• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    貴州阿哈湖沉積物中硫酸鹽還原菌的時(shí)空分布特征

    2016-05-21 02:45:32
    貴州科學(xué) 2016年1期
    關(guān)鍵詞:時(shí)空分布

    張 偉

    (1貴州師范學(xué)院 地理與旅游學(xué)院,貴州 貴陽 550018;2中國科學(xué)院 地球化學(xué)研究所 環(huán)境地球化學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550081)

    ?

    貴州阿哈湖沉積物中硫酸鹽還原菌的時(shí)空分布特征

    張偉1,2

    (1貴州師范學(xué)院地理與旅游學(xué)院,貴州貴陽550018;2中國科學(xué)院地球化學(xué)研究所環(huán)境地球化學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州貴陽550081)

    摘要:利用PCR擴(kuò)增和熒光原位雜交方法對(duì)貴州阿哈湖沉積物中硫酸鹽還原菌(Sulfate-reducing bacteria,SRB)類群和數(shù)量的時(shí)空分布特征進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,秋季沉積物中檢測(cè)出四個(gè)SRB類群(脫硫腸菌屬、脫硫葉菌屬、脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬和脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬),而春季沉積物中只檢測(cè)出三個(gè)類群(脫硫腸菌屬、脫硫葉菌屬和脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬)。相比秋季,春季沉積環(huán)境溶解氧含量較高,且溫度較低,這可能導(dǎo)致脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬在春季沉積物中處于不可育狀態(tài),由于其活性低而無法檢測(cè)。秋季沉積物檢測(cè)出來的SRB類群相比春季沉積物具有更大的分布范圍,同時(shí),秋季沉積物SRB數(shù)量總體上高于春季沉積物,上述結(jié)果指示秋季沉積物環(huán)境條件更適于SRB群落。

    關(guān)鍵詞:硫酸鹽還原菌;時(shí)空分布;PCR擴(kuò)增;熒光原位雜交;阿哈湖

    0引言

    湖泊是人類生活和工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)所需淡水的重要來源,其水環(huán)境質(zhì)量是影響人類生命健康的重要因素。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,礦山開發(fā)、工農(nóng)業(yè)和生活廢污水排放等各種人為活動(dòng)對(duì)湖泊環(huán)境的影響日益突出。阿哈湖是位于貴陽市西南郊約8 km的一個(gè)底層滯水季節(jié)性缺氧的人工水庫。匯水區(qū)域內(nèi)分布有大小煤礦200余個(gè),大量酸性礦坑廢水長(zhǎng)期入湖,下游又接納生活污水,導(dǎo)致阿哈湖呈現(xiàn)重金屬、營養(yǎng)鹽和硫酸鹽復(fù)合型污染的水體環(huán)境[1]。巖溶地區(qū)湖泊具有強(qiáng)烈的酸緩沖能力,僅在煤礦廢水污染下,微量金屬元素易與還原態(tài)硫化物結(jié)合而固定在沉積物中,但在持續(xù)有機(jī)污染輸入的情況下,則可能改變沉積物的氧化還原環(huán)境,容易使一些有害金屬活化,重新遷移并造成嚴(yán)重的“二次污染”問題,嚴(yán)重威脅到湖泊/水庫的水質(zhì)安全[2]。

    硫酸鹽還原菌(Sulfate-reducing bacteria,SRB)是一大類厭氧菌,不同的SRB類群具有不同的生理生化和系統(tǒng)發(fā)育特征[3]。由于這些生理生化和系統(tǒng)發(fā)育的多樣性,SRB棲息于不同的環(huán)境介質(zhì),其驅(qū)動(dòng)的硫酸鹽異化還原反應(yīng)是湖泊環(huán)境中SO42-的主要清除機(jī)制,主要發(fā)生在水—沉積物界面及以下深度的沉積物厭氧環(huán)境[4],對(duì)湖泊環(huán)境碳和硫的循環(huán)起著重要作用[5]。另外,硫酸鹽還原反應(yīng)生成的硫化物可以和溶解態(tài)金屬離子結(jié)合形成不溶性金屬沉淀,所以SRB在污染水體和沉積環(huán)境的生物修復(fù)方面也發(fā)揮重要作用[6-11]。然而,SRB分布受環(huán)境因子如SO42-濃度、有機(jī)質(zhì)含量、溫度、溶解氧水平以及局部小生境微生物群落組成的影響[10-12],因此,要探究硫酸鹽還原過程與湖泊水質(zhì)變化之間的內(nèi)在聯(lián)系,有必要分析SRB的時(shí)空分布情況。本研究主要利用PCR擴(kuò)增和熒光原位雜交技術(shù)(Florescence In Situ Hybridization,F(xiàn)ISH)分析了阿哈湖沉積物中SRB的類群和數(shù)量的時(shí)空分布特征。

    1材料與方法

    1.1研究區(qū)和樣品采集

    阿哈湖位于貴州省貴陽市西南郊,于1958年建壩,1960年蓄水,海拔1 108 m,流域匯水面積約190 km2,湖水面積約3.4 km2,平均水深為13 m,最大水深接近25 m,水輸送通量為1.04×108m3,湖水寄宿時(shí)間為0.44 a[1]。匯水區(qū)域分布有二疊系灰?guī)r及煤系地層,其上覆蓋有硅鋁質(zhì)和硅鐵質(zhì)黃壤,部分地區(qū)有三疊系碳酸鹽類巖石及泥頁巖出露,并發(fā)育有黑色、黃褐色石灰土[13]。湖泊周圍為疏林植被,灌草叢較多,流域年均降水量1 109 mm,年均氣溫15.3 ℃。

