• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    煙草疫霉菌游動孢子接種劍麻方法研究

    2016-05-10 07:12:28趙艷龍詹儒林張燕梅何衍彪常金梅柳鳳楊玉梅周文釗中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所廣東湛江524091
    中國麻業(yè)科學(xué) 2016年1期
    關(guān)鍵詞:接種劍麻

    趙艷龍,詹儒林,張燕梅,何衍彪,常金梅,柳鳳,楊玉梅,周文釗(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所,廣東湛江524091)

    ?

    煙草疫霉菌游動孢子接種劍麻方法研究

    趙艷龍,詹儒林,張燕梅,何衍彪,常金梅,柳鳳,楊玉梅,周文釗*
    (中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所,廣東湛江524091)

    摘要:為更準(zhǔn)確鑒定劍麻對斑馬紋病的抗病性,以不同的培養(yǎng)方法對劍麻斑馬紋病病原菌-煙草疫霉菌產(chǎn)孢的效果進行了比較,并研究了游動孢子接種劍麻斑馬紋病的方法。試驗結(jié)果表明:菌絲塊-水培法產(chǎn)生孢子囊及游動孢子,速度最快,數(shù)量最多,且方法簡單,是最佳的培養(yǎng)方法;刺傷-棉花保濕法接種劍麻葉片,操作簡單方便,接種成功率高,是利用游動孢子接種劍麻斑馬紋病的最好方法。

    關(guān)鍵詞:煙草疫霉菌;游動孢子;接種;劍麻

    劍麻斑馬紋病是上世紀(jì)70年代開始在我國劍麻園發(fā)現(xiàn),給劍麻生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失[1],其病原菌主要是煙草疫霉菌( Phytophthora nicotianae van Breda de Haan),該菌通過產(chǎn)生厚垣孢子及卵孢子,可以土壤中存活多年,因此,斑馬紋病一直以來都是影響劍麻生產(chǎn)最嚴(yán)重的病害之一[2-4]。目前劍麻品種的斑馬紋病抗性鑒定常采用菌塊接種[5],該方法操作雖然比較簡單,但準(zhǔn)確性不夠高。游動孢子可以測定濃度,因而利用游動孢子接種,可明顯提高抗病性鑒定的精確性,本文對煙草疫霉菌游動孢子的產(chǎn)生和接種方法進行了系統(tǒng)的研究,為劍麻抗病性及生理小種精準(zhǔn)鑒定提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料

    1.1.1供試菌種

    2014年9月從廣東湛江農(nóng)墾東方紅農(nóng)場農(nóng)科所劍麻園里采集劍麻斑馬紋病典型病斑的葉片,分離的病原菌經(jīng)柯赫氏法則證實并經(jīng)鑒定為煙草疫霉菌后,純化并保存。該菌種編號為DFHJB1 -2014。

    1.1.2培養(yǎng)基制備

    10% V8培養(yǎng)基: 10 mL V8汁加去離子水90 mL,CaCO30.02 g,瓊脂2 g。

    1.1.3培養(yǎng)液制備

    ①土壤浸出液:取肥沃菜園表土500 g,加入去離子水500 mL,充分?jǐn)噭蚝箪o置數(shù)小時。土壤上清液用普通濾紙過濾后,再經(jīng)孔徑0.22 μm的濾膜過濾2次除菌。置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?

    ②土壤溶液:取肥沃菜園土50 g加自來水200 mL,攪拌均勻,靜置數(shù)小時。上清液用普通濾紙過濾,濾過液即為土壤溶液;

    ③10% V8培養(yǎng)液: 100 mL V8汁加入CaCO31 g,在1500轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘。上清液與去離子水按1: 9比例稀釋;

    ④皮氏液配方: Ca( NO3)20.4 g,KH2PO40.15 g,Mg( NO3)20.15 g,CaCl20.06 g,蒸餾水1000 mL。在121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘。

    1.2試驗方法

    1.2.1產(chǎn)生游動孢子試驗

    將DFHJB1-2014接種于10% V8培養(yǎng)基平板,置于28℃半光照(即12 h光照和12 h黑暗交替)培養(yǎng),4 d后用4 mm打孔器在菌絲邊緣打下菌餅,參照鄭小波[6]的方法,略作改動,分別按如下方法進行處理:

