復智散通過細胞周期依賴性蛋白激酶5通路減輕皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化

張兆旭，王德生

（1.山東省千佛山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東濟南 250000；2.哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，黑龍江哈爾濱 150001）

復智散通過細胞周期依賴性蛋白激酶5通路減輕皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化

張兆旭1，王德生2

（1.山東省千佛山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東濟南 250000；2.哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，黑龍江哈爾濱 150001）

目的 探討復方中藥復智散（FZS）能否通過抑制細胞周期依賴性蛋白激酶5（CDK5）通路，減輕Aβ25－351誘導的新生鼠皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化。方法 選用24 h內(nèi)新生Wistar大鼠，分離純化皮層神經(jīng)元，進行體外培養(yǎng)。皮層神經(jīng)元在體外培養(yǎng)7 d后，應用20 μmol·L－1Aβ25－351作用于皮層神經(jīng)元24 h。藥物治療組則應用FZS（20 mg· L－1）、CDK5抑制劑Roscovitine（15 μmol·L－1）、鈣蛋白酶（calpain）制劑Calpeptin（20 μmol·L－1）預處理24 h，然后用20 μmol·L－1Aβ25－351作用24 h。用Western blot檢測Tau蛋白Ser396、Ser202和Thr231位點磷酸化水平和CDK5的激活蛋白p25/p35的蛋白水平；熒光酶標儀測定熒光強度來反映calpain活性；免疫沉淀法檢測CDK5激酶活性。結(jié)果 20 μmol·L－1Aβ25－351作用于皮層神經(jīng)元24 h后，Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位點磷酸化水平增加，CDK5激酶活性升高，CDK5激活蛋白p25水平升高，calpain活性升高。20 mg·L－1FZS治療組則明顯抑制了Aβ25－351導致的Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位點磷酸化水平增加，抑制了CDK5激酶活性、p25蛋白水平以及calpain活性升高。CDK5抑制劑roscovitine和calpain抑制劑calpeptin作為陽性對照藥物也顯示了抑制Tau蛋白過度磷酸化的作用。結(jié)論 復智散可能通過calpain-p25/CDK5通路抑制Aβ25－351導致的皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化。

阿爾茨海默?。籆DK5；Tau蛋白；復智散；鈣蛋白酶；p25

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD），是老年期癡呆最常見的類型，神經(jīng)細胞外β-淀粉樣蛋白（Aβ）異常沉積引發(fā)的老年斑（SPs）和神經(jīng)細胞內(nèi)Tau蛋白過度磷酸化形成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFTs）是其特征性病理學變化［1］。盡管Aβ和Tau蛋白的關系尚未完全明確，但越來越多的證據(jù)表明，不論在體內(nèi)還是在體外實驗，Aβ均可引起的Tau蛋白過度磷酸化，引起神經(jīng)元微管崩解、軸漿運輸障礙，最終導致神經(jīng)元凋亡，因此Aβ引起的Tau蛋白過度磷酸化被普遍認為是AD的重要的發(fā)病機制之一［2］。Aβ可以激活各種蛋白激酶引起Tau蛋白磷酸化，CDK5是最重要的Tau蛋白激酶之一。p35是CDK5神經(jīng)專一性的激活亞基，在鈣依賴性calpain剪切作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)閜25，使CDK5過度激活，從而導致Tau蛋白過度磷酸化［3］。

復方中藥復智散（FZS）是用于治療老年性癡呆多年，臨床及實驗室研究證明，F(xiàn)ZS治療AD有效；FZS可改善老齡鼠的水迷宮試驗，增加癡呆模型鼠腦內(nèi)乙酰膽堿含量［4］；FZS對抗Aβ毒性，提高體外神經(jīng)細胞細胞存活率［5］；FZS治療AD患者可改善認知功能，提高生活能力，PET證實增加患者腦內(nèi)糖代謝［6－7］。但FZS對Tau蛋白磷酸化的作用尚不清楚。本研究運用凝聚態(tài)Aβ25－35建立皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化的細胞模型，探討FZS能否通過calpain-CDK5通路抑制Tau蛋白過度磷酸化，為FZS治療AD提供更新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 新生24 h內(nèi)Wistar大鼠（清潔級），由山東大學動物中心提供。

