東莞地區(qū)20400例HPV感染情況及基因型分布特點(diǎn)分析

邵錦歡，肖翔，鐘陽青，張達(dá)秀

(東莞市塘廈醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞523721)

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東莞地區(qū)20400例HPV感染情況及基因型分布特點(diǎn)分析

邵錦歡，肖翔，鐘陽青，張達(dá)秀

(東莞市塘廈醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞523721)

摘要:目的了解本地區(qū)婦女宮頸脫落細(xì)胞HPV的感染情況和基因型分布特點(diǎn)，觀察其在不同年份、不同年齡段、不同亞型的分布特點(diǎn)，為本地區(qū)HPV的篩查和防治提供依據(jù)。方法以2011年1月至2015年8月來我院婦產(chǎn)科門診就診的婦女為研究對象，按照年齡分為6個組即（T1<20歲，T2：21～30歲，T3：31～40歲，T4：41～50歲，T5：51～60歲，T6：>60歲）采集宮頸脫落細(xì)胞，使用深圳亞能公司生產(chǎn)的試劑進(jìn)行HPV基因型的檢測，一共可以檢測23種常見的基因亞型。將得到的測試數(shù)據(jù)按照年份排序，統(tǒng)計HPV總感染率，總體基因亞型分布特點(diǎn)，再比較不同年份，不同年齡，不同亞型的感染情況。結(jié)果①總共檢測20400例標(biāo)本，HPV陽性的標(biāo)本數(shù)為4466例，總感染率為21.89%。②因?yàn)榇嬖诙嘀馗腥荆▋煞N或兩種以上的基因亞型感染）的情況，4466例陽性的標(biāo)本中23種HPV常見基因型共出現(xiàn)7024次，其中高危型占72.72%（5108/7024），以HPV52、16、58三種亞型為主分別占14.24%（1000/7024）、10.75%（755/7024）和7.30%（513/7024），低危型占27.28%（1916/ 7024），以HPV43、6、11三種亞型為主，分別占9.38%（659/7024）、8.93%（627/7024）、5.11%（359/7024）。③HPV感染的高峰期出現(xiàn)在T1、T5和T6組，分別為41.34%、31.65%、32.93%。隨著年齡的增加低危型感染率逐漸降低，高危型感染率逐漸升高，各年齡組高危型感染率均大于低危型感染率。④患者HPV單一種基因型感染率為66.41%（2966/4466），多重感染率為33.59% （1500/4466），多重感染主要出現(xiàn)在15～40歲之間，其中最多出現(xiàn)了9重感染。⑤2011－2015年各年份HPV總感染率的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但是HPV6型感染百分比逐年降低，HPV51、52型感染百分比逐年升高。結(jié)論本地區(qū)HPV感染率高達(dá)到21.89%，以高危型感染為主，HPV基因型在不同年份和不同年齡組有差異，因此加強(qiáng)HPV的篩查很有必要。

關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒；基因型；流行病學(xué)調(diào)查

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。據(jù)報道宮頸癌患者中90%以上存在HPV感染[1]，全球約有2.91億婦女感染HPV，宮頸癌已成為全世界女性最常見的惡性腫瘤[2，3]。根據(jù)HPV型別與子宮頸癌發(fā)生危險性高低分為低危型HPV和高危型HPV，不同基因型別感染在不同國家，不同地區(qū)存在著較大差異[4－6]，因此獲得本地區(qū)的HPV基因型分布特點(diǎn)有助于臨床疾病的篩查和診療。本研究對20400例婦科門診患者的宮頸脫落細(xì)胞HPV感染率進(jìn)行分析得到本地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)，為臨床診療提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1研究對象2011年1月至2015年8月來廣東省東莞市塘廈醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診的婦女共20400例。年齡10～83歲，平均年齡32歲。