    1)菌絲叢-水培法

    將10% V8培養(yǎng)液倒入6 cm的培養(yǎng)皿中,每皿5 mL,取菌餅4塊移入培養(yǎng)皿,在28℃、黑暗條件下培養(yǎng)1 d,傾去培養(yǎng)液,加入5 mL滅菌水重新懸浮菌絲叢,每皿滴加經(jīng)過濾除菌的土壤浸出液3滴,置于28℃、黑暗條件下培養(yǎng),24 h后換一次水并滴加土壤浸出液。

    2)菌絲塊-水培法

    在直徑為6 cm的培養(yǎng)皿中加入5 mL滅菌水,取菌餅4塊置于滅菌水中,菌絲面朝上,讓滅菌水剛剛淹過菌絲面。置日光燈下連續(xù)光照培養(yǎng),培養(yǎng)溫度28℃。

    3)皮氏培養(yǎng)液法

    將菌餅4塊移入裝有5 mL皮氏溶液的培養(yǎng)皿中,在28℃黑暗條件下培養(yǎng)3~4 d,傾去皮氏溶液,換上滅菌水,置于28℃培養(yǎng)。

    4)菌絲塊-土壤溶液法

    在直徑為6 cm的培養(yǎng)皿中加入5 mL土壤溶液,取菌餅4塊置于土壤溶液中,菌絲面朝上,使土壤溶液剛剛漫過菌絲塊。置光照下28℃培養(yǎng)。

    以上各處理1 d、2 d、3 d和6 d后分別觀察孢子囊和游動孢子的產(chǎn)生情況,每處理重復(fù)3次,每重復(fù)2個培養(yǎng)皿。孢子囊和游動孢子的觀察測定分別按照陳方新[7]的方法,并使用血球計數(shù)板對游動孢子進行計數(shù)。

    1.2.2接種方法試驗

    1.2.2.1接種材料準(zhǔn)備

    以盆栽法培育劍麻苗至20片葉片時,割取下部無病蟲害、無損傷的葉片,每株3片,共割取42片作接種材料。

    1.2.2.2接種體準(zhǔn)備

    用菌絲塊水培法培養(yǎng),在倒置顯微鏡下觀察,產(chǎn)生大量游動孢子后,吸取孢子懸浮液,用血球計數(shù)板計數(shù)并配制成濃度為1×104個/mL的孢子懸浮液,作接種體。

    1.2.2.3接種方法

    1)刺傷-棉花保濕法: 75%酒精消毒后,6根大頭針刺傷葉片表面,用移液槍滴50 μL游動孢子懸浮液于傷口上,棉花保濕,置于28℃條件下培養(yǎng)。

    2)刺傷-磁盤保濕法: 75%酒精消毒后,6根大頭針刺傷葉片表面,用移液槍滴50 μL游動孢子懸浮液于傷口上,小心放入磁盤中密封保濕,置于28℃條件下培養(yǎng)。

    3)刺傷接種法: 75%酒精消毒后,6根大頭針刺傷葉片表面,用移液槍滴50 μL游動孢子懸浮液于傷口上,小心放入磁盤中密封,置于28℃條件下培養(yǎng)。

    4)注射-棉花保濕法: 75%酒精消毒后,用微量進樣器注射10 μL游動孢子懸浮液,棉花保濕,置于28℃條件下培養(yǎng)。

    5)注射-磁盤保濕法: 75%酒精消毒后,用微量進樣器注射10 μL游動孢子懸浮液,小心放入磁盤中密封保濕,置于28℃條件下培養(yǎng)。

    6)注射接種法: 75%酒精消毒后,用微量進樣器注射10 μL游動孢子懸浮液,小心放入磁盤中密封,置于28℃條件下培養(yǎng)。

    每片葉片在上、中、下各接一個點。每方法接種2張葉片,3次重復(fù)。

    7)噴霧法: 75%酒精消毒后,將游動孢子懸浮液噴霧至整個葉片表面上,小心放入磁盤中密封保濕,置于28℃條件下培養(yǎng)。該方法接種2片葉片,3次重復(fù)。