1.2 試劑 FZS中藥合劑由哈爾濱醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院神經(jīng)科王德生教授組方，由人參、當歸、黃芩、節(jié)菖蒲按比例（2∶1∶1∶1）組成，原料購自哈爾濱市藥材公司，加工為粉劑后文火煎制30 min，3 000 r·min－1離心10 min，吸取上清，留取上清過濾配成濃度為0.5 g·mL－1的貯存液，0.15 kPa壓力滅菌30 min，分裝，4℃保存2周或－20℃凍存。實驗中給藥劑量以水提液中所含生藥的量計算。胎牛血清購自杭州江濱生物技術有限公司。Neuro-basal培養(yǎng)基購Invitrogene公司。Aβ25－35淀粉樣肽片段購Sigma公司，多克隆抗體Tau（Ser396）、Tau （Ser202）、Tau（Thr231）、p35/25（C-19）、CDK5（C-8）購置Santa Cruz公司。Western blot化學發(fā)光檢測試劑盒購自KPL公司。

1.3 皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng) 在無菌條件下取出胎鼠，解剖分離大腦皮層，分散細胞，將神經(jīng)細胞以5 ×104每孔的密度接種于涂有左旋多聚賴氨酸的96孔板中，以2×105每孔的密度種植于24孔板中（孔板中放置12 mm的載玻片），細胞接種后，將孔板置于5％的CO2、37℃、飽和濕度培養(yǎng)箱中過夜，24 h后更換培養(yǎng)基，將種植液（Neurobasal培養(yǎng)基約88.5％，胎牛血清10％，谷氨酰胺儲備液1％，青鏈霉素儲備液0.5％）更換為飼養(yǎng)液（Neurobasal培養(yǎng)基約95.5％，N-21％，B-27 2％，谷氨酰胺儲備液1％，青鏈霉素儲備液0.5％）。以后每48 h半量換液一次。皮層神經(jīng)元在體外培養(yǎng)7 d后，應用FZS （20 mg·L－1）、Roscovitine（15 μmol·L－1）或Cal-peptin（20 μmol·L－1）預處理24 h，然后用20 μmol ·L－1Aβ作用24 h。

1.4 Western blot分析 將種植于24孔的神經(jīng)元進行各種干預后，吸盡培養(yǎng)基，PBS沖洗，冷胰酶裂解20 min，用細胞刮刀將細胞刮下，離心（2 000 r· min－15 min），吸上清液至EP管中，Bradford法進行蛋白定量。以10％SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，用半干電轉(zhuǎn)移法將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜，室溫下用封閉液封閉1 h后，將膜移入用封閉液稀釋的一抗Tau［pSer396］，Tau［pSer202］，Tau［pThr231］，p35多克隆抗體和Tau-5單克隆抗體（1∶10 000稀釋），4℃孵育過夜，辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗（1 ∶1 000稀釋）反應2 h，用化學發(fā)光法顯色，X線底片曝光，β-actin作為內(nèi)參照，凝膠圖像分析儀（Al-pha Imager 2200，美國安萊公司）計算點密度。實驗重復3次。

1.5 CDK5激酶活性測定 體外培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元經(jīng)各種干預后，吸盡培養(yǎng)基，裂解蛋白，取蛋白200 μg，用CDK5抗體10 μg，加入細胞溶解緩沖液中（50 mmol·L－1Tris-HCl，pH 7.4，80 mmol·L－1b-glycerophosphate，20 mmol·L－1EGTA，15 mmol· L－1MgCl2，and 1 mmol·L－1dithiothreitol），在4℃環(huán)境下孵育1 h。所產(chǎn)生的免疫復合物用Asephar-sose沉降法收集，收集到的免疫復合物用清洗緩沖液清洗，然后，將該免疫復合物用CDK5激酶緩沖液包括50 μmol·L－1ATP，1.25 μCi-γ32 ATP，和500 μmol·L－1histone H1作為底物在室溫下孵育20 min，最后用液體閃光計數(shù)器測定。

1.6 calpain活性測定 取蛋白20 μg放入96孔板中，每孔加入130 μmol·L－1calpain底物N-suc-ciny lleu-tyr-7-amido-4-methylcoumarin，在室溫下孵育30 min。N-succinyl-leu-tyr-7-amido-4-methylcoum-arin（calpain底物）本身是非熒光性的，其被calpain （Calpain）裂解后能發(fā)出熒光。應用酶標儀（550 Bio-Rad）檢測熒光，激發(fā)波長為360 nm，發(fā)射波長為480 nm，檢測數(shù)值間接反映calpain的活性。

