電針對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)血管生成相關(guān)蛋白的表達(dá)影響

于淼　張丹妹　鄔繼紅　圖婭　史榕荇　許明敏　郭郁　張旭輝　王瑜　張春濤　趙冰驄

100029　北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院[于淼(碩士研究生)、鄔繼紅、圖婭、許明敏(碩士研究生)、郭郁(碩士研究生)、張旭輝(博士研究生)、王瑜(博士研究生)、張春濤(碩士研究生)、趙冰驄(碩士研究生)]；鄭州大學(xué)附屬洛陽(yáng)中心醫(yī)院康復(fù)科(張丹妹)；中日友好醫(yī)院針灸科(史榕荇)

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·論著·

電針對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)血管生成相關(guān)蛋白的表達(dá)影響

于淼張丹妹鄔繼紅圖婭史榕荇許明敏郭郁張旭輝王瑜張春濤趙冰驄

100029北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院[于淼(碩士研究生)、鄔繼紅、圖婭、許明敏(碩士研究生)、郭郁(碩士研究生)、張旭輝(博士研究生)、王瑜(博士研究生)、張春濤(碩士研究生)、趙冰驄(碩士研究生)]；鄭州大學(xué)附屬洛陽(yáng)中心醫(yī)院康復(fù)科(張丹妹)；中日友好醫(yī)院針灸科(史榕荇)

【摘要】目的觀察電針對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)、基質(zhì)金屬蛋白酶8(matrix metalloproteinase-8， MMP-8)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13，MMP-13)表達(dá)的影響，探討在慢性應(yīng)激下電針對(duì)抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)血管的保護(hù)效應(yīng)。方法將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、電針組、氟西汀組，每組10只。除空白組外，其余組均采用慢性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)方法造模28天，電針組和氟西汀組分別于造模前1小時(shí)進(jìn)行電針干預(yù)和藥物治療。運(yùn)用生物素標(biāo)記蛋白抗體芯片技術(shù)，篩選出差異蛋白VEGF、VEGF-C、MMP-8和MMP-13。結(jié)果與空白組比較，模型組大鼠海馬VEGF、VEGF-C、MMP-8、MMP-13蛋白表達(dá)上升(fold change=1.20，1.34，1.25，1.31)。與模型組比較， 電針組與氟西汀組：VEGF蛋白表達(dá)水平下降(fold change=0.73，0.70)；VEGF-C蛋白表達(dá)水平下降(fold change=0.66，0.59)，MMP-8表達(dá)水平下降(fold change=0.70，0.58)，MMP-13表達(dá)水平下降(fold change=0.74，0.63)。結(jié)論電針能夠減輕慢性應(yīng)激對(duì)大鼠海馬的影響，對(duì)神經(jīng)和血管具有保護(hù)作用，這可能是電針抗抑郁作用的分子機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】電針；抑郁癥；海馬；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；基質(zhì)金屬蛋白酶

抑郁癥又稱情感性精神障礙，是一種由生物、心理、社會(huì)以及遺傳等多種原因?qū)е碌某Ｒ?jiàn)的精神疾病，其慢性、易復(fù)發(fā)、高致殘致死率的特點(diǎn)給個(gè)人和社會(huì)都造成了顯著的影響[1]，因此加強(qiáng)對(duì)抑郁癥的研究和治療具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

現(xiàn)如今治療抑郁癥臨床以藥物治療為主，但不同程度毒副作用和禁忌癥的缺陷嚴(yán)重制約了抑郁癥的治療效果。而大量臨床研究表明，電針能明顯改善抑郁癥患者的軀體癥狀，減輕藥物的不良反應(yīng)，其療效肯定，經(jīng)濟(jì)方便等特點(diǎn)受到人們的認(rèn)可[2]，由于針刺抗抑郁機(jī)制較為復(fù)雜且尚不明確，從而引發(fā)對(duì)針刺抗抑郁機(jī)制研究的必要性。