1.2儀器試劑DNA快速提取試劑盒；PCR擴(kuò)增儀；PCR－RDB試劑盒；分子雜交箱。以上試劑設(shè)備均由深圳亞能公司提供。

1.3方法

1.3.1宮頸脫落細(xì)胞的采集按照知情同意原則，采集標(biāo)本前需要預(yù)先告訴患者并自愿接受檢查。受檢患者需要滿足：⑴檢查前24h沒有性生活；⑵檢查前3d內(nèi)未行陰道內(nèi)檢查、陰道沖洗及放置陰道栓劑；⑶檢查時為非月經(jīng)期；⑷有性生活使。采集使用專用的宮頸脫落細(xì)胞采集器，先用窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用棉拭子將陰道及宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，再用試劑盒提供的專用宮頸刷插入子宮頸外口，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細(xì)胞樣本，然后將其放入含專用細(xì)胞保存液的試管中，2～8℃冰箱保存，每隔3d檢測一次。

1.3.2檢測采用深圳亞能公司生產(chǎn)的試劑進(jìn)行檢測，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。整個實(shí)驗(yàn)過程在通過了國家衛(wèi)生部臨檢中心驗(yàn)收的PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，操作人員都是通過培訓(xùn)考核合格的有證人員。

1.3.3結(jié)果判斷檢測結(jié)果按照說明書規(guī)定的判讀方法進(jìn)行結(jié)果判斷。本實(shí)驗(yàn)使用的是深圳亞能公司生產(chǎn)的PCR－RDB試劑盒，其可以檢測23種常見HPV基因型，包括18種高危型；HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4.5種低危型6、11、41、42、43。

1.3.4統(tǒng)計指標(biāo)2011年－2015年五年HPV的總體感染率，各基因型的總體出現(xiàn)頻率，各年各基因亞型的出現(xiàn)頻率，各年各年齡段的感染率和基因亞型的出現(xiàn)率，單一HPV基因亞型和多重亞型感染率等。

1.3.5統(tǒng)計學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)全部記錄在EXCEL表格中，當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 HPV總體感染情況在接受HPV檢查的20400例患者中，年齡在10～83歲之間，平均年齡為32歲。共檢測出4466例HPV感染者，HPV總感染率為21.89%，各年份的數(shù)據(jù)統(tǒng)計詳見表1。

表1　2011年- 2015年各年份HPV感染數(shù)據(jù)匯總表

從表1可以看到近5年來受檢者在逐漸增多，陽性檢出例數(shù)也隨之增加，但是各年的受檢者平均年齡沒有差異，陽性率沒有差異。

2.2各基因亞型出現(xiàn)頻率因?yàn)榇嬖诙嘀馗腥镜那闆r4466例陽性的標(biāo)本中23種HPV常見基因型共出現(xiàn)7024次，其中高危型占72.72%（5108/ 7024），以HPV52、16、58三種亞型為主分別占14.24%（1000/7024）、10.75%（755/7024）和7.30% （513/7024），低危型占27.28%（1916/7024），以HPV43、6、11三種亞型為主，分別占9.38%（659/ 7024）、8.93%（627/7024）、5.11%（359/7024）。具體數(shù)據(jù)詳見圖1。

圖1　2011年- 2015年HPV各基因型出現(xiàn)平率圖

從圖2可以看出HPV51、52、68三型感染率隨著年份的變化在逐漸遞增，6、11兩型在逐漸遞減。高危型和低危型歷年出現(xiàn)的頻率是一樣的即高危型以52、16、58為主，低危型以6、11、43為主。

圖2　各年份各HPV基因型出現(xiàn)平率

2.3不同年齡段的感染情況將20400例參與篩查的患者按照年齡分為6組即T1（<20歲）、T2（21～30）、T3（31～40）、T4（41～50）、T5（51～60）、T6（>60歲）。各年齡組的HPV感染率分別為41.34%，22.44%，18.5%，19.64%，31.65%，32.93%。具體數(shù)據(jù)詳見表2。

