HPLC法測(cè)定枸櫞酸坦度螺酮片含量和有關(guān)物質(zhì)

李 婧，何黎黎，仇麗穎，李佳川(西南民族大學(xué)，四川 成都 610041)

HPLC法測(cè)定枸櫞酸坦度螺酮片含量和有關(guān)物質(zhì)

李 婧，何黎黎，仇麗穎，李佳川
(西南民族大學(xué)，四川 成都 610041)

摘 要：采用高效液相色譜法，用Luna C18柱(250×4.6mm，10μm)，以乙腈-0.01mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(35：65，pH3.0)為流動(dòng)相，流速：1ml/ min，柱溫：25℃，進(jìn)樣量20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)：239nm.在該色譜條件下枸櫞酸坦度螺酮和雜質(zhì)峰達(dá)到良好分離(R＞1.5)，枸櫞酸坦度螺酮在1.0～200.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r = 0.9991)；重復(fù)性及精密度良好(RSD＜2%)，3種濃度的平均回收率分別為100.17%、99.03%及99.75% (n =3).方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適用于枸櫞酸坦度螺酮片的含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查.

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；枸櫞酸坦度螺酮；含量測(cè)定

隨著生活節(jié)奏的加快，焦慮的發(fā)生率日益增加.新一代抗焦慮藥枸櫞酸坦度螺酮(圖1)屬于氮雜螺酮(azapirone)類藥物，是一種5-HT受體激動(dòng)劑，通過激動(dòng)5-HT1A的自身受體，從而調(diào)節(jié)中縫核投射到海馬區(qū)的5-HT，進(jìn)而抑制行動(dòng)抑制系統(tǒng)中的5-HT效應(yīng)，發(fā)揮抗焦慮作用[1-3].本品由日本住友制藥株式會(huì)社研制，1996年首次于日本上市.坦度螺酮適應(yīng)范圍較廣，對(duì)恐怖、抑郁、焦慮、煩躁和睡眠障礙等精神癥狀有效[4-8].坦度螺酮不良反應(yīng)少，安全性高，適宜長(zhǎng)期使用.但對(duì)于心功能、肝腎功能、呼吸功能不全及器質(zhì)性腦功能障礙者慎用[9-13].目前國(guó)外對(duì)坦度螺酮含量測(cè)定及有關(guān)物質(zhì)有一定研究，但報(bào)道較少，實(shí)驗(yàn)條件苛刻，本研究建立了高效液相色譜法測(cè)定坦度螺酮片，該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適用于坦度螺酮片的質(zhì)量控制.

圖1　枸櫞酸坦度螺酮的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure formula of citrate tandospirone

1　材料與儀器

1.1 儀器

日本島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀;色譜柱為L(zhǎng)una C18柱(250×4.6mm，10μm);Milli-Q Academic超純水儀，賽多利斯BS224S萬分之一電子天平.

1.2 材料

枸櫞酸坦度螺酮普通片(規(guī)格:10mg，批號(hào): 150912)由四川大學(xué)華西藥學(xué)院藥劑教研室研制.乙腈為色譜純(美國(guó)Fisher公司)，實(shí)驗(yàn)用水為重蒸餾水，其余試劑均采用分析純.

2　方法及結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱采用Luna C18柱(250×4.6mm，10μm);流速:1ml/ min，柱溫:30℃;進(jìn)樣量20μL.流動(dòng)相:乙腈-0.01mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(35:65，調(diào)PH至3.0)，檢測(cè)波長(zhǎng):239nm.理論塔板數(shù)按照枸櫞酸坦度螺酮峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，枸櫞酸坦度螺酮峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng)不低于1.5.

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 溶液的配制

對(duì)照品溶液配制:取枸櫞酸坦度螺酮標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，制成每1ml含枸櫞酸坦度螺酮10μg的溶液，作為對(duì)照品溶液.

供試品溶液配制:取本品10片，碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮1mg的細(xì)粉適量，置于100ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液.

2.2.2 含量測(cè)定

取對(duì)照品及供試品溶液各20μl進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，按照外標(biāo)法計(jì)算供試品枸櫞酸坦度螺酮的含量.

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 分析方法專屬性試驗(yàn)

對(duì)空白輔料溶液、照品溶液及供試品溶液進(jìn)行考察，HPLC色譜圖見圖2.結(jié)果表明流動(dòng)相及空白輔料不干擾枸櫞酸坦度螺酮的測(cè)定.