    本次研究選擇阿哈湖大壩處(26°32′24.03″N,106°3851.94″E)沉積物為研究對(duì)象,是由于該處為各處水流交匯區(qū)域,具有煤礦廢水與生活污水復(fù)合污染的綜合特征。采用便攜式不擾動(dòng)湖泊沉積物采樣器[14],于2013年5月和10月在阿哈湖大壩附近位置采集春季和秋季沉積物樣品(表1)。采集的沉積物柱有清晰的沉積物—水界面,沉積物未被擾動(dòng)。沉積物柱上部0.5 cm呈現(xiàn)棕黃色粗顆粒狀,代表水體的懸浮層,指示水體顆粒物的懸浮沉積過程,0.5 cm以下有約1.0 cm厚淺灰色的含不規(guī)則礦物結(jié)核的亞擴(kuò)散層,再往下至約11 cm深度是黑色沉積物摻雜一些棕褐色的斑點(diǎn),12~21 cm為灰黃色沉積物,21 cm以下深度以黑色沉積物為主。沉積物柱在5~15 cm深度范圍有氣泡出現(xiàn),反映了湖泊沉積環(huán)境早期成巖過程中的有機(jī)質(zhì)分解。沉積物柱芯現(xiàn)場(chǎng)在自制氮?dú)馐痔紫?持續(xù)通N2)中按1 cm間隔取樣,沉積物—水界面的水樣品也同步收集。

    表1 阿哈湖采集的沉積物樣品的描述

    1.2環(huán)境參數(shù)分析

    沉積物—水界面的水樣品的溫度、pH值和溶解氧含量用便攜式水質(zhì)參數(shù)儀(WTW,pH3210/Cond 3210,德國)現(xiàn)場(chǎng)分析。

    1.3SRB類群的PCR擴(kuò)增

    1.3.1參考菌株

    利用分子生物學(xué)方法對(duì)SRB 16SrDNA特異性序列進(jìn)行分析,可將SRB分為六大類群[15]:脫硫腸菌屬(類群1)(Desulfotomaculum,DFM)、脫硫葉菌屬(類群2)(Desulfobulbus,DBB)、脫硫桿菌屬(類群3)(Desulfobacterium,DBM)、脫硫細(xì)菌屬(類群4)(Desulfobacter,DSB)、脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬(類群5)(Desulfococcus-Desulfonema-Desulfosarcina,DCC-DNM -DSS)和脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬(類群6)(Desulfovibrio-Desulfomicrobium,DSV-DMB)。本研究中將以下菌株作為六大SRB類群的陽性控制菌株,分別為:DesulfotomaculumnigrificansNCIMB 8395(類群1);DesulfobulbuspropionicusDSM 2032(類群2);DesulfobacteriumautotrophicumDSM 3382(類群3);DesulfobactercurvatusDSM 3379(類群4);DesulfovibriodesulfuricansDSM 642(類群5);DesulfosarcinavariabilisDSM 2060(類群6)。大腸桿菌EcoliATCC 8099作為陰性控制菌株[12]。

    1.3.2DNA提取與純化

    取0.1 g沉積物樣品溶解在500 μL 滅菌去離子水,于1.5 mL離心管中12 000 rpm離心10 min,棄上清,加入1 000 L STE (0.1 M NaCl,10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA)。隨后沉積物DNA用Fast DNA SPIN kit (Bio101)試劑盒提取和純化,用同樣的方法提取參考菌株的DNA。提取出來的DNA樣本進(jìn)行含量和純度分析。將DNA標(biāo)本用TE稀釋100倍,以TE緩沖液作為空白調(diào)零,利用紫外—可見分光光度儀測(cè)定樣本的OD260和OD280。根據(jù)1 OD260相當(dāng)于50 ng/μL DNA計(jì)算出各個(gè)樣品DNA含量,并將其稀釋至50 ng/μL。同時(shí)計(jì)算出OD260/OD280,比值介入1.8-2.0為合格。

    1.3.3PCR擴(kuò)增

    DNA純化后,用針對(duì)六大SRB類群特異性16S rDNA 序列設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增[15]。采用PCR熱啟動(dòng)程序,共包含30個(gè)循環(huán)(表2)。每個(gè)PCR管(50 μL)包含5 μL 10 × PCR 緩沖液,5 μL MgCl2(25 mM),上下游引物各2 μL(10 pmol/μL),4 μL dNTP (2.5 mM),2 μL Taq 聚合酶 (1 U/μL),4 μL DNA 模板(50 ng/μL)和 26 μL 滅菌去離子水。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5 %(w / v)瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像儀中分析并拍照。通過與DNA 標(biāo)志物比對(duì),以待測(cè)樣品和陽性對(duì)照有特異性目的條帶出現(xiàn),而陰性對(duì)照無特異性目的條帶出現(xiàn),判斷為待測(cè)樣品中有該類群SRB存在。

    表2 六大SRB類群的PCR循環(huán)條件

    1.4熒光原位雜交技術(shù)分析SRB數(shù)量

    1.4.1寡核苷酸探針

    檢測(cè)SRB的通用探針為SRB385(序列為:5’ CGG CGT CGC TGC GTC AGG 3’)[16],陰性對(duì)照探針為NON338(序列為:5’ ACT CCT ACG GGA GGC AGC 3’)[17],同一樣品雜交細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果由SRB385探針計(jì)數(shù)的信號(hào)減去NON338探針計(jì)數(shù)的信號(hào)為最終結(jié)果。上述探針由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成,采用5’端Cy3標(biāo)記。