表2　2011- 2015年各年齡段HPV感染情況表

從表2可以看出主要的受檢者集中在T2、T3、T4三個組，受檢人數(shù)占了總受檢人數(shù)的92.32%，HPV陽性率也組要集中在T1、T5、T6三個組。

2.4各年齡段HPV基因亞型高、低危型出現(xiàn)頻率T1至T6組隨著年齡的遞增低危型感染率呈現(xiàn)遞減趨勢，高危型感染呈現(xiàn)遞增趨勢。詳見表2、表3。

表3　各年齡段HPV感染高、低危型出現(xiàn)頻率

2.5各年齡組各基因亞型感染情況低危型感染主要出現(xiàn)在T1、T2、T3三組，其中T2組高、低危兩型感染率均明顯高于其他各年齡組，T3組高、低危型均有。T4、T5、T6三組的感染類型主要為高危型。具體數(shù)據(jù)詳見圖3。

圖3　2011- 2015各年齡段各基因型出現(xiàn)頻率

2.6多重感染情況HPV感染呈現(xiàn)單一感染和多重感染兩種情況，本實(shí)驗(yàn)總檢測出4466例陽性患者標(biāo)本，由于出現(xiàn)了多重感染情況23種HPV基因亞型一共出現(xiàn)了7027次。其中患者單一HPV基因亞型感染占66.37%（2964/4466），多重感染率為33.63%（1502/4466），其中多重感染主要發(fā)生在T1組。單一感染和多重感染率數(shù)據(jù)占詳見表4，各年齡組中多重感染率數(shù)據(jù)詳見表5。

表4　單一感染和多重感染數(shù)據(jù)

表5　各年齡段多重感染率數(shù)據(jù)

3　討論

研究表明HPV高危型持續(xù)感染是引起宮頸癌的必要因素[7]，據(jù)統(tǒng)計每年宮頸癌的發(fā)病率按照2%～3%的速度增長[8]，宮頸癌已經(jīng)成為全球第二位的惡性腫瘤。HPV感染屬于性傳播疾病，性活躍期婦女普遍易感，隨著易感人群的年輕化HPV感染率持續(xù)升高。HPV基因亞型根據(jù)其與宮頸癌的發(fā)生率可將其分為高危型和低危型。

近年來HPV感染得到了大量的研究，研究表明不同地區(qū)，不同人群，不同的篩查方法等原因得到的結(jié)果有較大差異。國外的研究指出宮頸癌患者中常見亞型感染依次為HPV16、18、45、31、33、58和52型，而亞洲地區(qū)58和52型高于歐美地區(qū)常見的31、33和45型[9－11]。我國地域遼闊，人口眾多，各族人群的生活方式和習(xí)慣不同造成我國HPV感染呈現(xiàn)地區(qū)多態(tài)性。本研究共檢測20400例標(biāo)本其中HPV陽性的標(biāo)本數(shù)為4466例，及HPV感染率為21.89%，因?yàn)榇嬖诙嘀馗腥荆ㄍ换颊邇煞N或兩種以上的基因亞型感染）的情況，4466例陽性的標(biāo)本中23種常見HPV基因型共出現(xiàn)7024次，其中高危型占72.72%（5108/7024），以HPV52、16、58三種亞型為主分別占14.24%（1000/ 7024）、10.75%（755/7024）和7.30%（513/7024），低危型占27.28%（1916/7024），以HPV43、6、11三種亞型為主，分別占9.38%（659/7024）、8.93%（627/7024）、5.11%（359/7024），這與其他學(xué)者的研究有差異[12，13]。HPV51、52、68三型感染率隨著年份的變化在逐漸遞增，HPV6、11兩型在逐漸遞減。高危型和低危型歷年出現(xiàn)的頻率是一樣的即高危型以52、16、58為主，低危型以6、11、43為主。

