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    甘肅地區(qū)宮頸鱗癌和腺癌患者人乳頭瘤病毒感染基因亞型分布研究

    2019-12-23 17:27:32周慶云石清芳王東存唐兆瑞
    衛(wèi)生職業(yè)教育 2019年1期
    關(guān)鍵詞:危型鱗癌亞型

    周慶云,石清芳,趙 潔,王東存,唐兆瑞

    (甘肅省婦幼保健院,甘肅 蘭州 730050)

    宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性生命和健康的惡性腫瘤之一,發(fā)病率僅次于乳腺癌,死亡率在全球婦女癌癥中居第二位,在一些發(fā)展中國家甚至居首位。宮頸癌包括宮頸鱗癌和宮頸腺癌,宮頸腺癌較少見,但近年來其發(fā)病率明顯上升,與同期宮頸鱗癌相比預(yù)后更差。目前,已經(jīng)明確高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染是宮頸癌的病因[1],HPV16、18型與70%的浸潤性宮頸癌相關(guān)[2-3]。本研究通過檢測甘肅省內(nèi)宮頸鱗癌及腺癌患者感染人乳頭瘤病毒(HPV)的基因亞型狀況,探討不同基因型HPV感染的致癌性,對本地區(qū)婦女宮頸癌早期發(fā)現(xiàn)和早期診治具有重要價值,為HPV疫苗開發(fā)研制提供科學(xué)依據(jù)。

    1 對象與方法

    1.1 對象

    2014年11月至2018年5月甘肅省婦幼保健院婦科門診和住院,未經(jīng)放療、化療,經(jīng)病理組織學(xué)診斷為宮頸鱗癌患者377例,年齡26~79歲,平均年齡49.2歲,20~29歲7例、30~39歲 56例、40~49歲134例、50~59歲 119例、60~69歲 48例、70~79歲13例;宮頸腺癌患者39例,年齡30~65歲,平均年齡47.8歲,30~39歲6例、40~49歲19例、50~59歲9例、60~69歲5例?;颊呔鶠橐鸦閶D女,來自甘肅省內(nèi)。取患者宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行21種HPV亞型檢測。

    1.2 儀器與試劑

    HPV-DNA提取試劑盒,PCR擴(kuò)增儀,Hybrimax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀,人乳頭瘤病毒基因微陣列分型檢測試劑盒(均由香港凱普公司提供)。

    1.3 標(biāo)本采集與保存

    窺陰器充分暴露宮頸,以棉拭子擦去宮頸口分泌物,用凱普公司配套專用宮頸刷置于宮頸口,順時針旋轉(zhuǎn)5周,慢慢抽出,以獲得足夠的移行區(qū)上皮細(xì)胞樣本,放入專用細(xì)胞保存液(3 ml)中,沿刷柄折痕處折斷,旋緊管蓋,做好樣本標(biāo)記,立即送檢或放置4℃冰箱中,3天內(nèi)檢驗(yàn)。

    1.4 檢測方法

    HPV分型基因檢測步驟:(1)樣本DNA提?。喝颖?00 ul,以14 000 r離心一分鐘,棄上清液后,用凱普公司試劑盒提取DNA。(2)PCR擴(kuò)增:將PCR反應(yīng)試劑及Taq酶按比例混合后在反應(yīng)管內(nèi)加入 24 μl,再加入 DNA 模板 1 μl,混勻后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。每批同時擴(kuò)增HPV18型陽性對照及陰性對照各一份。(3)核酸分子快速導(dǎo)流雜交:采用Hybrimax醫(yī)用核酸分子快速導(dǎo)流雜交儀及配套試劑盒,在雜交平臺放入標(biāo)記有21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片雜交膜,按試劑盒說明進(jìn)行導(dǎo)流雜交,酶標(biāo)顯色。(4)結(jié)果判斷:肉眼觀察檢測結(jié)果,陽性點(diǎn)為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn),根據(jù)膜條HPV分型分布圖,判斷為何種HPV病毒類型。本檢測將HPV分為21種亞型,包括 15 種高危亞型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68 型,6 種低危亞型:6、11、42、43、44、81 型。有兩型或兩型以上者為多重感染。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析,以百分率作為HPV感染的評價指標(biāo),HPV檢出率采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性。

    2 結(jié)果

    2.1 宮頸鱗癌和腺癌患者HPV感染型別分布

    377例宮頸鱗癌患者HPV總感染率為95.5%(360/377),共檢測到 17種 HPV 亞型,其中高危型 13種(16、58、18、33、31、52、39、68、51、53、45、56、59 型),低危型 4 種(81、44、42、43型),未檢測到 6、11、35、66 型。HPV16 型感染率最高,為76.7%,其次是58型(6.1%),見表1。39例宮頸腺癌患者HPV總感染率為48.7%(19/39),共檢測到6種HPV亞型,均為高危型單一感染,依次為 16型(47.4%),18型(26.3%),52型(10.5%)和58、51、45型(均為 5.3%),見表 2。

    2.2 HPV單一感染和多重感染與宮頸鱗癌、腺癌的關(guān)系

    本研究中,宮頸鱗癌HPV陽性患者共360例,單一感染319例,占88.6%,在多重感染的41例患者(11.4%)中,二重感染39例,占多重感染的95.1%,最常見的是HPV16型合并其他亞型感染,共37例,占90.2%;三重感染2例,其中1例是HPV16型合并其他亞型感染。單一感染率與多重感染率差異有顯著性(P<0.05),見表1。19例HPV陽性宮頸腺癌均為高危型單一感染,見表2。