2.3.2 精密度試驗(yàn)

在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下，在同日內(nèi)對(duì)同一樣品測(cè)定6次，枸櫞酸坦度螺酮的日內(nèi)RSD為0.38%，表明精密度良好.

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

分別取三批樣品，于“2.1”項(xiàng)的色譜條件下，在不同日期進(jìn)行含量測(cè)定，枸櫞酸坦度螺酮的日間RSD分別為0.78%、0.59%、0.92%，表明重復(fù)性良好.

2.3.4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

室溫(25℃)條件下，取“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液溶液放置0、1、4、10、20小時(shí)，在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下測(cè)定，結(jié)果枸櫞酸坦度螺酮片含量的RSD為0.86%.結(jié)果表明樣品溶液在室溫(25℃)條件下20小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定.

2.3.5 線性關(guān)系檢測(cè)限及定量限

取枸櫞酸坦度螺酮對(duì)照品，分別制成濃度為1.0、5.0、10.0、20.0、100.0、200μg·ml-1的溶液，分別進(jìn)樣20μl，記錄峰面積.以枸櫞酸坦度螺酮峰面積為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程為: y =29827x - 5213.6(r =0.9991)，表明枸櫞酸坦度螺酮濃度與峰面積在1.0～200.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.取枸櫞酸坦度螺酮原料藥用流動(dòng)相稀釋成不同濃度溶液.測(cè)定主峰峰高及相同條件下的色譜基線噪聲，以信噪比3:1作為檢測(cè)限，以信噪比10:1作為定量限.枸櫞酸坦度螺酮檢測(cè)限為0.60 ng，定量限為1.85 ng.

2.3.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取枸櫞酸坦度螺酮對(duì)照品按處方比例加入輔料，用流動(dòng)相制成低、中、高三種濃度溶液(8.0、10.0和12.0μg·ml-1)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，按照外標(biāo)法計(jì)算，平均回收率分別為100.17%、99.03%及99.75%，RSD分別為2.01%、1.82%及1.36%(n =3).

2.4 含量測(cè)定結(jié)果

取3批樣品，照“2.2.1”色譜條件及“2.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量.含量測(cè)定結(jié)果見表1.

2.5 有關(guān)物質(zhì)檢查

2.5.1 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定法

取本品10片，碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置于100ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋溶解至刻度，濾過后取續(xù)濾液，作為供試品溶液;精密量取上述供試品溶液1ml，于100ml容量瓶加流動(dòng)相稀釋100倍，作為對(duì)照溶液.取供試品溶液，進(jìn)樣20μl，色譜圖時(shí)間保留至主峰出峰的2倍時(shí)間;另取對(duì)照溶液進(jìn)樣20μl，檢測(cè)靈敏度調(diào)節(jié)至主峰峰高約為滿量程的10-20%.記錄供試品溶液HPLC色譜圖中各雜質(zhì)峰面積，雜質(zhì)峰面積之和不得大于對(duì)照液主峰面積的1倍(1%).單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍(0.5%).

2.5.2 強(qiáng)制降解試驗(yàn)

氧化試驗(yàn):取樣品碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置100mL量瓶中，加過氧化氫溶液10 mL，室溫放置1小時(shí)后，用流動(dòng)溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣20μl，色譜圖見圖3 (A).

堿解試驗(yàn):取樣品碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置100mL量瓶中，加10ml 0.1mol·ml-1氫氧化鈉放置2 h，用鹽酸中和至中性，用流動(dòng)溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣20μl，色譜圖見圖3(B).

酸解試驗(yàn):取樣品碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置100mL量瓶中，加10 ml 0.1mol·ml-1鹽酸放置2小時(shí)，用氫氧化鈉中和至中性，用流動(dòng)溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣20μl，色譜圖見圖3(C).

高濕試驗(yàn):取樣品10片，RH90%的濕度下放置10天，碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置100mL量瓶中，用流動(dòng)溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣20μl，色譜圖見圖3(D).

高溫試驗(yàn):取樣品10片，在60(C時(shí)加熱10天，碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置100mL量瓶中，用流動(dòng)溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣20μl，色譜圖見圖3(E).

強(qiáng)光試驗(yàn):取樣品10片，在強(qiáng)光(照射度為4500 ±500LX)下，照射3天，碾碎，精密稱取約相當(dāng)于枸櫞酸坦度螺酮10mg的細(xì)粉適量，置100mL量瓶中，用流動(dòng)溶解稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣20μl，色譜圖見圖3(F).