    1.2.2.4發(fā)病情況觀察

    接種后6 d,觀察、記錄各接種方法接種點是否發(fā)病,并計算發(fā)病率。

    2 結(jié)果與分析

    2.1游動孢子產(chǎn)生試驗結(jié)果

    通過鏡檢,煙草疫霉菌產(chǎn)生的孢子囊成熟以后,即逐漸釋放游動孢子(圖1)。

    圖1 煙草疫霉菌游動孢子及其釋放Fig.1  Zoosproes of phytophthora nicotianae and its realease

    不同培養(yǎng)方法產(chǎn)生的孢子囊及游動孢子結(jié)果見表1:

    表1 不同培養(yǎng)方法對產(chǎn)孢的影響Tab.1  The influence of different cultivation methods on the spore production

    從表1可見:菌絲塊水培法產(chǎn)孢最快最多,1 d后孢子囊濃度即達到2.28×103個/mL,且孢子囊釋放產(chǎn)生大量游動孢子(濃度為26.08×103個/mL),2 d后孢子囊濃度1.75×103個/mL,伴隨著較多的游動孢子(濃度為8.87×103個/mL),說明其一邊繼續(xù)產(chǎn)生孢子囊,一邊釋放游動孢子,3 d后孢子囊還有0.60×103個/mL,游動孢子濃度為3.05×103個/mL,6 d后既沒有孢子囊,也沒有游動孢子,說明前幾天產(chǎn)生的孢子囊已全部釋放完;其次是菌絲塊-土壤溶液法,1 d后孢子囊濃度達到1.27×103個/mL,2 d后為0.82×103個/mL,3 d后為0.85×103個/mL,1 d后產(chǎn)生大量游動孢子(濃度為16.17×103個/mL),2 d、3 d后還有較多的游動孢子,說明該培養(yǎng)方法產(chǎn)孢和釋放游動孢子速度都要慢些,但6 d后也已釋放完畢;皮氏培養(yǎng)液法1 d后孢子囊濃度達0.58×103個/ mL,釋放的游動孢子較前2種方法少(濃度為3.23×103個/mL),3 d后孢子囊比較少,為0.34× 103個/mL,但6 d后又產(chǎn)生大量孢子囊(濃度達2.61×103個/mL)和游動孢子(濃度20.12×103個/mL),說明該培養(yǎng)方法在經(jīng)過一段速度較慢的產(chǎn)孢過程后,其營養(yǎng)供應(yīng)時間長,致6 d后仍能產(chǎn)生孢子囊及游動孢子;菌絲叢水培法最慢,到6 d后才產(chǎn)生孢子囊和少量游動孢子,是因為前幾天一直在長菌絲,孢子囊剛剛開始釋放。

    綜合上述結(jié)果,用菌絲塊水培法產(chǎn)生孢子囊及游動孢子,速度最快,數(shù)量最多,且方法簡單,它不需要其它培養(yǎng)液,也不需要復(fù)雜的操作;菌絲塊土壤溶液法,產(chǎn)孢子囊速度快,數(shù)量也較多,游動孢子釋放多,持續(xù)時間長,但需要加其它培養(yǎng)液,且操作較復(fù)雜;皮氏培養(yǎng)液法,產(chǎn)生孢子囊速度快,但數(shù)量較少,游動孢子數(shù)少;而菌絲叢水培法,可以產(chǎn)生孢子囊及游動孢子,但速度太慢,因此,菌絲塊水培法是最佳的培養(yǎng)方法。

    2.2接種方法試驗結(jié)果

    各接種方法的發(fā)病情況及發(fā)病率見表2:

    表2 不同接種方法對劍麻葉片發(fā)病情況的影響Tab.2  Effects of different inoculation methods on disease development of sisal leaves

    從表2可見:刺傷-棉花保濕法接種的成功率最高,發(fā)病率為100%,注射-棉花保濕法成功率次之,其發(fā)病率為77.8%,刺傷-磁盤保濕法、刺傷接種法、注射-磁盤保濕法和注射接種法成功率稍低,其發(fā)病率為72.2%,而噴霧法接種不成功,發(fā)病率為0。因此刺傷-棉花保濕法是最好的接種方法。

