烏頭堿類(lèi)生物堿的含量測(cè)定方法概述

陸燕萍，鞏曉宇，陳秋燕，邱鳳鄒

（1.廣東省深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳　518172；2.廣東醫(yī)學(xué)院，廣東東莞　523808）

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烏頭堿類(lèi)生物堿的含量測(cè)定方法概述

陸燕萍1，鞏曉宇1，陳秋燕2，邱鳳鄒1

（1.廣東省深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳518172；2.廣東醫(yī)學(xué)院，廣東東莞523808）

摘要：總結(jié)概括目前川烏、草烏、附子等烏頭堿類(lèi)藥物的單酯型生物堿、雙酯型生物堿及總生物堿的含量測(cè)定方法，主要有高效液相色譜法、反相高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用方法、雙波長(zhǎng)薄層掃描法、高效毛細(xì)管電泳法和分光光度法。該文根據(jù)不同的流動(dòng)相對(duì)高效液相色譜法和反相高效液相色譜法進(jìn)行分類(lèi)，同時(shí)根據(jù)不同的展開(kāi)劑對(duì)雙波長(zhǎng)薄層色譜法進(jìn)行了分類(lèi)。

關(guān)鍵詞：烏頭堿類(lèi)生物堿；含量測(cè)定；高效液相色譜法；反相高效液相色譜法；液-質(zhì)聯(lián)用方法

烏頭堿類(lèi)藥物的主要成分是生物堿，包括單酯型生物堿、雙酯型生物堿、氨醇型生物堿和其他類(lèi)型化合物。其中雙酯型生物堿既是有效成分，也是毒性較強(qiáng)的物質(zhì)，但經(jīng)轉(zhuǎn)化成單酯型生物堿后毒性大大降低，療效仍然存在。2010年版《中國(guó)藥典（一部）》規(guī)定總雙酯型生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)≤0.04%，總單酯型生物質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.02%～0.07%［1］。因此，準(zhǔn)確快速地測(cè)量生物堿的含量非常重要，筆者概述了目前可以用于測(cè)定這些生物堿含量的方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　高效液相色譜（HPLC）法

HPLC法具有對(duì)設(shè)備要求較低，樣品較容易處理，所得樣品中的雜質(zhì)含量較少，檢測(cè)的精密度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)。其中，紫外光（UV）檢測(cè)器是HPLC法中最常用的檢測(cè)器，分離測(cè)定烏頭堿類(lèi)生物堿的條件見(jiàn)表1。HPLC法測(cè)定烏頭類(lèi)藥物中生物堿的含量，方法學(xué)考察顯示其具有線(xiàn)性關(guān)系、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和加樣回收率良好等優(yōu)點(diǎn)，專(zhuān)屬性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確，能夠?qū)躅^類(lèi)藥物進(jìn)行有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制。

表1　HPLC法UV檢測(cè)器測(cè)定烏頭及其制劑總堿含量的條件

2　反相高效液相色譜（RP-HPLC）法

色譜條件見(jiàn)表2。

表2　RP-HPLC法UV檢測(cè)器測(cè)定烏頭及其制劑總堿含量的條件

3　液-質(zhì)聯(lián)用方法

馬芳等［14］建立了同時(shí)檢測(cè)附子水提液中新烏頭堿、次烏頭堿含量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法，Agilent Zorbax SB C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A為水（0.05%FA），B為乙腈，采用梯度洗脫［A-B（72∶28），0～2 min時(shí)28%～34%B，2～6 min 時(shí)34%～35%B，6～10 min時(shí)35%～100%B］，流速0.35 mL/min；柱溫40℃；正離子模式，MRM，新烏頭堿m/z632.3～572.3，次烏頭堿m/z 616.3～556.2。