2 結(jié)果

2.1 FZS抑制Aβ25－35導致的皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化 為探討FZS對皮層神經(jīng)元Tau蛋白磷酸化作用，應用能夠分別識別Ser396、Ser202、Thr231這3個位點的磷酸化抗體，Western blot檢測磷酸化Tau蛋白的表達情況。如Fig 1顯示，20 μmol·L－1Aβ25－35作用于皮層神經(jīng)元24 h，3個不同位點（Ser396、Ser202、Thr231）的Tau磷酸化均明顯增加。然而，應用20 mg·L－1FZS預處理皮層神經(jīng)元24 h明顯緩解Aβ25－35導致的Tau磷酸化作用。CDK5抑制（roscovitine）和calpain抑制劑（calpetin）也有類似的作用，緩解了Aβ25－35導致的Tau磷酸化。

Fig 1 FZS prevents Aβ25－35-induced Tau phosphorylation

2.2 FZS抑制Aβ25－35導致的CDK5激酶過度激活為了探討Aβ25－35和FZS對CDK5激酶活性的作用，治療組皮層神經(jīng)元應用20 mg·L－1FZS預處理24 h后，再應用20 μmol·L－1Aβ25－35作用24 h。CDK5激酶活性采用CDK5抗體、免疫沉淀法，應用液體閃爍計數(shù)儀檢測。和未處理組皮層神經(jīng)元比較，20 μmol·L－1Aβ25－35處理組神經(jīng)元CDK5激酶活性升高了近3倍；20 mg·L－1FZS治療則明顯抑制了Aβ25－35導致的CDK5激酶活性升高（P＜0.01），見Fig 2。由此可見，F(xiàn)ZS抑制了Aβ25－35導致的CDK5激酶過度激活，但對CDK5激酶本身的生理活性沒有影響。

Fig 2 FZS blocks Aβ25－35-induced CDK5 activation

2.3 FZS抑制Aβ25－35導致的p35向p25轉(zhuǎn)變p35是CDK5生理性的激活亞基，在calpain作用下，p35降解、轉(zhuǎn)變?yōu)閜25能使CDK5過度激活，從而導致神經(jīng)元變性、凋亡［3］。以往研究發(fā)現(xiàn)Aβ暴露能夠使皮層神經(jīng)元的p35轉(zhuǎn)變?yōu)閜25［8］。本研究為探討FZS及Aβ25－35對皮層神經(jīng)元p35或p25是否有影響，應用Western blot，p35/p25抗體檢測p35、p25蛋白表達情況。20 μmol·L－1Aβ25－35處理皮層神經(jīng)元24 h后，p35蛋白水平明顯降低，而p25蛋白水平明顯增高；20 mg·L－1FZS則抑制Aβ25－35導致的p35向p25轉(zhuǎn)變，見Fig 3。結(jié)合上述結(jié)果，可以推斷FZS對CDK5激酶活性的抑制可能是通過抑制Aβ25－35導致的p35向p25轉(zhuǎn)變而實現(xiàn)的。

Fig 3 FZS prevents Aβ25－35-induced conversion of p35 to p25

2.4 FZS抑制Aβ25－35導致的calpain激活 p35降解、轉(zhuǎn)變?yōu)閜25是由calpain激活介導的。因此，我們進一步探討了FZS和Aβ25－35對calpain活性的作用。經(jīng)過7 d成熟期的神經(jīng)元經(jīng)藥物干預后，裂解、提取細胞蛋白，calpain活性的活性應用酶標儀檢測。皮層神經(jīng)元經(jīng)20 μmol·L－1Aβ25－35處理24 h后，calpain活性明顯增高（P＜0.01），20 mg·L－1FZS預處理皮層神經(jīng)元24 h則明顯抑制Aβ25－35導致的calpain激活，見Fig 4。