    1.4.2參考菌株

    陽性控制菌株為DesulfobulbuspropionicusDSM 2032,陰性控制菌株為EColiATCC 8099。

    1.4.3樣品預(yù)處理與固定

    取0.1 g新鮮沉積物樣品加入適量PBS(0.13 M NaCl,7 mM Na2HPO4,3 mM NaH2PO4,pH 7.2)中,漩渦震蕩混勻,10 000 rpm離心10 min,棄上清,重復(fù)3次;隨后加入適量PBS(pH7.2)稀釋。樣品混勻后,取0.1 g均勻涂布于多聚賴氨酸包被的玻片上,空氣干燥30 min;在4 %多聚甲醛磷酸鹽緩沖液中室溫固定20 min,PBS(pH7.2)洗滌5 min,Milli-Q超純水洗滌5 min,空氣干燥;濕盒中用2 mg/ml溶菌酶32 ℃處理10 min,PBS(pH7.2)洗滌5 min,Milli-Q超純水洗滌5 min,空氣干燥;分別用50 %、80 %和96 %乙醇固定3 min,空氣干燥。

    1.4.4熒光原位雜交反應(yīng)與鏡檢

    取27 μL 熒光原位雜交緩沖液(0.9 M NaCl,20 mM Tris-HCl,5 mM EDTA,0.01 % SDS,25 %甲酰胺,pH 7.2)和3 μL探針(25 ng /μL)混勻,并點(diǎn)到樣品上,濕盒中46 ℃雜交2 h;洗滌緩沖液(54 mM NaCl,20 mM Tris-HCl,0.01 % SDS,5 mM EDTA,pH 7.2)50 ℃洗滌30 min,Milli-Q超純水中漂洗,空氣干燥,封片。用Nikon Eclipse 80i 落射熒光顯微鏡進(jìn)行SRB鏡檢,計(jì)數(shù)發(fā)紅色熒光的菌體為SRB。采用Nikon NIS Elements AR熒光成像分析軟件進(jìn)行拍照和計(jì)數(shù)。

    1.4.5自發(fā)熒光

    沉積物中有大量的自發(fā)熒光物質(zhì),波長(zhǎng)主要在520~580 nm,自發(fā)熒光物質(zhì)可能是纖維性或顆粒狀物,在光鏡下無原核生物的菌體形態(tài)[18]。觀察時(shí)如果懷疑為自發(fā)熒光物質(zhì),可以根據(jù)熒光的顏色和普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)一步觀察發(fā)光物的形態(tài)來進(jìn)行鑒別,以減少特異性熒光檢測(cè)的干擾。

    2結(jié)果與討論

    2.1SRB類群的時(shí)空分布

    從沉積物樣品中擴(kuò)增出四個(gè)SRB類群(圖1和表3),即脫硫腸菌屬、脫硫葉菌屬、脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬和脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬。脫硫桿菌屬和脫硫細(xì)菌屬?zèng)]有檢出。不同的SRB類群有不同的時(shí)空分布。脫硫腸菌屬主要分布在沉積物中部,脫硫葉菌屬主要分布在上層和中層沉積物中,脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬在春季沉積物樣品中主要分布在上層,在秋季沉積物樣品中主要分布在上層和下層。脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬在秋季沉積物樣品中分布廣泛。

    表3 SRB類群在阿哈湖春季和秋季

    注:DFM代表脫硫腸菌屬;DBB代表脫硫葉菌屬;DBM代表脫硫桿菌屬;DSB代表脫硫細(xì)菌屬;DCC-DNM-DSS代表脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬;DSV-DMB代表脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬。

    圖1阿哈湖秋季沉積物樣品中脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬的PCR擴(kuò)增代表圖(目的條帶為610 bp,M為DNA標(biāo)志物,0-13代表沉積物深度(cm),N代表陰性控制,P代表陽性控制)Fig.1Representative PCR amplifications of Desulfovibrio-Desulfomicrobium in Autumn sediment of Lake Aha (Targed band:610 bp,M:DNA Ladder;Lanes 0-13 correspond to sediment depths;N,negative control;P,positive control)

    阿哈湖沉積物中檢測(cè)的SRB類群不同與具有相似地質(zhì)和氣候特征的貴州紅楓湖沉積物中SRB類群的檢測(cè)結(jié)果[19]。紅楓湖沉積物中檢測(cè)出脫硫桿菌屬、脫硫細(xì)菌屬、脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬和脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬。阿哈湖沉積物中SRB類群主要分布在230 mm以上深度,而紅楓湖沉積物中SRB類群主要分布在70 mm以上深度,指示阿哈湖沉積物中SRB具有更大的活性。阿哈湖和紅楓湖沉積物中SRB不同的類群分布可能與兩個(gè)湖泊不同的環(huán)境條件有關(guān)(如阿哈湖酸礦廢水的輸入)。

    從季節(jié)對(duì)比來看,春季沉積物中SRB類群主要分布在230 mm以上,秋季沉積物中SRB類群主要分布在250 mm以上。每一個(gè)檢測(cè)出來的SRB類群都主要分布在沉積物柱芯的上層,同時(shí),不同的SRB類群具有不同的時(shí)間和深度分布特征。一些SRB類群在一定的季節(jié)和深度范圍內(nèi)占優(yōu)勢(shì),如脫硫腸菌屬和脫硫葉菌屬在春秋季沉積物中分布在上層和下層沉積物中,脫硫球菌屬—脫硫線菌屬—脫硫八疊菌屬春季時(shí)分布在上層沉積物中,在秋季時(shí)分布在上層和下層沉積物中。脫硫弧菌屬-脫硫微菌屬在秋季沉積物中具有廣泛的分布范圍??傮w來看,每個(gè)SRB類群在秋季的分布范圍要大于在春季的分布范圍,這指示秋季沉積物的環(huán)境條件更適于SRB類群的存活。