    3 討論和結(jié)論

    3.1關(guān)于孢子囊的產(chǎn)生和游動孢子的釋放

    國內(nèi)外對于產(chǎn)孢方法有不少研究[6-14],王萬能[8]挑取菌絲在0.1% KNO3培養(yǎng),6 d后產(chǎn)生孢子囊和游動孢子;徐敬友[9]挑取菌絲塊于皮氏液培養(yǎng),誘發(fā)產(chǎn)生孢子囊;鄭小波[6]、沈會芳[10]、楊建卿[11]、朱賢朝[12]、王智發(fā)[13]等將產(chǎn)生大量成熟的孢子囊利用低溫刺激,孢子囊即釋放游動孢子,但都要培養(yǎng)較長時間,使其產(chǎn)生成熟的孢子囊才能產(chǎn)生游動孢子,本試驗篩選出菌絲塊水培法,即將該菌在10% V8平板培養(yǎng)4 d,再以滅菌水浸泡從平板挑取的菌塊,光照培養(yǎng)1 d即可產(chǎn)生大量游動孢子囊并釋放大量游動孢子。本方法操作簡單,不需要低溫刺激,從培養(yǎng)到產(chǎn)孢所需時間短,游動孢子產(chǎn)生快而多,是一種較為簡便快捷的方法。

    3.2關(guān)于游動孢子接種劍麻的方法

    不同的接種方法,接種效果有明顯差別,分析其原因是:首先,斑馬紋病菌無法通過蠟質(zhì)層進入氣孔,自然孔口無法發(fā)病,只有對葉片造成傷口,才可能使其直接進入葉片組織導(dǎo)致發(fā)病,因此,噴霧法接種不成功,而刺傷和注射接種可以成功;但造成傷口后也不一定就能發(fā)病,還必須具備一定的環(huán)境條件,溫度和濕度,斑馬紋病要求的濕度更高,因此,雖然都是刺傷接種,但棉花保濕接種法比磁盤保濕和刺傷接種法的發(fā)病率都高;另外,注射后進行接種,由于注射的深度不一致,假如造成的傷口太大,損壞了葉片組織,也有可能造成病菌無法感染,因此,盡管都用棉花保濕,刺傷接種的成功率比注射接種的成功率也要高。

    利用游動孢子接種,前人以煙草和菠蘿為對象做過許多研究[8,10,12-13],對于劍麻斑馬紋病的接種,前人都是用菌絲塊作為接種體[5,15],而利用游動孢子作為接種體接種劍麻卻未見報道,本試驗嘗試多種方法,最后確定刺傷接種棉花保濕法為最佳的方法。此方法可以更加準(zhǔn)確的接種斑馬紋病,為生理小種鑒定和抗性鑒定提供依據(jù)。

    本文利用劍麻離體葉片進行游動孢子接種,存在一定局限性,下一步將繼續(xù)試驗,進一步補充和完善劍麻活體葉片組織接種方法。

    參考文獻:

    [1]李道和.劍麻栽培[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998.

    [2]裴超群,陶玉蘭.劍麻斑馬紋病重病區(qū)補植的新品種—雜種76416號[J].廣西熱作科技,1992( 1) : 29-33.

    [3]李蓮英.五星農(nóng)場更新劍麻園斑馬紋病調(diào)查分析[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2003( 5) : 47-48.

    [4]謝紅輝,黃兌武,韋艷明,等.廣西劍麻病蟲害發(fā)生現(xiàn)狀及防治對策[J].中國熱帶農(nóng)業(yè),2012( 5) : 47-49.

    [5]NY/T 1942-2010,龍舌蘭麻抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程[S].2010.

    [6]鄭小波.疫霉菌及其研究技術(shù)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997: 86.

    [7]陳方新,齊永霞,高智謀,等.誘導(dǎo)疫霉菌產(chǎn)生游動孢子囊液體培養(yǎng)基的研制[J].植物保護,2005,31( 2) : 34-37.

    [8]王萬能,全學(xué)軍,肖崇剛.煙草疫霉菌的產(chǎn)孢和接種方法研究[J].植物保護學(xué)報,2005,32( 1) : 18-21.

    [9]徐敬友,陸家云,方中達.洋槐上疫霉種的研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1990,13( 4) : 17-23.

    [10]沈會芳,林壁潤,蒲小明,等.應(yīng)用離體葉片法鑒定菠蘿資源心腐病抗性[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014( 7) : 80-82,87.