3 討論

NFTs是AD的特征性病理改變之一，而NFTs的主要成分是過度磷酸化的微管相關tau蛋白。Tau蛋白磷酸化，可以引起微管崩解，軸漿運輸障礙，最終導致神經(jīng)元死亡［2］。在APP（淀粉樣前體蛋白）轉(zhuǎn)基因鼠的實驗中發(fā)現(xiàn)［9］，抑制內(nèi)源性Tau蛋白可以緩解Aβ引起的認知功能損害，因此，有學者認為，Aβ的神經(jīng)毒性是通過Tau蛋白磷酸化來實現(xiàn)的，Aβ引起的Tau蛋白磷酸化可能是AD的重要發(fā)病機制之一。

Fig 4 FZS prevents Aβ25－35-induced calpain activation

越來越大的研究證明，Aβ可以在多個AD發(fā)病相關的磷酸化位點導致Tau蛋白磷酸化。Tau蛋白的磷酸化位點很多，研究表明［10］Ser396、Ser202、Thr231這3個位點磷酸化可導致NFTs，中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性，被認為和AD的發(fā)病相關。和以往研究相似，20 μmol·L－1Aβ25－35作用于皮層神經(jīng)元24 h，明顯增加了這3個位點（Ser396、Ser202、Thr231）的Tau蛋白磷酸化。

CDK5是最重要的Tau蛋白激酶之一，其活性受神經(jīng)專一性的激活亞基p35調(diào)節(jié)。生理狀態(tài)下，CDK5在p35調(diào)節(jié)亞基的信號作用下錨定于膜上，在神經(jīng)元發(fā)育、遷移、神經(jīng)元存活中發(fā)揮重要作用［2，8］。Aβ暴露或各種應激損害，可導致神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣超載，從而激活calpain。calpain使p35裂解為p25片段，p25十分穩(wěn)定，不容易降解，為CDK5更穩(wěn)定的激活亞基，與CDK5結(jié)合導致CDK5持久過度激活［11］。過度激活的CDK5導致Tau蛋白過度磷酸化，從而引起微管崩解，損害軸漿運輸，導致神經(jīng)元凋亡。AD患者腦內(nèi)p25表達水平明顯增加，CDK5活性明顯升高［12］。在體外培養(yǎng)的神經(jīng)元中［13］，抑制CDK5或calpain活性均明顯緩解Aβ導致的Tau蛋白磷酸化及神經(jīng)元的凋亡，這與本研究結(jié)果是一致的，CDK5抑制劑Roscovitine（15 μmol ·L－1）和calpain制劑Calpeptin（20 μmol·L－1）均明顯抑制了Aβ25－35導致的Tau蛋白磷酸化。在動物試驗中也發(fā)現(xiàn)CDK5抑制劑緩解了Aβ導致的Tau蛋白磷酸化，提高了AD模型鼠的認知功能。p25轉(zhuǎn)基因鼠的大腦皮層中CDK5活性明顯升高，并出現(xiàn)Tau蛋白過度磷酸化，神經(jīng)原纖維纏結(jié)形成，神經(jīng)元的變性與凋亡，且伴隨明顯認知功能障礙［14］。

研究認為［11］，p25/CDK5導致了Tau蛋白過度磷酸化，因此抑制p35/CDK5向p25/CDK5轉(zhuǎn)變對緩解Tau蛋白過度磷酸化及AD的治療有重要意義。本研究顯示，F(xiàn)ZS能夠有效抑制Aβ25－35導致的calpain激活，從而緩解了p35向p25轉(zhuǎn)變，降低了CDK5激酶活性，從而減輕了Aβ25－35導致的皮層神經(jīng)元Tau蛋白過度磷酸化。calpain是鈣依賴性的蛋白激酶，細胞內(nèi)鈣超載是導致其活性過度增高的主要原因。在以往研究中［5］，應用PC12細胞體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)FZS能夠?qū)笰β1－42導致的細胞內(nèi)鈣超載，從而起到神經(jīng)保護作用。由此可見，抑制細胞內(nèi)鈣超載、鈣依賴性calpain過度激活，從而抑制p35 向p25轉(zhuǎn)變，緩解CDK5過度激活引起的Tau蛋白磷酸化，可能為FZS治療AD的有效機制之一。