    研究表明,自然生境中少于1 %的總的原核生物數(shù)量能夠獲得純培養(yǎng),一個(gè)重要的原因是自然生境中很多微生物可以隨著環(huán)境條件的變化而處于不可育狀態(tài)[20],處于該狀態(tài)的微生物通常無繁殖活性,DNA含量非常低,類似醫(yī)學(xué)微生物的“可見不可育狀態(tài)”,其機(jī)理還不清楚。據(jù)此分析,洱海秋季沉積物樣品中檢測(cè)到了脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬,而春季沉積物樣品中沒有檢出這個(gè)類群,指示脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬在春季的沉積環(huán)境中可能處于不可育狀態(tài),活性低以致無法檢測(cè)出來。許多研究表明多數(shù)SRB是嚴(yán)格厭氧和嗜溫的,包括脫硫弧菌屬菌株[12]。從表4可以看出,相比秋季,春季沉積物—水界面溶解氧含量高而溫度低,這可能導(dǎo)致脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬在春季沉積環(huán)境中為不可育狀態(tài)而無法檢測(cè)[12]。

    表4 阿哈湖沉積物—水界面水溫度、pH值和溶解氧含量

    2.2熒光原位雜交檢測(cè)的 SRB數(shù)量

    熒光原位雜交(Florescence In Situ Hybridization,F(xiàn)ISH)是一種免培養(yǎng)的檢測(cè)具有特定環(huán)境功能細(xì)菌的技術(shù),被廣泛用于分析自然生境中的SRB數(shù)量[21-22]。本研究沉積物樣品中與SRB385探針雜交的細(xì)胞可見明顯的熒光信號(hào),指示樣品中豐富的rRNA含量。陽性控制菌株可見明顯的熒光信號(hào),而陰性控制菌株與SRB385探針不發(fā)生反應(yīng)而沒有熒光信號(hào)(圖2)。

    (a.陽性控制菌株;b.陰性控制菌株; c.沉積物樣品)

    在春季采集的沉積物樣品中,SRB主要分布在0~240 mm,250~280 mm接近不可檢測(cè)(圖3)。SRB數(shù)量從不可檢測(cè)到34.39×104cells/g濕沉積物范圍之內(nèi)變化,最高值出現(xiàn)在80 mm深度。在秋季采集的沉積物樣品中,SRB主要分布在0~250 mm,260~290 mm未檢測(cè)到SRB。SRB數(shù)量從不可檢測(cè)到26.23×104cells/g濕沉積物范圍之內(nèi)變化,最高值出現(xiàn)在90 mm深度。綜合來看,SRB數(shù)量從沉積物表層向下逐漸增加,在80 mm深度(春季)和90 mm深度(秋季)達(dá)到最大值,之后隨沉積深度加深SRB數(shù)量逐漸減小。表層沉積物SRB數(shù)量低可能與表層沉積物存在較低濃度的溶解氧,這不利于厭氧的SRB生存有關(guān),深層沉積物SRB數(shù)量的減小可能與較低的有機(jī)碳和SO42-含量有關(guān)[10-12]。在沉積物柱芯50~150 mm深度范圍觀測(cè)到氣泡出現(xiàn),這指示有機(jī)質(zhì)分解主要發(fā)生在150 mm以上的深度范圍。

    圖3 阿哈湖沉積物中SRB數(shù)量的時(shí)空分布

    總體來看,阿哈湖秋季沉積物中SRB類群與數(shù)量高于春季沉積物中SRB類群和數(shù)量,這可能與湖泊沉積物—水界面環(huán)境參數(shù)(如溫度、溶解氧)的季節(jié)性差異有關(guān)[23-24]。如表4所示,相比春季,秋季沉積物—水界面一些環(huán)境參數(shù)(較高的溫度和較低的溶解氧含量)更適于SRB生長(zhǎng)和繁育。另外,SRB數(shù)量的最大峰值出現(xiàn)在不同深度,并且,春季沉積物80 mm深度的SRB數(shù)量高于秋季沉積物90 mm深度的SRB數(shù)量,這指示影響沉積物中SRB群落變化的因素是復(fù)雜的。

    3結(jié)論

    利用PCR擴(kuò)增和FISH技術(shù)對(duì)阿哈湖沉積物中SRB類群和數(shù)量的分析顯示,SRB類群和數(shù)量分布具有明顯的季節(jié)和垂直深度的變化,這種時(shí)空分布的差異可能與一些環(huán)境因子(如SO42-含量、有機(jī)碳源類型及其可利用性、溶解氧水平、溫度等)的季節(jié)和深度變化有關(guān)??傮w來看,阿哈湖秋季沉積物SRB類群和數(shù)量均多于春季沉積物樣品,指示秋季沉積環(huán)境更適于SRB存活。另外,春季沉積環(huán)境溶解氧含量較高,且溫度較低,這可能導(dǎo)致脫硫弧菌屬—脫硫微菌屬在春季沉積物中處于不可育狀態(tài),由于其活性低而無法檢測(cè)。

    參考文獻(xiàn)【REFERENCES】

    [1]汪福順.季節(jié)性厭氧湖泊微量金屬元素的界面地球化學(xué)行為[D].貴陽:中國科學(xué)院地球化學(xué)研究所博士學(xué)位論文,2003:1-147.