抑郁癥的發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，其發(fā)生發(fā)展涉及機(jī)體神經(jīng)免疫內(nèi)分泌等多個(gè)環(huán)節(jié)，既有基因的改變，也存在著蛋白的變化，而這兩者反映著生命機(jī)體的整體功能狀態(tài)。運(yùn)用生物芯片技術(shù)從基因和蛋白等微觀角度觀察研究抑郁狀態(tài)下的整體失衡，這為開(kāi)展針刺抗抑郁研究提供了更為廣闊的前景。

生物素標(biāo)記抗體蛋白芯片技術(shù)是一種微量分析技術(shù)，其重要的特點(diǎn)是高通量并進(jìn)行分析，適用于蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)—小分子物質(zhì)間的相互作用的分析，可以在一次實(shí)驗(yàn)比較生物樣品中上千的蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度，極大促進(jìn)蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)程。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)模型，選取氟西汀作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，通過(guò)電針治療干預(yù)，采用抗體蛋白芯片技術(shù)篩選在干預(yù)作用下有顯著表達(dá)變化的蛋白，并著重關(guān)注了同時(shí)在電針和藥物的干預(yù)治療下皆有顯著變化的與神經(jīng)血管生成相關(guān)的VEGF、VEGF-C和與損傷機(jī)制相關(guān)的MMP-8、MMP-13，重點(diǎn)探討在慢性應(yīng)激下，電針對(duì)神經(jīng)血管生成和損傷的干預(yù)效應(yīng)，旨在探究針刺的相關(guān)抗抑郁機(jī)制。

1材料與方法

1.1動(dòng)物

SD清潔級(jí)雄性大鼠40只,體質(zhì)量(200±20) g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，許可證編號(hào)：SCXK(京)2004-2007。

1.2藥物、試劑與儀器

鹽酸氟西汀分散片(禮來(lái)蘇州制藥有限公司，批號(hào)：J20120001)。RayBio大鼠L系列抗體芯片測(cè)試盒(美國(guó)RayBiotech公司)，AAR-BLM-1抗體芯片，標(biāo)記試劑，終止液，封閉緩沖液，紅外熒光劑——鏈霉親和素，20X的洗液I，20X 的洗液II。恒溫箱(上海一恒科技有限公司，型號(hào)：BPH-9082)，酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek，型號(hào)：ELX800)，離心機(jī)(美國(guó)Thermo Scientific，型號(hào)：SoRVALL LEGEND MICRO 21R)，勻漿機(jī)(德國(guó)IKA，型號(hào)：T10 basic ULTRA-TURRAX)，搖床(江蘇QILIN BEI ER，型號(hào)：TS-8)，芯片配套產(chǎn)品(膜芯片2張、塑料薄片、透析管2個(gè)、純化柱2個(gè)、孵育盒1個(gè))，紅外熒光掃描儀LI-COR Odyssey Scanner(美國(guó)LI-COR公司)，華佗牌SDZ-V型的電針儀。環(huán)球牌無(wú)菌針灸針(0.30 mm×25 mm蘇州環(huán)球針灸醫(yī)療器械有限公司)。

1.3方法

1.3.1分組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將40只大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、模型+電針組(以下簡(jiǎn)稱電針組)、模型+鹽酸氟西汀組(以下簡(jiǎn)稱氟西汀組)，每組10只。

1.3.2模型制備與干預(yù)采用CUMS抑郁動(dòng)物模型造模方法，空白組每籠5只，正常飼養(yǎng)，不接受任何刺激；模型組、電針組和藥物組的大鼠置于小籠中孤養(yǎng)并接受28天各種不同刺激，包括冰水游泳(4℃，5分鐘)、潮濕墊料、禁水(24小時(shí))、夾尾(1分鐘)、束縛(3小時(shí))、禁食(24小時(shí))和晝夜顛倒共7種刺激。每天隨機(jī)給予1種刺激，相同的刺激不連續(xù)出現(xiàn)，每種刺激總共不少于4次。電針組在每天應(yīng)激前1小時(shí)進(jìn)行電針干預(yù)，氟西汀組在每天應(yīng)激前1小時(shí)進(jìn)行藥物灌胃干預(yù)。

