Treg表達(dá)率0.2960.2400.143 Th17/Treg比值0.3350.0030.147ASC組 Th17表達(dá)率0.2350.1170.157 Treg表達(dá)率0.3400.0500.360 Th17/Treg比值0.1530.1550.016CHB組 Th17表達(dá)率0.634a0.596a0.345a Treg表達(dá)率0.1670.1530.232 Th17/Treg比值0.630a0.563a0.115LC組 Th17表達(dá)率0.332a0.2630.153 Treg表達(dá)率0.525a0.501a0.215 Th17/Treg比值0.2780.0810.157HCC組 Th17表達(dá)率0.0560.1440.174 Treg表達(dá)率0.2110.2320.095 Th17/Treg比值0.1040.0270.152

注：a表示P<0.05

本研究發(fā)現(xiàn)，CHB組、LC組、HCC組外周血Th17、Treg表達(dá)率均高于正常對(duì)照組和ASC組，LC組外周血Th17表達(dá)率高于CHB組，HCC組外周血Th17表達(dá)率低于CHB組和LC組，HCC組外周血Treg表達(dá)率高于CHB組和LC組，HCC組外周血Th17/Treg比值低于正常對(duì)照組、CHB組、LC組。以上結(jié)果說明感染HBV后，患者Th17和Treg可能均被激活，但激活程度不同，在病程進(jìn)展過程中，Th17/Treg比值減小，提示可能是Treg的高度分化，抑制了機(jī)體對(duì)HBV的免疫清除，造成不可逆轉(zhuǎn)的肝臟損害。

慢性HBV感染的自然病程一般分為免疫耐受期、免疫清除期、低復(fù)制期和再活躍期。肝細(xì)胞病變主要取決于機(jī)體的免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答既可以導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，又可清除病毒，甚至可誘導(dǎo)病毒的變異。當(dāng)機(jī)體處于免疫耐受狀態(tài)時(shí)，不發(fā)生免疫應(yīng)答，多成為慢性無癥狀攜帶者。CHB的發(fā)生、發(fā)展與血清HBV-DNA載量、肝細(xì)胞功能及宿主的免疫狀態(tài)相關(guān)，HBV并不能直接損傷肝細(xì)胞，肝細(xì)胞的損傷主要是由機(jī)體的免疫應(yīng)答引起。當(dāng)進(jìn)入免疫清除期時(shí)，機(jī)體的免疫應(yīng)答一方面可以清除HBV，另一方面可以造成肝細(xì)胞的損傷，表現(xiàn)為肝功能指標(biāo)(ALT、AST、TBIL)的升高而血清HBV-DNA載量下降[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，CHB組血清HBV-DNA載量較ASC組下降，ALT、AST、TBIL水平較正常對(duì)照組、ASC組升高，本研究結(jié)果與鄒曉毅等[18]研究結(jié)果相似。

本研究還發(fā)現(xiàn)，CHB組Th17表達(dá)率與ALT、AST和TBIL呈正相關(guān)，Th17/Treg比值與ALT、AST水平呈正相關(guān)，LC組Th17表達(dá)率與ALT水平呈正相關(guān)，Treg表達(dá)率與ALT、AST水平呈正相關(guān)，提示Th17、Treg與肝功能相關(guān)。

LC的形成與肝星形細(xì)胞(hepatic stellatecell,HSC)密切相關(guān)，HSC在TGF-β的作用下能分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)，ECM在肝臟內(nèi)過度沉積使肝臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，出現(xiàn)肝纖維化、LC。Treg可以通過分泌TGF-β作用于HSC，刺激HSC分泌ECM[19-20]；同時(shí)Th17通過分泌IL-17作用于HSC表面的IL-17R，使HSC活化并分泌IL-6、IL-23等細(xì)胞因子促使TGF-β、腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達(dá)增加，抑制自然殺傷細(xì)胞對(duì)HSC的殺傷作用而增強(qiáng)其纖維化作用[21]。HBV感染與HCC的發(fā)生關(guān)系密切，現(xiàn)在認(rèn)為，HBV可與肝細(xì)胞內(nèi)的人染色體整合，整合后的肝細(xì)胞受到刺激后容易發(fā)生各種轉(zhuǎn)化。其中，HBV的X蛋白和截?cái)嗟那癝2/S多肽作為增強(qiáng)子可反式激活各種細(xì)胞因子，促進(jìn)已整合的肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)HCC的發(fā)生[22]。大部分HCC發(fā)生在HBV感染的晚期，尤以LC基礎(chǔ)上發(fā)生多見，通常伴有炎癥活動(dòng)，但是也有少部分與HBV感染相關(guān)肝細(xì)胞癌患者并無LC的證據(jù)，甚至其肝功能可一直正常。

免疫反應(yīng)引起的慢性炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)。Th17可以通過分泌IL-17促進(jìn)Th1分化和誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)活化，發(fā)揮抗腫瘤作用[23]；另一方面，Th17可以促進(jìn)一些血管因子如CXCL1、CXCL5、IL-8的生成，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用[24]。目前，Th17在HCC中的作用尚不清楚，考慮到CHB組和LC組Th17表達(dá)率、Th17/Treg比值較HCC組高，推測(cè)患者由肝炎發(fā)展到LC，再由LC發(fā)展到HCC，可能是從一個(gè)由炎癥主導(dǎo)的過程發(fā)展到一個(gè)由免疫抑制主導(dǎo)的過程。