按照“2.5.1”項(xiàng)下方法試驗(yàn).試驗(yàn)結(jié)果表明，本品對(duì)氧化、酸、堿較為敏感.圖譜顯示，各降解試驗(yàn)產(chǎn)生的雜質(zhì)均能與主成分產(chǎn)生較好分離(分離度大于1.5).說明本研究所建方法專屬性較強(qiáng).

圖3　破壞性試驗(yàn)色譜圖(A)氧化破壞樣品;(B)堿破壞樣品;(C)酸破壞樣品;(D)高濕度破壞樣品;(E)高溫破壞樣品;(F)強(qiáng)光破壞樣品Fig.3 Chromatograms of degradation products (A)sample in H2O2solution(B)sample in alkali solution (C)sample in acid solution(D)sample in high humidity(E)sample after being heated(F)sample after being lighted

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.5.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以雜質(zhì)含量進(jìn)行方法的精密度考察，結(jié)果總雜質(zhì)RSD為0.86%，最大單一雜質(zhì)RSD為1.23%，表明本方法重復(fù)性較好.

2.5.4 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

按照2.5.1項(xiàng)下方法，分別對(duì)三批樣品有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查，檢測(cè)結(jié)果見表1.

表1　3批樣品含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果(n =3)Table 1 Content and related substance of Citrate Tandospirone tablets in 3 batches(n =3)

3　討論

資料研究表明枸櫞酸坦度螺酮片雖然安全性較好，但對(duì)過敏及肝腎功能不全者慎用[14 -15]，所以應(yīng)對(duì)合成過程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制.由穩(wěn)定性試驗(yàn)和破壞性試驗(yàn)可知，在氧化、酸及堿性條件下雜質(zhì)會(huì)增多，根據(jù)枸櫞酸坦度螺酮的生產(chǎn)工藝情況，本研究限定了本產(chǎn)品的最大單一雜質(zhì)及雜質(zhì)總量.對(duì)本品降解產(chǎn)物的研究還需進(jìn)一步研究，以更好控制本品的質(zhì)量.

波長(zhǎng)選擇中用甲醇降枸櫞酸坦度螺酮對(duì)照品溶解制成10μg.ml-1的溶液，進(jìn)行紫外掃描(200～400nm).結(jié)果枸櫞酸坦度螺酮在波長(zhǎng)239nm處有最大吸收值，在該波長(zhǎng)處空白輔料流動(dòng)相溶液不干擾樣品的測(cè)定，所以采用239nm為測(cè)定波長(zhǎng).

中國(guó)藥典2015年版未收載枸櫞酸坦度螺酮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究可以為坦度螺酮的質(zhì)量控制提供參考.

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(責(zé)任編輯：李建忠，付強(qiáng)，張陽，羅敏；英文編輯：周序林，鄭玉才)

Determination of contents and related substance in citrate tandospirone tablets by HPLC

LI Jing，HE Li-li，QIU Li-ying，LI Jia-chuan
(Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，P.R.C.)

Abstract:A HPLC method was employed in this study using a Luna C18column(250×4.6mm，10μm)，and the mobile phase was acetonitrile :0.1 mol·L-1KH2PO4buffer solution(35:65，pH 3.0).The flow rate was 1.0 mL·min-1，the column temperature was 30°C and the UV detection was set at 239 nm.Under this condition，Tandospirone tablets were separated with its related substances thoroughly(R＞1.5).The calibrated linear curve of tandospirone was within 1.0 μg·ml-1to 200.0μg·ml-1(r =0.9991).The precision and reproducibility of the method were good(RSD＜2%).The recovery rates for three concentrations were 100.17%，99.03% and 99.75%(n =3)，respectively.This method is quick，simple and effective，and is suitable for the determination of citrate tandospirone content and related substance in the tablets.

Key words:HPLC;citrate tandospirone;content

中圖分類號(hào)：O657.7；R917

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2095-4271(2016)02-0183-05

doi:10.11920/ xnmdzk.2016.02.010

收稿日期：2016-01-08

作者簡(jiǎn)介：李婧(1985 - )，女，漢族，四川人，實(shí)驗(yàn)師，研究方向:藥品質(zhì)量控制與藥物代謝.E-mail:27918716@ qq.com.