另外，李錚等［15］建立了測(cè)定烏頭飲片中生物堿含量的液-質(zhì)聯(lián)用方法，并測(cè)得了25批烏頭不同飲片中烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿的含量。色譜柱采用Inertsil ODS-3色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相［16-18］為乙腈-醋酸銨緩沖液（2.5%冰醋酸，用濃氨水調(diào)節(jié)pH至10.5左右，60∶40），流速0.2 mL/min，柱溫30℃；質(zhì)譜采用電噴霧電離離子源，源電壓4.5 kV，毛細(xì)管溫度為270℃，毛細(xì)管電壓20 V，鞘氣流速50 arb，正離子檢測(cè)，質(zhì)量分析器為四級(jí)桿，采用選擇離子模式檢測(cè)。該法具有靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，適用于微量生物堿的檢測(cè)。

4　雙波長(zhǎng)薄層掃描法

檢測(cè)條件見(jiàn)表3。

表3　各樣品的薄層條件與掃描條件

5　高效毛細(xì)管電泳法

于燕莉等［22］采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定痹痛寧貼劑中東莨菪堿、烏頭堿的含量。電泳介質(zhì)為50 mmol/L pH=6.0的磷酸鹽緩沖液（含20%無(wú)水乙醇），分離通道為未涂層石英毛細(xì)管（50 μm×32 cm，有效長(zhǎng)度23.5 cm），壓力進(jìn)樣（2 kPa×5 s），分離電壓8 kV，檢測(cè)波長(zhǎng)200 nm，操作溫度30℃。結(jié)果東莨菪堿加樣回收率為98.4%，烏頭堿為96.6%，RSD分別為1.61%和1.17%（n=5）。

6　分光光度法

鄭來(lái)麗等［23］依據(jù)烏頭類(lèi)總生物堿與溴甲酚綠在pH=3.5的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液中反應(yīng)生成離子對(duì)化合物的光譜特征，利用分光光度法于412.5 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算含量。結(jié)果表明，烏頭堿質(zhì)量濃度在10.12～22.77 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線(xiàn)性關(guān)系良好（r=0.999 6，n=6），平均加樣回收率為99.27%。

7　小結(jié)

烏頭類(lèi)生物堿尤其是雙酯型生物堿毒性較大，而且其毒性用量范圍與有效治療用量范圍很接近，因此準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)到這些生物堿的含量具有重要的臨床意義。HPLC法因具有柱效高、分離好、穩(wěn)定方便，能同時(shí)測(cè)定幾種烏頭堿的含量等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛研究和利用；RP-HPLC法則操作簡(jiǎn)便、可行，結(jié)果穩(wěn)定；液-質(zhì)聯(lián)用方法具有靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，適用于微量生物堿的檢測(cè)；雙波長(zhǎng)薄層掃描法方法精密度高，回收率、重現(xiàn)性好，斑點(diǎn)清楚圓整，比較適合新烏頭堿的含量測(cè)定，但最近幾年應(yīng)用較少；高效毛細(xì)管電泳法則具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高，重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)；分光光度法用于測(cè)定烏頭類(lèi)總生物堿的含量準(zhǔn)確可靠、簡(jiǎn)便易行、專(zhuān)屬性強(qiáng)。

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Determination Method of Aconitum Alkaloids

Lu Yanping1，Gong Xiaoyu1，Chen Qiuyan2，Qiu Fengzou1
（1.People′s Hospital of Longgang District，Shenzhen，Guangdong，China 518172；2.Guangdong Medical College，Dongguan，Guangdong，China 523808）

Abstract：The content determination methods of single ester alkaloids，diester alkaloids and total alkaloid in radix aconiti，kusnezoff monkshood，aconite and other aconitine drugs are described in this article including HPLC，RP-HPLC，LC-MS，TLCS，High Performance Capillary Zone Electrop-horesis and Spectrophotometry.Based on different mobile phase，HPLC and RP-HPLC is classified.At the same time，the classification of TLCS is carried out studied according to different deployment agents.

Key words：aconitum alkaloids；assay；HPLC；RP-HPLC；LC-MS

中圖分類(lèi)號(hào)：R282.41；R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-4931（2016）07-0001-03

作者簡(jiǎn)介：陸燕萍，女，主任中藥師，主要研究方向?yàn)橹兴庤b定與中藥炮制，（電話(huà)）0755-28932833-8131（電子信箱）luyanp317@163.com。

收稿日期：（2015-10-14）