綜上所述，Th17和Treg在慢性HBV感染相關(guān)肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，Th17/Treg失衡可能與CHB病程進(jìn)展密切相關(guān)，故Th17/Treg比值可作為檢測(cè)CHB病情的一個(gè)指標(biāo)，同時(shí)調(diào)節(jié)Th17和Treg的平衡關(guān)系可能成為治療CHB、LC的一個(gè)新策略；Th17、Treg與CHB患者的HBV-DNA間并無相關(guān)性，說明Th17、Treg本身并不能影響HBV的復(fù)制。由于腫瘤發(fā)生發(fā)展的特殊性及復(fù)雜性，Th17、Treg與HCC間的相互關(guān)系目前尚不清楚，需更進(jìn)一步的研究。

作者貢獻(xiàn)：婁鳴負(fù)責(zé)試驗(yàn)實(shí)施和論文撰寫；游晶負(fù)責(zé)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施；陳紅英、涂琛、丁潔、靳智負(fù)責(zé)試驗(yàn)實(shí)施、資料收集；劉懷鄂負(fù)責(zé)質(zhì)量控制與論文結(jié)構(gòu)完善及修改。

本文無利益沖突。

參考文獻(xiàn)

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(本文編輯：李婷婷)

Changes of Peripheral Th17 and Treg and Th17/Treg Balance in Patients With Chronic Hepatitis B Virus Infection

LOUMing，YOUJing，LIUHuai-e,etal.

DepartmentofInfectiousDisease,theFirstAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunming650032,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the changes of peripheral Th17 and Treg and Th17/Treg balance in patients with chronic hepatitis B virus(HBV)infection,and to explore the possible role in the development of chronic HBV infection.MethodsFrom November 2013 to December 2015,we enrolled 142 patients with chronic hepatitis B virus infection who received treatment in the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University.Among them，there were 23 patients with chronic asymptomatic HBV carrier(ASC group),51 patients with chronic hepatitis B(CHB group)，37 patients with HBV-related liver cirrhosis(LC group)，and 31 patients with HBV-related hepatocellular carcinoma(HCC group).In the same period，26 healthy people were enrolled in the hospital as normal control group.Flow cytometry was used to determine the expression rates of peripheral Th17 and Treg and Th17/Treg.RT-PCR was employed to determine HBV-DNA load,and fully automatic biochemical analyser was employed to detect ALT,AST and TBIL.ResultsCHB group,LC group and HCC group were higher than normal control group and ASC group in the expression rates of peripheral Th17 and Treg(P<0.05)；LC group was higher than CHB group in the expression rate of peripheral Th17，and HCC group was lower than CHB group and LC group in the expression rate of peripheral Th17(P<0.05)；HCC group was higher than CHB group and LC group in the expression rate of Treg(P<0.05)；HCC group was lower than normal control group，CHB group and LC group in peripheral Th17/Treg(P<0.05).CHB group,LC group and HCC group were lower than ASC group in serum HBV-DNA load(P<0.05).CHB group,LC group and HCC group were higher than normal control group and ASC group in the levels of ALT,AST and TBIL(P<0.05)；LC group was higher than CHB group in the levels of ALT and TBIL(P<0.05)；HCC group was lower in ALT level and higher in AST level than CHB group and LC group,and HCC group was lower than LC group in TBIL level(P<0.05).In CHB group,the expression rate of Th17 was positively correlated with the levels ALT，AST and TBIL，and Th17/Treg was positively correlated with the levels of ALT and AST(P<0.05)；in LC group,the expression rate of Th17 was positively correlated with ALT level,and the expression rate of Treg was positively correlated with the levels of ALT and AST(P<0.05)；there was no other linear correlation(P>0.05).ConclusionTh17 and Treg play an important role in the occurrence and development of chronic HBV infection related liver disease,and the imbalance of Th17/Treg may be closely correlated with the progress of chronic hepatitis B,which providesa basis for further clinical research.

【Key words】Hepatitis B virus；Hepatitis B,chronic；T-lymphocytes，helper;T-lymphocytes,regulatory

基金項(xiàng)目：云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011WS0053；2011FZ121；2012WS0028)；云南省教育廳基金項(xiàng)目(2013J053)

通信作者：游晶，650032 云南省昆明市，昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科；E-mail：jingyoukm@126.com

【中圖分類號(hào)】R 512.62

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.18.001

(收稿日期：2016-02-22；修回日期：2016-04-25)

·專題研究·

【編者按】乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染肝臟引起的對(duì)生命有潛在危害的疾病，是重要的全球健康問題。中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)表聲明稱，我國(guó)已成為全球?yàn)橐倚透窝?、肝硬化和肝癌付出最多社?huì)成本的國(guó)家。全球3.5億的HBV攜帶者中我國(guó)有近1億，且在全球每年約70萬(wàn)人的病毒性肝炎相關(guān)死亡人群中，我國(guó)占近50%。因此，不論是從急性傳染病角度還是從慢性肝臟疾病角度，HBV感染及其導(dǎo)致的慢性肝臟疾病及肝纖維化均是我國(guó)高度關(guān)注的問題。為此，本期特別邀請(qǐng)昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科主任游晶教授組織了關(guān)于HBV感染的相關(guān)肝臟疾病及抗病毒治療與T淋巴細(xì)胞免疫間關(guān)系的“專題研究”，以期為臨床關(guān)于乙型肝炎的研究與防治提供參考。