    3 討論

    大量流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究表明,HPV與宮頸癌及癌前病變密切相關(guān)[4]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)兩百多種型別的HPV,根據(jù)其致病性分為高危型和低危型兩大類[5],長期持續(xù)感染高危型可以致癌,危及患者生命。本研究中,宮頸鱗癌患者僅檢出4例感染低危型,且均與高危型HPV16型合并感染,宮頸腺癌患者中未檢出低危型,證實(shí)了只有感染高危型HPV才會引發(fā)宮頸癌的觀點(diǎn)。

    3.1 宮頸鱗癌和腺癌患者HPV感染的差異

    本研究中,宮頸鱗癌、腺癌的HPV總感染率分別為95.5%和48.7%。在一項(xiàng)針對西方國家的Meta分析中,HPV在宮頸鱗癌患者中的感染率為87.3%,在宮頸腺癌患者中的感染率為76.4%[6]。在我國,宮頸鱗癌患者HPV感染率超過80%,而在宮頸腺癌患者中的感染率達(dá)50%~70%[7-8]。相比之下,甘肅地區(qū)宮頸鱗癌患者的HPV總感染率偏高,而腺癌患者的HPV總感染率偏低,這或許與樣本數(shù)量較少有關(guān),還需今后進(jìn)一步研究。

    3.2 宮頸鱗癌和腺癌患者主要感染的HPV亞型存在地理差異

    最新的亞洲婦女宮頸癌中HPV常見亞型報告顯示[9],無論在西亞還是東亞,HPV16型和HPV18型都是感染率最高的兩個型別,而其他HPV感染型別排序有所差異。在西亞地區(qū),HPV45、33、31、35、58、52、56 型和 59 型為繼 HPV16、18 型后最常見的 8 種型別,而在東亞地區(qū)則為 58、33、52、45、31、59、39、35型。本研究顯示,宮頸鱗癌患者感染了17種HPV亞型,如HPV16、58、18、33、31、52、39、68、51、53 型等,主要感染亞型與文獻(xiàn)報道基本一致。喻朝霞等[10]報道,南方地區(qū)宮頸鱗癌患者HPV 主要感染亞型依次為 16、18、33、58、31、52、59、45 型;陶萍萍等[11]報道北京宮頸癌患者HPV主要感染亞型依次為16、18、52、58、33型。說明我國南、北方地區(qū)宮頸癌患者主要感染的HPV亞型存在一致性,但也存在地理差異。本次研究中宮頸鱗癌患者主要感染的為HPV16、58型,與國內(nèi)研究結(jié)果有一定差異,值得重視。文獻(xiàn)報道宮頸腺癌主要感染亞型為16、18、39型[7]或 16、18、31、33、52、58 型[12]。本研究中宮頸腺癌 HPV 主要感染16、18、52、58、51、45 型,主要型別相同,16、18 型之后排序有一定差異,這可能與地域、種族和樣本量不同有關(guān)。

    3.3 單一感染較多重感染更有可能增加宮頸鱗癌和腺癌發(fā)生率

    對于HPV多重感染是否會促使宮頸癌發(fā)生,目前研究觀點(diǎn)尚不一致。有學(xué)者認(rèn)為多重感染并不增加宮頸癌發(fā)生率[4],但也有學(xué)者認(rèn)為多重感染促使宮頸癌發(fā)生,并使治療更加棘手[13]。本研究中,宮頸鱗癌HPV單一感染和多重感染比為7.8∶1,單一感染率明顯高于多重感染率,在宮頸鱗癌HPV感染主要型別方面單一感染與多重感染相比差異有顯著性(P<0.05)。國內(nèi)報道宮頸腺癌均檢出多重感染[12],或以多重感染為主、單一感染為輔[14]。本研究中,宮頸腺癌均為單一感染,與文獻(xiàn)有較大差異。在一定程度上說明單一感染對宮頸鱗癌和腺癌的發(fā)生發(fā)展起到促進(jìn)作用,但其具體作用機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

    研究資料表明,由于清除率低,HPV16型感染可能更易導(dǎo)致持續(xù)性感染[15]。本研究中,宮頸鱗癌、腺癌中HPV16型單一感染占首位,感染率達(dá)76.7%和47.4%,表明甘肅地區(qū)HPV16型單一感染可能是宮頸鱗癌和腺癌的主要原因。因此,對于HPV感染者不僅要重視其是否已經(jīng)出現(xiàn)宮頸病變,積極進(jìn)行臨床治療,還要重視其所感染的具體亞型,特別是對HPV16型感染者應(yīng)密切隨診,以便及早發(fā)現(xiàn)異常、盡早干預(yù),有效降低宮頸癌發(fā)生率。

    總之,宮頸鱗癌和宮頸腺癌在流行病學(xué)、生物學(xué)行為、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)模式、生存率以及對治療的反應(yīng)等方面均有不同,與同期宮頸鱗癌相比,宮頸腺癌預(yù)后更差。宮頸腺癌的發(fā)生與HPV感染密切相關(guān),研究其致癌機(jī)制對臨床診治意義重大。我國地域遼闊,不同地區(qū)及民族宮頸鱗癌、腺癌的主要感染亞型不盡相同。明確一個地區(qū)HPV致癌的主要型別,根據(jù)感染型別預(yù)測病變進(jìn)展,評估預(yù)后,對于指導(dǎo)臨床醫(yī)生確定診治方案,避免過度治療具有重要意義,同時能為研制適合本地區(qū)的HPV疫苗提供流行病學(xué)資料。

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