    WANG F S.The geochemical activities of trace metal elements in the interface of seasonal anaerobic lakes[D].Guiyang,A Disssertation Submitted toThe University of Chinese Academy of SciencesFor the degree ofDoctor of Natural Science,2003:1-147.

    [2]汪福順,劉叢強(qiáng),梁小兵,等.貴州阿哈湖沉積物—水界面微生物活動(dòng)及其對(duì)微量元素再遷移富集的影響[J].科學(xué)通報(bào),2003,48(19):2073-2078.

    WANG F S,LIU C Q,LIANG X B,et al.Remobilization of trace metals induced by microbiological activities near sediment-water interface,Aha Lake,Guiyang[J].Chinese Science Bulletin,2003,48(19):2073-2078.

    [3]Mubmann M,Ishii K,Rabus R,et al.Diversity and vertic-al distribution of cultured and uncultured Deltaporteobacteria in an intertidal mud flat of the waddn sea[J].Environmental Microbiology,2005,7(3):405-418.

    [4]吳豐昌,萬國江,黃榮貴,等.湖泊水體中硫酸鹽增高的環(huán)境效應(yīng)研究[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),1998,18(1):28-33.

    WU F C,WAN G J,HUANG R G,et al.Study on the environmental effects for the increase of sulfate concentrations in lakes[J].Acta Scientiae Circumstantiae,1998,18(1):28-33.

    [5]HAO O J,CHEN J M,HUANG L,et al.Sulfate-reducing bacteria [J].Critical Reviews in Environmental Sciences and Technology,1996,26:155-187.[6]Franzmann P D,Robertson W J,Zappla L R,et al.Theroleof microbialpopulationsinthecontainment of aromatichydr-ocarbons in the subsurface[J].Biodegradation,2002(13):65-78.

    [7]Kleikemper J,Pelz O,Schroth M H,et al.Sulfate reducing bacterial community response to carbon source amend ments in contaminated aquifer microcosms[J].FEMS Microbiology Ecology,2002(42)109-118.

    [8]Janssen G M,Temminghoff E J.In situ metal precipitation in a zinc-contaminated,aerobic sandy aquifer by means of biological sulfate reduction[J].Environmental Science and Technolo-gy,2004(38)4002-4011.

    [9]Devereux R,Hines M E,Stahl D A S. cycling:Characterization of naturalcommunities of sulfate-reducing Bacteria by 16S rRNA sequence comparisons[J].Microbial Ecology,1996(32)283-292.[10]Castro H F,Wiliams N H,Ogram A.Phylogeny of sulfate-reducing bacteria[J].FEMS Microbiology Ecology,2000(31)1-9.

    [11]Garcia C,Moreno D A,Ballester A,et al.Bioremediation of an industrial acid mine water by metal-tolerant sulfate-reducing bacteria[J].Minerals Engineering,2001(14)997-1008.

    [12]ZHANG W,WANG Z L,WANG M Y.Analyses of the vertical and temporal distributions of sulfate-reducing bacteria in Lake Erhai,Southwest China[J].Research Journal of Chemistry and Environment,2012,16(3):44-51.

    [13]宋柳霆,王中良,滕彥國,等.貴州阿哈湖物質(zhì)循環(huán)過程的微量元素地球化學(xué)初步研究[J].地球與環(huán)境,2012,40(1):9-17.

    SONG L T,WANG Z L,TENG Y G,et al.A primary geochemical study on trace metals during biogeochemical cycling in Aha lake,Giuzhou,China[J].Earth and Environment,2012,40(1):9-17.

    [14]王雨春,黃榮貴,萬國江.SWB-1型便攜式湖泊沉積物-界面水取樣器的研制[J].地球與環(huán)境,1998(1)94-96.

    WANG Y C,HUANG R G,WAN G J.Development of Portable SWB-1 interface water sampler in lake sediments[J].Earth and Environment,1998(1)94-96.

    [15]Daly K,Sharp R J and Mccarthy A J.Development of oligonucleotide probes and PCRprimers fordetecting phylogenetic subgroups of sulfate-reducing bacteria[J].Microbiology,2000:146,1693-1705.

    [16]Amann R I,Ludwig W,Schleifer K H.Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation[J].Microbiological Reviews,1995(59)143-169.

    [17]Christensen H,Hansen M,Sφrensen J.Counting and size classification of active soil bacteria by fluorescence in situ hybridization with an rRNA oligonucleotide probe[J].Applied and Environmental Microbiology,1999(65)1753-1761.

    [18]Widdel F.Microbiology and ecology of sulfate- and sulfur-reducing bacteria[A].In Biology of Anaerobic Microorganisms[M].New York:John Wiley & Sons.1988:469-585.

    [19]梁小兵,朱建明,劉叢強(qiáng),等.貴州紅楓湖沉積物有機(jī)質(zhì)的酶及微生物降解[J].第四紀(jì)研究,2003,23(5):565-572.

    LIANG X B,ZHU J M,LIU C Q,et al.Enzymatic and microbial degradation of organic matter in lake hongfeng of Guizhou Province[J].Quaternary Sciences,2003,23(5):565-572.

    [20]Zweifel U L,Hagstr?m ?.Total Counts of Marine Bacteria Include a Large Fraction of Non-Nucleoid-Containing Bacteria(Ghosts) [J].Applied Environmental Microbiology,1995(61)2180-2185.