    [11]楊建卿,江彤,陳學(xué)平.煙草疫霉菌的培養(yǎng)及大量產(chǎn)生游動孢子囊及游動孢子方法研究[J].植物保護學(xué)報,2001,27( 4) : 12-14.

    [12]朱賢朝,郭振業(yè),劉保安,等.我國煙草黑脛病菌生理小種研究初報[J].中國煙草科學(xué),1987( 4) : 1-4.

    [13]王智發(fā),劉延榮,謝成頌,等.我國煙草黑脛病菌生理小種鑒定[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),1987,18( 1) : 1-8.

    [14]Shen H D.Response of Phytophthora parasitica var.nicotianae to metalaxyl exposure[J].Plant Digest,1984( 4) : 559-562.

    [15]陳河龍,郭朝銘,劉巧蓮,等.龍舌蘭麻種質(zhì)資源抗斑馬紋病鑒定研究[J].植物遺傳資源學(xué)報,2011,12( 4) : 546-550.

    Study on Inoculation Methods with Zoospore of Phytophthora nicotianae Breda on Sisal

    ZHAO Yanlong,ZHAN Rulin,ZHANG Yanmei,HE Yanbiao,CHANG Jinmei,LIU Feng,YANG Yumei,ZHOU Wenzhao*
    ( South Subtropical Crops Research Institute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Zhanjiang 524091,Guangdong,China)

    Abstract:In order to identify accurately the resistance to zebra disease of sisal,the effects of sporulation for Phytophthora nicotianae Breda by different culture method were compared,and the inoculation methods with zoospore were studied.Results showed that the method of Mycelia-h(huán)ydroponics was the best culture method for the simplest operation,together with the most production of sporangium and zoospore and the fastest sporulation rate.And wound inoculation-cotton mistrue retention was the best method of inoculation with zoospore of Phytophthora nicotianae Breda for the simple and convenient operation,and the highest successful rate of inoculation

    Key words:Phytophthora nicotianae Breda;zoospore;inoculation;sisal

    *通訊作者:周文釗( 1965-),男,研究員,主要從事劍麻育種研究。E-mail: zwenzhao@163.com。

    作者簡介:趙艷龍( 1968-),男,高級農(nóng)藝師,主要從事熱帶作物病蟲害綜合防治。E-mail: zylyym@163.com。

    基金項目:現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系( CARS-19-E03) ;國家自然科學(xué)基金( No:31401427)