本研究顯示從2011年到2015年每年的受檢者都在增加，其中T2、T3兩組受檢者最多占總?cè)藬?shù)的93.33%，這表明隨著生活水平的提高人們對HPV的關(guān)注越來越多，尤其是年輕女性，本次研究最小年齡為10歲，也表明現(xiàn)在家長對子女的健康關(guān)注度在不斷的提高。本文6個研究組中HPV基因亞型感染都以高危型感染為主，其中隨著年齡的增加低危型感染率逐漸降低，高危型感染率逐漸升高，到了T6組時高危型感染率達(dá)到了86.05%。各年齡組的HPV感染率分別為41.34%，22.44%，18.5%，19.64%，31.65%，32.93%，表明年齡小于20歲組對HPV易感，且呈現(xiàn)低危、高危型混合感染為主，到了大于51歲時有出現(xiàn)了HPV感染的高峰這說明老年人對HPV易感，且以高危型感染為主，這可能是由于老年人處于絕經(jīng)期，激素水平紊亂、乳酸桿菌的減少及陰道pH值變化等原因，使得機(jī)體免疫功能衰退，而導(dǎo)致HPV易感性增加及清除HPV的能力降低[14，15]。本文研究數(shù)據(jù)表明HPV低危型感染可能存在隨著時間的延長有自身清除現(xiàn)象，而高危型存在持續(xù)感染的可能性更大。

有文獻(xiàn)顯示單一型HPV感染可以使宮頸癌的患病風(fēng)險提高19.9倍，而多重HPV感染則使該風(fēng)險增加31.8倍，且多重感染對宮頸病變有促進(jìn)作用[16]。本文患者HPV單一種基因型感染率為66.41%（2966/4466），多重感染率為33.59%（1500/ 4466），多重感染主要出現(xiàn)在年齡小于20歲組，以高、低?；旌细腥緸橹?，其中最多出現(xiàn)了9重感染。

綜上所述，本地區(qū)HPV感染率較高達(dá)到21.89%，最常見的基因亞型為HPV52、16、43、6、58、11，多重感染率達(dá)到33.59%。不同年齡段的感染率存在差異（P<0.05），且呈現(xiàn)”U”型感染情況。隨著年齡的增加高危型感染率逐漸升高。因此篩查HPV感染是疾病的早期預(yù)防和治療的必要手段。

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·實(shí)驗(yàn)研究·

Analysis of the infection and genotype distribution of 20400 HPV patients in Dongguan

SHAO Jinhuan，XIAO Xiang，ZHONG Yangqing，ZHANG Daxiu. Department of Clinical Laboratory，Dongguan Tangxia Hospital，Guangdong dongguan，523721，China.

Abstract：Objective To investigate the infection and genotype distribution of human papillomavirus (HPV) in Dongguan base on the year，age and subtype，so as to provide evidence for HPV screening and prevention in Dongguan. Methods The patients who were from outpatient service of department of gynaecology of our hospital from January 2011 to August 2015 were collected to gather cervical cytological speciments，23 common genotypes of HPV were detected by analysis kits (YANENGBIO，Shenzhen). Six groups (T1－T6) were set up based on the age. A retrospective analysis was carried out to evaluate the overall prevalence of HPV infection. The prevalence of HPV infecton in different ages and subtypes were compared. Results①Atotal of 20400 specimen were collected，and the overall HPV infection rate were 21.89%(4466/20400).②The more common high risk genotype and low risk genotypes were HPV52，HPV16，HPV58 and HPV43，HPV16，HPV11 respectively. Conclusion The screening of HPV genotypes for healthy person is meaningful in early prevention of cervical cancer and epidemiological studies of HPV，and we should pay more attention in the prevention of HPV for young and elderly people．

Key words:Human papilloma virus；Genotypes；Epidemiological investigation

(收稿日期2015-12-07；修回日期2016-03-07)

作者簡介：邵錦歡，女，1977年9月生，本科，主管技師,主要從事分子診斷工作。

DOI：10.3969/j.issn.1674－1129.2016.02.013

中圖分類號：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1674－1129(2016)02－0166－04