一種制備補(bǔ)骨脂酚的簡(jiǎn)單、高效的方法*

張波泳，柴　欣，王躍飛，江振作

（1天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津　300193；2天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院中藥新藥研發(fā)中心，天津　300457）

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一種制備補(bǔ)骨脂酚的簡(jiǎn)單、高效的方法*

張波泳1，2，柴欣1，2，王躍飛1，2，江振作1，2

（1天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193；2天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院中藥新藥研發(fā)中心，天津300457）

摘要：[目的]本研究旨在建立一種制備補(bǔ)骨脂酚的簡(jiǎn)單、高效的方法。[方法]補(bǔ)骨脂藥材粉碎，經(jīng)石油醚冷浸提取，得到補(bǔ)骨脂酚粗提物，再經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚洗脫，得到補(bǔ)骨脂酚粗品；再經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脫得到補(bǔ)骨脂酚純品。[結(jié)果]通過(guò)核磁共振波譜儀鑒定為補(bǔ)骨脂酚；經(jīng)UPLC檢測(cè)，在246 nm下補(bǔ)骨脂酚純度＞98%，補(bǔ)骨脂酚得率1.0%。[結(jié)論]該方法具有簡(jiǎn)單、快速、高效的特點(diǎn)，能夠大量制備補(bǔ)骨脂酚。

關(guān)鍵詞：補(bǔ)骨脂；補(bǔ)骨脂酚；冷浸法

補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoraleacorylifolia L.的干燥成熟果實(shí)，具有治療腎陽(yáng)不足、陽(yáng)痿遺精、遺尿尿頻、腰膝冷痛、腎虛作喘、五更泄瀉，外用治白癜風(fēng)、斑禿的功效[1]。補(bǔ)骨脂酚是補(bǔ)骨脂中主要的有效成分[2]，具有抗癌[3]、降糖降血脂[4-5]、抗炎[6-8]、抗衰老[9]、抗菌[10-15]、抗抑郁[16]、抗氧化和肝臟保護(hù)[17-18]等多種藥理活性。

如何快速制備大量的補(bǔ)骨脂酚是工業(yè)生產(chǎn)中密切關(guān)注的問(wèn)題，本研究建立了一種補(bǔ)骨脂酚的制備方法：補(bǔ)骨脂藥材粉碎，經(jīng)石油醚冷浸提取，回收溶劑，得到補(bǔ)骨脂酚粗提物；經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚洗脫得到補(bǔ)骨脂酚粗品；再進(jìn)一步經(jīng)石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脫得到補(bǔ)骨脂酚純品。該方法具有高效率、低成本、所用溶劑毒性低等優(yōu)點(diǎn)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器補(bǔ)骨脂藥材購(gòu)自河南，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥副教授鑒定為豆科植物補(bǔ)骨脂（Psoralea corylifolia L.）的干燥成熟果實(shí)，樣品儲(chǔ)存于天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院中藥新藥研發(fā)中心；薄層層析硅膠GF-254、柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；石油醚（沸程60～90℃）；乙酸乙酯（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；甲醇（美國(guó)Sigma-Aldrich公司）。

ACQUITY超高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司，包括WatersACQUITY二元泵、DAD檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、Empower色譜工作站）；MILLI-Q超純水儀（美國(guó)Millipore公司）；Bruker AV III 400 MHz核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵；DLSB-5/20型低溫冷卻液循環(huán)泵（天津科諾儀器設(shè)備有限公司）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪予華儀器廠）；ZF-20D暗箱式紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；AL 204萬(wàn)分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；ACS-30型電子計(jì)價(jià)秤（上海花潮電器有限公司）。1.2補(bǔ)骨脂酚的制備方法本研究中，為了提高補(bǔ)骨脂酚的得率，簡(jiǎn)化制備工藝，提高制備效率，系統(tǒng)考察了不同體積石油醚、提取時(shí)間、提取次數(shù)等影響因素。提取補(bǔ)骨脂酚的影響因素考察見(jiàn)表1。

表1補(bǔ)骨脂酚提取的影響因素

Tab.1 Optimization of extraction conditions of Bakuchiol

組別　補(bǔ)骨脂藥材（kg）石油醚（L）提取時(shí)間（h）提取次數(shù)（次）1　1.003　5　36　3 2　1.002　10　24　2 3　1.004　15　12　1

經(jīng)不同提取工藝制備的補(bǔ)骨脂酚粗提物，分別加石油醚溶解，硅膠（200～300目）拌樣，補(bǔ)骨脂酚粗提物、石油醚體積、硅膠質(zhì)量比為100∶50∶120（g/mL/g）。

石油醚和硅膠（100～200目）按體積質(zhì)量比5∶1（mL/g）裝柱，將補(bǔ)骨脂酚粗提物樣品進(jìn)行硅膠柱層析分離，石油醚洗脫，每2.5 L為1個(gè)流份，共收集4個(gè)流份，經(jīng)TLC跟蹤，合并流份1～3，減壓濃縮，得補(bǔ)骨脂酚粗品。

為進(jìn)一步純化補(bǔ)骨脂酚粗品，加石油醚溶解，硅膠（200～300目）拌樣，其中，補(bǔ)骨脂酚粗品、石油醚體積、硅膠質(zhì)量比為100∶50∶120（g/mL/g）；石油醚和硅膠（100～200目）按體積質(zhì)量比5∶1（mL/g）裝柱，將補(bǔ)骨脂酚粗品進(jìn)行硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脫，1 L為1個(gè)流份，經(jīng)TLC跟蹤，10%硫酸乙醇顯色，合并含有補(bǔ)骨脂酚的流份，減壓濃縮，得補(bǔ)骨脂酚純品。