    收稿日期:2015-11-19

    文章編號:1671-3532( 2016) 01-0019-05

    中圖分類號:S563.8

    文獻標(biāo)識碼:A

    猜你喜歡
    接種劍麻
    劍麻原纖生物脫膠工藝研究
    劍麻葉片的加工方法及其設(shè)備研制
    6月劍麻市場監(jiān)測分析
    讓劍麻回到劍麻,讓花回到花
    狂犬疫苗接種后不良反應(yīng)58例觀察與護理探析
    接種水痘減毒活疫苗對預(yù)防控制水痘的影響研究
    豬場免疫程序的設(shè)計與接種注意事項
    一類帶有預(yù)防接種的禽流感模型分析
    科技視界(2015年33期)2015-12-02 10:10:51
    劍麻纖維增強聚乳酸復(fù)合材料酶降解研究
    中國塑料(2015年5期)2015-10-14 00:59:54
    分析精細(xì)化護理對兒童預(yù)防接種效果的影響
    天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产高清国产精品国产三级| 精品人妻熟女av久视频| 中文字幕久久专区| 免费观看在线日韩| 国产一区二区三区av在线| 日韩伦理黄色片| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲自偷自拍三级| 欧美少妇被猛烈插入视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 免费观看无遮挡的男女| 国产精品久久久久成人av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产美女午夜福利| 国产成人aa在线观看| 一级av片app| 日本欧美视频一区| av福利片在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲av成人精品一区久久| .国产精品久久| 少妇丰满av| 久久99热这里只频精品6学生| 韩国av在线不卡| 久久这里有精品视频免费| 制服丝袜香蕉在线| 免费av中文字幕在线| 国产精品熟女久久久久浪| 国产色爽女视频免费观看| av天堂中文字幕网| 国产成人91sexporn| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 美女视频免费永久观看网站| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲国产av新网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 97在线人人人人妻| 插逼视频在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 97精品久久久久久久久久精品| h视频一区二区三区| 男女免费视频国产| 亚洲内射少妇av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲电影在线观看av| 美女国产视频在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| tube8黄色片| 国产熟女欧美一区二区| 99热网站在线观看| 一本大道久久a久久精品| 91成人精品电影| 精品国产露脸久久av麻豆| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一区二区三区免费毛片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美日韩综合久久久久久| 日本wwww免费看| 国产精品久久久久久av不卡| 观看免费一级毛片| 美女大奶头黄色视频| 男女边吃奶边做爰视频| 99热6这里只有精品| 在线播放无遮挡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产视频首页在线观看| 香蕉精品网在线| 国产在线视频一区二区| 亚洲国产av新网站| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美97在线视频| 日韩欧美 国产精品| 日韩中文字幕视频在线看片| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美人与善性xxx| 亚洲熟女精品中文字幕| 99久久综合免费| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久女婷五月综合色啪小说| 大片电影免费在线观看免费| 国产 精品1| 国产午夜精品一二区理论片| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久青草综合色| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产成人精品福利久久| 最近最新中文字幕免费大全7| 美女cb高潮喷水在线观看| 91成人精品电影| 日本黄大片高清| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 黄色欧美视频在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 青春草亚洲视频在线观看| 免费黄色在线免费观看| 亚洲性久久影院| 日韩中字成人| 在现免费观看毛片| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲av中文av极速乱| 丰满迷人的少妇在线观看| 日本黄色片子视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 丰满迷人的少妇在线观看| 一级av片app| 五月开心婷婷网| 精品一区二区免费观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 女性被躁到高潮视频| 精品一品国产午夜福利视频| 在线观看av片永久免费下载| 嫩草影院新地址| 内地一区二区视频在线| 高清黄色对白视频在线免费看 | 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲av男天堂| 少妇 在线观看| 欧美+日韩+精品| 国产一区二区在线观看日韩| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 成人国产麻豆网| 美女cb高潮喷水在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 男人舔奶头视频| 天美传媒精品一区二区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 午夜福利,免费看| 久久国产乱子免费精品| 最近手机中文字幕大全| 国产伦理片在线播放av一区| 一本色道久久久久久精品综合| 简卡轻食公司| 伦理电影大哥的女人| 色吧在线观看| 国产精品一二三区在线看| 九草在线视频观看| 久久久久久伊人网av| 99久久精品国产国产毛片| 午夜免费观看性视频| 街头女战士在线观看网站| 日日摸夜夜添夜夜爱| 老女人水多毛片| 91久久精品电影网| 黄色怎么调成土黄色| 老熟女久久久| 久久久午夜欧美精品| 国产黄片视频在线免费观看| 中文字幕久久专区| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美日韩av久久| 伦精品一区二区三区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久久国产精品麻豆| 亚洲国产欧美在线一区| 如何舔出高潮| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 内地一区二区视频在线| 伊人亚洲综合成人网| 黄色怎么调成土黄色| 高清在线视频一区二区三区| 精品人妻偷拍中文字幕| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美一级a爱片免费观看看| freevideosex欧美| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产成人午夜福利电影在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲精品第二区| 免费大片黄手机在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 三上悠亚av全集在线观看 | 国产日韩欧美视频二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日韩强制内射视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| av在线观看视频网站免费| 