FZS由人參、當歸、黃芩等中藥組成，其神經(jīng)保護作用的有效成分尚不完全清楚。人參是我國傳統(tǒng)藥物，具有增強記憶、益智延年、強身健體之功效。人參的主要有效成份是人參皂苷，包括Rb1、Rg1、Rg2等。人參皂苷Rgl還可通過抗氧化應激、抗神經(jīng)元凋亡、抑制興奮性氨基酸毒性、減少鈣內(nèi)流等發(fā)揮其對神經(jīng)元的保護作用［15］。近期，黃天文等［15］應用原代皮層神經(jīng)元培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rbl能夠抑制CDK5激酶活性，從而抑制Aβ白導致的Tau蛋白過度磷酸化，保護皮層神經(jīng)元。由此可見，人參皂苷可能為FZS神經(jīng)保護作用的有效成分之一。其它成分如當歸、黃芩是否也具有相似的神經(jīng)保護作用尚不清楚，在以后的研究中還需進一步探討。

（致謝：本文實驗是在山東省千佛山中心實驗室完成，特別感謝曹莉莉主任給予的實驗技術指導和幫助。）

［1］ 紀超男，胡馨月，郭遠新，等.米索前列醇對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的神經(jīng)保護作用［J］.中國藥理學通報，2015，31（3）：334－9.

［1］ Ji C N，Hu X Y，Guo Y X，et al.Protective effect of misoprostol on neurodegeneration in APP/PS1 transgenic mice［J］.Chin Phar-macol Bull，2015（3）：334－9.

［2］ Michaelis M L，Dobrowsky R T，Li G.Tau neurofibrillary pathol-ogy and microtubule stability［J］.J Mol Neurosci，2002，19（3）：289－93.

［3］ Sundaram J R，Poore C P，Sulaimee N H，et al.Specific inhibition of p25/Cdk5 activity by the Cdk5 inhibitory peptide reduces neu-rodegeneration in vivo［J］.J Neurosci，2013，33（1）：334－43.

［4］ 李緒領，王德生，孫曼霽，等.復智散（FZS）對Alzheimer｀s dis-ease（AD）模型小鼠治療作用的研究［J］.中國藥理學通報，2007，23（10）：421－4.

［4］ Li X L，Wang D S，Sun M Q，et al.Effect of Fuzhisan on Alzheim-ers disease model mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23 （10）：421－4.

［5］ 溫世榮，王德生，張景艷，等.復智散對SH＿SY5Y細胞生存狀態(tài)的影響［J］.哈爾濱醫(yī)科大學學報，2003，37（5）：383－5.

［5］ Wen S R，Wang D S，Zhang J Y，et al.Effect of Fuzhisan on the viability of SH-SY5Y cell［J］.J Harbin Med Univ，2003，37（5）：383－5.

［6］ 剛寶芝，王德生，王春麗，等.復智散治療老年性癡呆的臨床療效觀察［J］.中風與神經(jīng)疾病雜志，2005，22（4）：535－7.

［6］ Gang B Z，Wang D S，Wang C L，et al.The efficacy of Fuzhisan in patients with Alzheimer’s disease［J］.J Apoplexy Ner Dis，2005，22（4）：535－7.

［7］ Bi M，Tong S，Zhang Z.Changes in cerebral glucose metabolism in patients with mild-to-moderate Alzheimer’s disease：a pilot study with the Chinese herbal medicine fuzhisan［J］.Neurosci Lett，2011，501（1）：35－40.

［8］ Shukla V，Skuntz S，Pant H C.Deregulated Cdk5 activity is in-volved in inducing Alzheimer＇s disease［J］.Arch Med Res，2012，43（8）：655－62

［9］ Li SQ，Yu Y，Han J Z，et al.Deficiency of macrophage migration inhibitory factor attenuates tau hyperphosphorylation in mouse mod-els of Alzheimer＇s disease［J］.J Neuroinflammation，201，12（1）：177.

［10］Nikkel A L，Martino B，Markosyan S，et al.The novel calpain in-hibitor A－705253 prevents stress-induced tau hyperphosphoryla-tion in vitro and in vivo［J］.Neuropharmacology，2012，63（4）：606－12.

［11］Zhou J，Wang H，F(xiàn)eng Y，et al.Increased expression of cdk5/p25 in N2a cells leads to hyperphosphorylation and impaired axonal transport of neurofilament proteins［J］.Life Sci，2010，86（13－14）：532－7.