1.3.3針刺與給藥方法根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》選取百會(huì)、印堂。選用“環(huán)球”牌0.30 mm×25 mm針刺針，平刺進(jìn)針，針刺深度為0.5～1 cm，電針強(qiáng)度為2 Hz，斷續(xù)波，30 min/次，針刺強(qiáng)度以大鼠頭部微顫為宜。氟西汀用蒸餾水配成10 mg/kg，按5 mL/kg濃度灌胃。

1.4取材及檢測(cè)方法

1.4.1取材造模28天后，灌流固定，取腦。將每組的大鼠海馬組織進(jìn)行混合，利用透析管透析，測(cè)定相關(guān)蛋白濃度，用生物素進(jìn)行標(biāo)記。經(jīng)過(guò)封閉和孵育后，利用紅外熒光掃描儀進(jìn)行掃描。運(yùn)用儀器自帶分析軟件提取數(shù)據(jù)。

1.4.2抗體蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)(1) 海馬組織裂解液置備：用pH 7.4的PBS洗凈海馬組織，剪碎放至離心管，加入500 μL細(xì)胞裂解液，勻漿機(jī)裂解組織30秒，取上清移至新的離心管中保存。(2)樣品透析：取200 μL組織裂解液加入透析管中，之后在4000 mL的1×PBS(pH=8)中4℃邊攪拌邊透析。每3小時(shí)更換透析液1次。(3)蛋白濃度測(cè)定：采用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒，檢測(cè)海馬組織裂解液蛋白濃度。(4)生物素標(biāo)記樣品：先將標(biāo)記試劑小管快速離心，管中加入500 μL的1×PBS溶解粉末，制備成1×標(biāo)記試劑溶液。再向新的離心管中加入適當(dāng)量的標(biāo)記試劑?？焖倩靹颍瑩u床上室溫孵育30分鐘。每5分鐘輕彈離心管，混合反應(yīng)試劑。加入5 μL終止液，然后用純化柱去除未結(jié)合生物素，再將擰開(kāi)蓋子與底部栓的柱子放入50 mL收集管中，于1000 g離心3分鐘去掉儲(chǔ)存液。之后向柱中加入5 mL的1×PBS，于1000 g離心3分鐘，倒出50 mL離心管中的5 mL 1×PBS，再重復(fù)2次此步操作，清洗干凈柱子。將柱子放入一個(gè)新的50 mL離心管中，緩慢將標(biāo)記好的樣品加入樹(shù)脂床的中央。將柱子離心后收集樣品，儲(chǔ)存于-80 ℃?zhèn)溆谩?5)封閉和孵育：在孵育盒中加入2.5 mL封閉緩沖液，用鑷子拖著膜的邊緣將膜緩慢浸沒(méi)到封閉緩沖液中，避免氣泡產(chǎn)生，室溫振蕩孵育1小時(shí)。 用抽液泵抽去封閉液后，每張膜芯片加入2.5 mL封閉液稀釋好的樣品，4℃過(guò)夜。抽去樣品，每個(gè)孵育盒中加入約3 mL的1×洗液I(20×洗液用去離子水稀釋)室溫振蕩洗膜，洗膜4次，每次5分鐘。抽去1×洗液I，加入1×洗液II室溫振蕩洗膜，洗膜3次，每次5分鐘。抽去1×洗液II，每張膜加入2.5 mL用封閉液8000倍稀釋的CW800-鏈霉親和素。室溫避光振蕩孵育2小時(shí)。洗膜(步驟同上)。(6)抗體芯片信號(hào)的檢測(cè)：使用LI-COR Odyssey Scanner 進(jìn)行掃描，設(shè)定波長(zhǎng)為800掃描通道，掃描強(qiáng)度為7.0，分辨率為42 μm。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用儀器自帶分析軟件提取數(shù)據(jù)，采用AAR-BLM-1的數(shù)據(jù)分析軟件來(lái)進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)分析。將每組10個(gè)樣品進(jìn)行混合，采用蛋白表達(dá)水平變化(fold change)比較方法，即兩組樣本蛋白表達(dá)量均值之比的方法進(jìn)行差異分析，直觀地表現(xiàn)組間的蛋白表達(dá)差異，選取差異蛋白最多的“fold change大于1.2或小于0.8”檔位進(jìn)行分析，并進(jìn)行組間校正。