久久午夜福利片| 精品视频人人做人人爽| 少妇被粗大猛烈的视频| a 毛片基地| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 一级片'在线观看视频| 亚洲成人一二三区av| 日本免费在线观看一区| 久久 成人 亚洲| 美女中出高潮动态图| 哪个播放器可以免费观看大片| 99久久精品国产国产毛片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产亚洲91精品色在线| 九九爱精品视频在线观看| 永久免费av网站大全| 国精品久久久久久国模美| 成人综合一区亚洲| 国产熟女午夜一区二区三区 | 夜夜爽夜夜爽视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲人与动物交配视频| 欧美xxⅹ黑人| 一区二区三区免费毛片| 十八禁网站网址无遮挡 | 熟女av电影| 女人精品久久久久毛片| 韩国av在线不卡| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 欧美高清成人免费视频www| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲av综合色区一区| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美日本中文国产一区发布| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品视频女| 一区二区三区免费毛片| 国产欧美亚洲国产| 久久综合国产亚洲精品| 久久这里有精品视频免费| 亚洲国产av新网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日日啪夜夜撸| 国产精品一区www在线观看| 成人免费观看视频高清| 日本av手机在线免费观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产成人免费观看mmmm| 中文字幕亚洲精品专区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 妹子高潮喷水视频| 亚洲精品自拍成人| 久久久久精品性色| av.在线天堂| 黄色怎么调成土黄色| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久精品国产自在天天线| 国产精品99久久99久久久不卡 | 精品久久久久久电影网| 亚洲综合精品二区| 欧美另类一区| 五月天丁香电影| 人妻 亚洲 视频| 亚洲av国产av综合av卡| 色视频在线一区二区三区| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美日本中文国产一区发布| 最新中文字幕久久久久| 成人无遮挡网站| 黑人高潮一二区| 在现免费观看毛片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美日韩在线观看h| 青青草视频在线视频观看| 中文字幕制服av| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩av免费高清视频| 久久人人爽人人片av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲伊人久久精品综合| 国产 精品1| 伦精品一区二区三区| 美女主播在线视频| 日韩欧美精品免费久久| 久久久久国产网址| 免费大片18禁| 国产毛片在线视频| 日韩av免费高清视频| av黄色大香蕉| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美 日韩 精品 国产| 久久久午夜欧美精品| 老司机影院成人| 色网站视频免费| 国产高清有码在线观看视频| 国产毛片在线视频| 多毛熟女@视频| 99热这里只有是精品50| 色吧在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产一区二区三区综合在线观看 | 五月玫瑰六月丁香| 国产色爽女视频免费观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 久久国产乱子免费精品| 91精品国产九色| 免费高清在线观看视频在线观看| 少妇熟女欧美另类| 2022亚洲国产成人精品| 国产精品一区www在线观看| av.在线天堂| 99九九在线精品视频 | 五月天丁香电影| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲va在线va天堂va国产| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲色图综合在线观看| 熟女av电影| 97在线视频观看| 男人添女人高潮全过程视频| 2018国产大陆天天弄谢| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 十分钟在线观看高清视频www | 黄片无遮挡物在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费观看av网站的网址| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 黄色配什么色好看| av国产精品久久久久影院| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 99热国产这里只有精品6| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲av国产av综合av卡| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 伊人亚洲综合成人网| 老司机影院成人| 成年美女黄网站色视频大全免费 | av在线老鸭窝| av又黄又爽大尺度在线免费看| 伊人久久国产一区二区| 亚洲国产精品专区欧美| 伊人久久国产一区二区| 中国三级夫妇交换| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲国产精品专区欧美| 老女人水多毛片| 久久久久久伊人网av| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产精品无大码| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 午夜日本视频在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲,欧美,日韩| 久久久久人妻精品一区果冻| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 色视频在线一区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 午夜视频国产福利| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲国产精品一区三区| 99国产精品免费福利视频| 人人澡人人妻人| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 黄色怎么调成土黄色| 十八禁网站网址无遮挡 | 天堂中文最新版在线下载| 免费观看的影片在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 国产精品久久久久成人av| 欧美三级亚洲精品| 简卡轻食公司| 国产极品天堂在线| 妹子高潮喷水视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久精品国产亚洲网站| 成人黄色视频免费在线看| 欧美 日韩 精品 国产| 看非洲黑人一级黄片| 久久久久久久国产电影| 久久久久久伊人网av| 在线观看人妻少妇| 日韩av免费高清视频| 99久久精品一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 国产毛片在线视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品少妇内射三级| 久久人妻熟女aⅴ| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩人妻高清精品专区| 性色av一级| 亚洲熟女精品中文字幕| av线在线观看网站| 亚州av有码| 欧美一级a爱片免费观看看| 一边亲一边摸免费视频| 国产午夜精品一二区理论片| 青青草视频在线视频观看| 久久鲁丝午夜福利片| 日日爽夜夜爽网站| 