    [21]Christensen H,Hansen M,SΦrensen J.Counting and size classification of active soil bacteria by fluorescence in situ hybridization with an rRNA oligonucleotide probe[J].Applied and Environmental Microbiology,1999(65)1753-1761.

    [22]Purdy K J,Nedwell D B,Embley T M,et al.Use of 16S rRNA-targeted loigonucleotide probes to investigate the distribu-tion of sulphate-reducing bacteria in estuarine sediments[J].FEMS Microbiology Ecology,2001(36)165-168.

    [23]Pimenov N V,Rusanov I I,Karnachuk O V,et al.Microbial processes of the carbon and sulfur cycles in Lake Shira(Khakasia) [J].Microbiology,2003(72)221-229.

    [24]Bak F,Pfennig N.Sulfate-reducing bacteria in littoral sediment of Lake Constance[J].FEMS Microbiology Ecology,1991(85)43-52.

    The vertical and temporal distributions of sulfate-reducing bacteria in sediments of Lake Aha

    ZHANG Wei1,2

    (1SchoolofGeographyandTourism,GuizhouNormalCollege,Guiyang550018,China;2StateKeyLaboratoryofEnvironmentalGeochemistry,InstituteofGeochemistry,ChineseAcademyofSciences,Guiyang550002,China)

    Abstract:The distribution of sulfate-reducing bacteria (SRB) in the sediments of Lake Aha was analyzed based on evaluation of the presence and quantity of six main groups of SRB in sediments collected during spring and autumn.The results show that four SRB groups (Desulfotomaculum,Desulfobulbus,Desulfococcus-Desulfonema-Desulfosarcina and Desulfovibrio- Desulfomicrobium) are present in autumn,while only three groups (Desulfotomaculum,Desulfobulbus and Desulfococcus- Desulfonema-Desulfosarcina) are detected in spring.Compared with the autumn of Lake Aha,sediments in spring have relatively high dissolved oxygen contents and low temperature,which may lead to the inactive status of Desulfovibrio-Desulfomicrobium in the sediments and then the Desulfovibrio-Desulfomicrobium is undetectable due to its low activity.The distribution of each SRB group is wider in sediments collected in autumn than in spring,and they show a greater overall presence and quantity in autumn than in spring.These findings indicate that the environmental conditions in autumn are more suitable for SRBs.

    Keywords:sulfate-reducing bacteria;vertical and temporal distribution;PCR;FISH;lake Aha

    作者簡(jiǎn)介:張偉(1980-),男,博士,副教授。主要研究方向:為環(huán)境與生物地球化學(xué),已發(fā)表中英文論文20余篇。

    *基金項(xiàng)目:貴州省自然科學(xué)基金(黔科合J字[2014]2135),中國博士后基金面上項(xiàng)目(2015M572503)和貴州師范學(xué)院博士基金項(xiàng)目(13BS023)聯(lián)合資助。