1.3供試品溶液制備及UPLC分析

1.3.1液相色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 Rapid Resolution HT（4.6×100 mm，1.8 μm）；甲醇-水（85∶15）等度洗脫；柱溫：30℃；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：2 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：246 nm。

1.3.2供試品溶液的制備取補(bǔ)骨脂酚3.60 mg，精密稱定，置2 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，取適量配成濃度為0.09 mg/mL的供試品溶液，14 000 r/min離心10 min，取上清液，即得。

2　結(jié)果與討論

系統(tǒng)研究了不同體積石油醚、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)補(bǔ)骨脂酚得率的影響，結(jié)果表明：補(bǔ)骨脂經(jīng)5倍量石油醚、提取36 h、提取3次得補(bǔ)骨脂提取物140 g，經(jīng)硅膠柱純化得到補(bǔ)骨脂酚粗品78 g（經(jīng)UPLC分析其純度約30%），得率為7.8%；經(jīng)10倍量石油醚、提取24h、提取2次得補(bǔ)骨脂提取物134g，經(jīng)硅膠柱純化得到補(bǔ)骨脂酚粗品77 g（經(jīng)UPLC分析其純度約30%），得率為7.7%；經(jīng)15倍量石油醚、提取12 h、提取1次得補(bǔ)骨脂提取物118 g，經(jīng)硅膠柱純化得到補(bǔ)骨脂酚粗品60 g（經(jīng)UPLC分析其純度約30%），得率為6.0%。因此，選擇5倍量石油醚、提取36 h、提取3次作為補(bǔ)骨脂酚的最佳提取工藝。

合并上述補(bǔ)骨脂酚粗品215 g，進(jìn)行硅膠柱層析分離，得補(bǔ)骨脂酚純品30 g，得率為1.0%。通過(guò)核磁（1H NMR和13C NMR）數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)資料進(jìn)行比較[19]，化合物被確證為補(bǔ)骨脂酚，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1，經(jīng)UPLC檢測(cè)，純度＞98%，見(jiàn)圖2，數(shù)據(jù)如下。

補(bǔ)骨脂酚：淡黃色油狀物。

圖1　補(bǔ)骨脂酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structure of Bakuchiol

圖2　補(bǔ)骨脂酚的UPLC色譜圖Fig.2 UPLC chromatograms of Bakuchiol

1H NMR（400 MHz，CDCl3）：7.24（2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6），6.76（2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5），6.25（1H，d，J= 16.4 Hz，H-7），6.05（1H，d，J=16.4 Hz，H-8），5.89（1H， dd，J=17.2，10.8 Hz，H-17），5.12（1H，bt，J=6.8 Hz，H-12），5.04（1H，dd，J=6.0，1.2 Hz，H-18a），5.00（1H，dd，J=12.8，1.2 Hz，H-18b），1.95（2H，dd，J= 17.2，7.6 Hz，H-10），1.67（3H，s，H-14），1.58（3H，s，H-15），1.49 （2H，m，H-11），1.19（3H，s，H-16）。

13C NMR（100 MHz，CDCl3）：154.7（C-4），146.1 （C-17），136.0（C-7），131.4（C-1），131.1（C-13），127.5 （C-2，6），126.6（C-8），124.9（C-12），115.5（C-3，5），112.0（C-18），42.7（C-9），41.4（C-10），25.8（C-15），23.5（C-16），23.4（C-11），17.8（C-14）。

3　結(jié)論

本研究建立了一種制備補(bǔ)骨脂酚的方法，該方法具有操作簡(jiǎn)便，成本低廉，收率穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，能夠大量制備補(bǔ)骨脂酚，適合規(guī)?；a(chǎn)的需要，為補(bǔ)骨脂資源的綜合開(kāi)發(fā)利用和產(chǎn)業(yè)化奠定了基礎(chǔ)。

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（本文編輯：高杉，馬英）

·留學(xué)生園地·

A simple and efficient method for preparation of bakuchiol

ZHANG Bo-yong1，2，CHAI Xin1，2，WANG Yue-fei1，2，JIANG Zhen-zuo1，2
（1. Institute of Traditional Chinese Medicine, Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine, Province and Minstry Co-established State Key Laboratory, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193, China; 2. Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine, Tianjin International Joint Academy of Biotechnology and Medicine, Tianjin 300457, China）

Abstract:[Objective] To establish a simple and efficient method for the preparation of bakuchiol. [Methods] The powder of Fructus Psoraleae was extracted with petroleum ether by maceration to get the crude extract of bakuchiol. The crude extract was subjected to silica gel column chromatography and eluted with petroleum ether to achieve the crude product of bakuchiol，then further treated with petroleum ether and ethyl acetate（12∶1）to achieve bakuchiol. [Results] Bakuchiol，characteristed by1H NMR，(13)C NMR was obtained with the purity above 98%，which was determined by UPLC-DAD at 246 nm. The yield of bakuchiol was 1.0%. [Conclusion] The method is simple，rapid and efficient，can prepare a large number of bakuchiol.

Key words:Fructus Psoraleae；Bakuchiol；cold-maceration

收稿日期：（2016-03-26）

通訊作者：王躍飛，E-mail：wangyuefei_2006@hotmail.com。

作者簡(jiǎn)介：張波泳（1990-），男，碩士，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制研究。

*基金項(xiàng)目：十二五重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)（2014ZX09304307-001-005、2012ZX09103201-046）。

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2016.04.15

中圖分類號(hào)：R223.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672-1519（2016）04-0245-03