欧美日韩综合久久久久久| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 又大又黄又爽视频免费| 97在线人人人人妻| 久久久国产一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久影院123| 麻豆成人av视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲中文av在线| av国产久精品久网站免费入址| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产乱来视频区| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品国产av在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 国产免费视频播放在线视频| 欧美三级亚洲精品| 97精品久久久久久久久久精品| 国产精品福利在线免费观看| 高清毛片免费看| 成人国产av品久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国产 一区精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日本vs欧美在线观看视频 | 天堂8中文在线网| 成年人免费黄色播放视频 | 久久久久国产网址| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久人人爽人人片av| av免费观看日本| 久久99一区二区三区| 我要看黄色一级片免费的| av网站免费在线观看视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 五月伊人婷婷丁香| 免费黄频网站在线观看国产| 多毛熟女@视频| 国产精品99久久久久久久久| 好男人视频免费观看在线| 久久人妻熟女aⅴ| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产乱人偷精品视频| 五月玫瑰六月丁香| 久久av网站| 久久 成人 亚洲| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产美女午夜福利| 国产一区二区在线观看日韩| 国产成人精品一,二区| 国产亚洲最大av| 伊人久久精品亚洲午夜| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品久久久久久久久免| 十分钟在线观看高清视频www | 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 97超碰精品成人国产| 免费观看性生交大片5| 成人亚洲欧美一区二区av| 五月天丁香电影| 一区二区三区精品91| 亚洲人成网站在线播| 五月玫瑰六月丁香| 人妻一区二区av| 久久午夜福利片| 成人毛片a级毛片在线播放| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 日韩电影二区| 日本av手机在线免费观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 狂野欧美激情性bbbbbb| 99热国产这里只有精品6| 国产日韩欧美在线精品| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 免费av不卡在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 美女主播在线视频| 成人综合一区亚洲| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美三级亚洲精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品久久久久久av不卡| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品久久久久久久久免| 在线观看三级黄色| 欧美人与善性xxx| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 丝瓜视频免费看黄片| 一级a做视频免费观看| 国产探花极品一区二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| av黄色大香蕉| 久久影院123| 色网站视频免费| 在线免费观看不下载黄p国产| 看非洲黑人一级黄片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 校园人妻丝袜中文字幕| 制服丝袜香蕉在线| 香蕉精品网在线| 777米奇影视久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一本久久精品| 黄片无遮挡物在线观看| 99热这里只有是精品50| 亚洲精品久久午夜乱码| 人妻夜夜爽99麻豆av| 如何舔出高潮| 少妇的逼好多水| 九草在线视频观看| 国产 精品1| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 秋霞伦理黄片| 六月丁香七月| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产精品国产精品| 日韩强制内射视频| 九九在线视频观看精品| 丰满饥渴人妻一区二区三| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲国产精品999| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美精品一区二区免费开放| 国产成人精品一,二区| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 特大巨黑吊av在线直播| 精品久久国产蜜桃| 成人免费观看视频高清| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 七月丁香在线播放| 高清视频免费观看一区二区| 国内精品宾馆在线| 美女主播在线视频| 人妻 亚洲 视频| 好男人视频免费观看在线| 日日啪夜夜撸| 少妇精品久久久久久久| 观看美女的网站| 在线看a的网站| 久热久热在线精品观看| 高清av免费在线| 看十八女毛片水多多多| 一级黄片播放器| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲在久久综合| av女优亚洲男人天堂| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品人妻久久久久久| 国产在视频线精品| 亚洲欧美精品专区久久| 99热这里只有是精品50| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品视频女| 老女人水多毛片| 日本爱情动作片www.在线观看| 91久久精品电影网| 亚洲国产精品国产精品| 国产综合精华液| 国产免费福利视频在线观看| 中文字幕免费在线视频6| 国产亚洲最大av| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品久久久久久精品古装| 国产男人的电影天堂91| 看十八女毛片水多多多| 国产视频内射| 午夜激情久久久久久久| 国产精品一区二区在线观看99| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产男人的电影天堂91| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 777米奇影视久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品一区www在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 精品亚洲成国产av| 少妇的逼好多水| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品国产av成人精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 18禁动态无遮挡网站| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久亚洲国产成人精品v| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲欧美精品自产自拍| 免费在线观看成人毛片| 日韩中字成人| 亚洲av成人精品一区久久| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲av二区三区四区| 女性被躁到高潮视频|