    收稿日期:2015-11-30;修回日期:2015-12-02

    中圖分類號(hào):Q 178;P 272

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1003-6563(2016)01-0057-07

    猜你喜歡
    時(shí)空分布
    酒泉市強(qiáng)對(duì)流天氣指標(biāo)研究
    海岸帶森林生態(tài)系統(tǒng)中土壤酶活性研究進(jìn)展
    遼寧省盛夏降水時(shí)空分布特征及影響因子分析
    基于云模型的淮北平原參考作物蒸散量時(shí)空分布
    基于云模型的淮北平原參考作物蒸散量時(shí)空分布
    長(zhǎng)江中下游地區(qū)近32年水稻高溫?zé)岷Ψ植家?guī)律
    長(zhǎng)江中下游地區(qū)近32年水稻高溫?zé)岷Ψ植家?guī)律
    成都市人口時(shí)空分布特征分析
    商(2016年22期)2016-07-08 13:43:28
    我國世界文化遺產(chǎn)的時(shí)空分布
    馬來西亞與新加坡旅華客源時(shí)空分布對(duì)比研究
    91精品三级在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 一进一出好大好爽视频| 久久久久国内视频| 午夜久久久在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 在线观看免费视频日本深夜| 精品一品国产午夜福利视频| 满18在线观看网站| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲午夜理论影院| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产亚洲精品第一综合不卡| 大型黄色视频在线免费观看| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 18美女黄网站色大片免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 91九色精品人成在线观看| 日韩免费av在线播放| 国产91精品成人一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| ponron亚洲| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| av超薄肉色丝袜交足视频| 大码成人一级视频| 国产精品免费视频内射| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 波多野结衣一区麻豆| 精品久久久久久成人av| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 在线永久观看黄色视频| 久久久久国内视频| 成人亚洲精品av一区二区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 美女免费视频网站| cao死你这个sao货| 正在播放国产对白刺激| 999精品在线视频| 深夜精品福利| 色哟哟哟哟哟哟| 久热这里只有精品99| av视频在线观看入口| www国产在线视频色| 一本大道久久a久久精品| 涩涩av久久男人的天堂| 日韩av在线大香蕉| 国产高清videossex| 精品福利观看| 免费在线观看完整版高清| 亚洲五月婷婷丁香| 久久 成人 亚洲| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久香蕉国产精品| 日韩大码丰满熟妇| 黄色片一级片一级黄色片| 大码成人一级视频| 成人永久免费在线观看视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 搡老岳熟女国产| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人人妻人人澡人人看| 91精品国产国语对白视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久9热在线精品视频| 午夜福利成人在线免费观看| 丝袜美足系列| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩欧美三级三区| 女警被强在线播放| 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 久久热在线av| 神马国产精品三级电影在线观看 | 99热只有精品国产| 可以在线观看的亚洲视频| 国产1区2区3区精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩视频一区二区在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 中文字幕人妻丝袜一区二区| x7x7x7水蜜桃| 9热在线视频观看99| 久热这里只有精品99| 国产成人影院久久av| 久久热在线av| 免费看a级黄色片| 男女之事视频高清在线观看| 人妻久久中文字幕网| 国产乱人伦免费视频| 丰满的人妻完整版| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲午夜理论影院| 日韩欧美一区视频在线观看| 成人手机av| 看免费av毛片| 好男人电影高清在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 老司机福利观看| 欧美日韩精品网址| 丁香欧美五月| 嫩草影院精品99| 国产精华一区二区三区| 丁香六月欧美| 国产又色又爽无遮挡免费看| 一区在线观看完整版| 久久国产亚洲av麻豆专区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 免费搜索国产男女视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 天堂影院成人在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 91av网站免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久久久久免费高清国产稀缺| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜老司机福利片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品九九99| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 深夜精品福利| 99久久精品国产亚洲精品| 天天一区二区日本电影三级 | 国产激情欧美一区二区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 欧美色视频一区免费| 色播在线永久视频| 国产免费av片在线观看野外av| 久久九九热精品免费| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | svipshipincom国产片| 一区二区三区激情视频| 香蕉丝袜av| 午夜久久久在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| videosex国产| 国产单亲对白刺激| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日本vs欧美在线观看视频| 国产精品 欧美亚洲| 日韩大尺度精品在线看网址 | 大陆偷拍与自拍| 中亚洲国语对白在线视频| e午夜精品久久久久久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一二三四社区在线视频社区8| 啪啪无遮挡十八禁网站| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 免费看十八禁软件| 脱女人内裤的视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日本一区二区免费在线视频| 国语自产精品视频在线第100页| 十八禁网站免费在线| 亚洲欧美激情综合另类| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品欧美国产一区二区三| 多毛熟女@视频| 色播亚洲综合网| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲第一电影网av| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲伊人色综图| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 日韩有码中文字幕| 曰老女人黄片| 亚洲熟妇熟女久久| 国产97色在线日韩免费| 在线观看免费视频日本深夜| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美大码av| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久久久久久午夜电影| 伦理电影免费视频| 美女大奶头视频| 成人手机av| 成人永久免费在线观看视频| 国产一区二区在线av高清观看| 久99久视频精品免费| 中文字幕av电影在线播放| 激情视频va一区二区三区| 久久精品国产清高在天天线| 最近最新免费中文字幕在线| 看片在线看免费视频| 美女午夜性视频免费| 亚洲成av人片免费观看| 国语自产精品视频在线第100页| 国产三级黄色录像| 国产精品久久电影中文字幕| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲人成77777在线视频| 日本在线视频免费播放| 亚洲自拍偷在线| 大香蕉久久成人网| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲中文av在线| 欧美国产日韩亚洲一区| 午夜免费成人在线视频| 波多野结衣一区麻豆| www日本在线高清视频| 亚洲男人天堂网一区| 久久草成人影院| 久久婷婷成人综合色麻豆| 最近最新中文字幕大全免费视频| 中文字幕av电影在线播放| 国产主播在线观看一区二区| 狂野欧美激情性xxxx| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产高清有码在线观看视频 | 一区在线观看完整版| 又黄又爽又免费观看的视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 99国产精品99久久久久| 亚洲av成人av| 最近最新中文字幕大全电影3 | 91麻豆精品激情在线观看国产| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久热爱精品视频在线9| 久久久精品欧美日韩精品| 久久热在线av| 色综合亚洲欧美另类图片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 12—13女人毛片做爰片一| 日韩av在线大香蕉| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲av成人av| 久久国产精品人妻蜜桃| 婷婷六月久久综合丁香| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 老司机靠b影院| 色播亚洲综合网| 精品国产国语对白av| 午夜福利,免费看| 色综合欧美亚洲国产小说| 老熟妇仑乱视频hdxx| 免费看十八禁软件| 无限看片的www在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久人人精品亚洲av| 制服诱惑二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美激情高清一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| x7x7x7水蜜桃| 亚洲全国av大片| 一级片免费观看大全| 91在线观看av| 99在线人妻在线中文字幕| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久亚洲av毛片大全| 黄片大片在线免费观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 一二三四在线观看免费中文在| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久中文看片网| 99久久综合精品五月天人人| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产av又大| 欧美日韩精品网址| 免费人成视频x8x8入口观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日韩三级视频一区二区三区| 看免费av毛片| 长腿黑丝高跟| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产一卡二卡三卡精品| 国产精品永久免费网站| 午夜a级毛片| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 999精品在线视频| www.www免费av| 