［12］Shi L L，Yang W N，Chen X L，et al.The protective effects of tan-shinone IIA on neurotoxicity induced by β-amyloid protein through calpain and the p35/Cdk5 pathway in primary cortical neurons ［J］.Neurochem Int，2012，61（2）：227－35.

［13］Town T，Zolton J，Shaffner R，et al.p35/Cdk5 pathway mediates soluble amyloid-beta peptide-induced tau phosphorylation in vitro ［J］.J Neurosci Res，2002，69（3）：362－72.

［14］Zhao H，Chang R，Che H，et al.Hyperphosphorylation of tau pro-tein by calpain regulation in retina of Alzheimer＇s disease transgen-ic mouse［J］.Neurosci Lett，2013，551：12－6.

［15］黃天文，陳曉春，張 靜，等.鈣蛋白酶－細胞周期依賴性蛋白激酶5通路參與β淀粉樣蛋白25－35誘導的tau蛋白過度磷酸化［J］.中華神經(jīng)科雜志，2006，39（7）：477－80.

［15］Huang T W，Chen X C，Zhang J，et al.Calpain-CDK5 pathway is involved in β-amyloid peptide25－35-induced tau hyperphosphory-lation［J］〗.Chin J Neurol，2006，39（7）：477－80.

Role of Fuzhisan in reducing Tau protein hyperphosphorylation in cortical neurons through a cyclin-dependent kinase 5 pathway

ZHANG Zhao-xu1，WANG De-sheng2
（1.Dept of Neurology，Qianfoshan Hospital of Shandong Province，Jinan 250000，China；2.Dept of Neurology，the First Affliated Hospital，Harbin Medical University，Harbin 150001，China）

Aim Fuzhisan（FZS），a Chinese herbal complex prescription that has been used for the treat-ment of AD for over 15 years，is known to enhance the cognitive ability in AD patients.In this study，to in-vestigate whether FZS reduces Aβ25－35-induced Tau protein hyperphosphorylation in neonatal rat cortical neurons by suppressing the cyclin-dependent kinase 5 （CDK5）pathway.Methods Neonatal Wistar rats born within 24 h were selected to separate and purify their cortical neurons for culture in vitro.After 7-day culture of cortical neurons in vitro，20 μmol·L－1Aβ25－35was used to act on them for 24 h.Medication groups were pretreated with FZS（20 mg·L－1），CDK5 inhibitor roscovitine（15 μmol·L－1）and cal-pain preparation calpeptin（20 μmol·L－1）for 24 h，followed by reaction with 20 μmol·L－1Aβ25－35for 24 h.Tau protein phosphorylation levels at Ser396，Ser202 and Thr231 and the protein level of CDK5 acti-vator proteins p25/p35 were assayed by Western blot.Fluorescence intensity was measured with a fluores- cence microplate reader to reflect calpain activity.CDK5 kinase activity was assayed by immunoprecipita-tion.Results After 20 μmol·L－1Aβ25－35acting on cortical neurons for 24h，there were increments in the following：Tau protein phosphorylation levels at Ser396，Ser202 and Thr231，CDK5 kinase activity，CDK5 activator protein p25 level，and calpain activity.In the 20 mg·L－1FZS treatment group，Aβ25－35was suppressed markedly，resulting in increments in Tau protein phosphorylation levels at Ser396，Ser202 and Thr231，suppression of CDK5 kinase activity and p25 protein level，and elevation in calpain activity.Both CDK5 inhibitor roscovitine and calpain preparation cal-peptin，as positive control drugs，also played a role in suppressing Tau protein hyperphosphorylation.Con-clusion FZS can suppress Aβ25－35-induced Tau pro-tein hyperphosphorylation in cortical neurons through the calpain/CDK5 pathway.

Alzheimer’s Disease；CDK5；Tau protein；Fuzhisan；calpain；p25

時間：2016－2－26 10：20 網(wǎng)絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160226.1020.048.html

10.3969/j.issn.1001－1978.2016.03.024

A

1001－1978（2016）03－0422－05

R-332；R282.71；R322.81；R329.28；R745.7；R977.3；R977.6

2015－11－04，

2015－12－21

國家自然科學基金資助項目（No 81303013）

張兆旭（1981－），男，博士，主治醫(yī)師，研究方向：老年性癡呆，E-mail：zhangzhaoxu33＠163.com