激情在线观看视频在线高清| 大型av网站在线播放| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美+亚洲+日韩+国产| 麻豆国产av国片精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久久久久精品吃奶| 女性被躁到高潮视频| 黑丝袜美女国产一区| 中文字幕久久专区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久久久久久久中文| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 天堂影院成人在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 午夜久久久在线观看| 美女大奶头视频| av片东京热男人的天堂| av中文乱码字幕在线| 久99久视频精品免费| 国产午夜福利久久久久久| 中国美女看黄片| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲黑人精品在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 一夜夜www| 国产熟女xx| 美女高潮到喷水免费观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 99国产精品免费福利视频| 久久久久精品国产欧美久久久| avwww免费| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日本五十路高清| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 韩国精品一区二区三区| 免费在线观看亚洲国产| 男女午夜视频在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 波多野结衣av一区二区av| 桃色一区二区三区在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 成人三级做爰电影| 亚洲国产精品sss在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产三级在线视频| 女人被狂操c到高潮| 好男人电影高清在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 97碰自拍视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 很黄的视频免费| www.自偷自拍.com| 性少妇av在线| 亚洲国产精品sss在线观看| x7x7x7水蜜桃| 色在线成人网| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 欧美黄色片欧美黄色片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 免费在线观看日本一区| videosex国产| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品av久久久久免费| 色播在线永久视频| 91av网站免费观看| 色老头精品视频在线观看| 日韩av在线大香蕉| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 精品电影一区二区在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲自拍偷在线| www国产在线视频色| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品久久久久久成人av| 1024香蕉在线观看| 脱女人内裤的视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产精品一区二区精品视频观看| 免费搜索国产男女视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 91国产中文字幕| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲人成77777在线视频| 欧美日本视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 动漫黄色视频在线观看| 久久香蕉激情| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日韩欧美国产在线观看| 天堂√8在线中文| 国产精品野战在线观看| 国产精品av久久久久免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 男女之事视频高清在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 两性夫妻黄色片| 少妇粗大呻吟视频| av片东京热男人的天堂| 一a级毛片在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 一进一出好大好爽视频| 脱女人内裤的视频| 国产精品av久久久久免费| 欧美性长视频在线观看| 亚洲五月天丁香| 久久香蕉精品热| 后天国语完整版免费观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产单亲对白刺激| 两个人免费观看高清视频| 最新美女视频免费是黄的| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 淫秽高清视频在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 动漫黄色视频在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲美女黄片视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 长腿黑丝高跟| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美日韩福利视频一区二区| 日本五十路高清| 精品日产1卡2卡| av视频免费观看在线观看| 制服人妻中文乱码| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99国产精品99久久久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 青草久久国产| 亚洲成人久久性| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲专区国产一区二区| 国产av又大| 久久欧美精品欧美久久欧美| 午夜福利成人在线免费观看| 精品乱码久久久久久99久播| 午夜日韩欧美国产| 男女下面插进去视频免费观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲精品在线观看二区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 88av欧美| 国产熟女xx| 夜夜爽天天搞| 麻豆久久精品国产亚洲av| 老司机午夜十八禁免费视频| avwww免费| 人人澡人人妻人| 精品久久久久久久毛片微露脸| 色婷婷久久久亚洲欧美| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 十分钟在线观看高清视频www| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 我的亚洲天堂| 大陆偷拍与自拍| 97人妻天天添夜夜摸| 久久九九热精品免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品久久久久久成人av| 免费高清视频大片| 久久精品国产综合久久久| cao死你这个sao货| 亚洲国产欧美日韩在线播放| www国产在线视频色| 久久亚洲精品不卡| 亚洲在线自拍视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美色视频一区免费| 亚洲美女黄片视频| 级片在线观看| or卡值多少钱| 午夜激情av网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 色综合欧美亚洲国产小说| 88av欧美| 又黄又粗又硬又大视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜影院日韩av| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产亚洲欧美在线一区二区| 免费无遮挡裸体视频| 久久久国产成人免费| 午夜影院日韩av| 中文字幕最新亚洲高清| 黑丝袜美女国产一区| 黄色成人免费大全| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美国产日韩亚洲一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 怎么达到女性高潮| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品欧美一区二区三区在线| 免费高清视频大片| 757午夜福利合集在线观看| tocl精华| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| aaaaa片日本免费| 一进一出好大好爽视频| 久久精品国产综合久久久| 18美女黄网站色大片免费观看| 嫩草影视91久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品福利观看| 午夜老司机福利片| 久久天堂一区二区三区四区| 国产熟女xx| 黄片大片在线免费观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本a在线网址| 免费在线观看影片大全网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 曰老女人黄片| 99久久国产精品久久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 色播在线永久视频| 亚洲人成电影观看| 在线视频色国产色| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲,欧美精品.| 咕卡用的链子| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久人人精品亚洲av| 久久久久久久久免费视频了| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲精品国产区一区二| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产黄a三级三级三级人| 美女国产高潮福利片在线看| 女警被强在线播放| 亚洲激情在线av| 久久精品国产综合久久久| 国产精华一区二区三区| 国产又爽黄色视频| 成人欧美大片| 最近最新免费中文字幕在线| 国产男靠女视频免费网站| 久久影院123| or卡值多少钱| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99久久综合精品五月天人人| 国产三级黄色录像| 在线观看免费视频日本深夜| 女人被狂操c到高潮| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美日韩精品网址| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品免费一区二区三区在线| 99国产精品一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| 精品人妻在线不人妻| 亚洲av成人一区二区三| 大香蕉久久成人网| 午夜福利欧美成人| 91精品国产国语对白视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 午夜免费鲁丝| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产精品影院久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| www.熟女人妻精品国产| 91av网站免费观看| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产精品久久久av美女十八| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线观看午夜福利视频| 国产精品久久久av美女十八| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 欧美日韩精品网址| aaaaa片日本免费| 99精品欧美一区二区三区四区| 成人国产综合亚洲| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美午夜高清在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 一区二区三区精品91| 精品国产一区二区三区四区第35| 看黄色毛片网站| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 男女下面进入的视频免费午夜 |