2結(jié)果

造模4周后，與空白組相比，模型組大鼠海馬VEGF蛋白表達(dá)上調(diào)(fold change=1.20)；相較于模型組，電針組、氟西汀組VEGF表達(dá)下調(diào)(fold change=0.73，0.70)。與空白組相比，模型組大鼠海馬VEGF-C蛋白表達(dá)上調(diào)(fold change=1.34)；相較于模型組，電針組、氟西汀組VEGF-C表達(dá)下調(diào)(fold change=0.66，0.59)。與空白組相比，模型組大鼠海馬MMP-8蛋白的表達(dá)上調(diào)(fold change=1.25)；與模型組相比，電針組、氟西汀組MMP-8表達(dá)下調(diào)(fold change =0.70，0.58)。與空白組相比，模型組大鼠海馬MMP-13蛋白的表達(dá)上調(diào)(fold change=1.31)；與模型組相比，電針組、氟西汀組MMP-13表達(dá)下調(diào)(fold change =0.74，0.63)。具體見(jiàn)表1和圖1～圖4。

表1　各組大鼠海馬血管生成相關(guān)蛋白比較

表2　各組蛋白表達(dá)量均值之比

注： 與空白組相比，afold chang>1.2;與模型組相比，bfold chang<0.8

3討論

抑郁機(jī)制與治療研究選擇恰當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型是一個(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)采用CUMS慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激抑郁模型，它可以模擬人類抑郁癥中各種慢性應(yīng)激源導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[3]，是目前公認(rèn)的經(jīng)典抑郁癥動(dòng)物模型之一[4]。

A空白組 B模型組 C電針組 D氟西汀組

A空白組 B模型組 C電針組 D氟西汀組

A空白組 B模型組 C電針組 D氟西汀組

A空白組 B模型組 C電針組 D氟西汀組

抗體芯片技術(shù)是檢測(cè)生物樣品中蛋白表達(dá)模式的新方法，它的顯著優(yōu)點(diǎn)是可以在同一張芯片上對(duì)成百上千種不同樣品的蛋白表達(dá)模式進(jìn)行分析比較。對(duì)于抑郁癥研究，這項(xiàng)技術(shù)可以同時(shí)比對(duì)不同組間大鼠的多種蛋白，為篩選表達(dá)有差異的蛋白提供了良好的技術(shù)支持及可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也給予了后期的研究方向。本實(shí)驗(yàn)在慢性應(yīng)激模型大鼠上，運(yùn)用此技術(shù)，同時(shí)對(duì)比四個(gè)組大鼠海馬內(nèi)的蛋白，發(fā)現(xiàn)部分蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)了不同程度的上調(diào)或下調(diào)，本課題組前期著重探討星形膠質(zhì)細(xì)胞功能改變對(duì)抗抑郁作用的影響[5]及電針抗抑郁的機(jī)制可能與促進(jìn)了海馬內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)有關(guān)[6]。本實(shí)驗(yàn)延續(xù)前期并重點(diǎn)關(guān)注與神經(jīng)血管生成密切相關(guān)的VEGF/VEGF-C、MMP-8/MMP-13的蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)二者無(wú)論在模型組與空白組比較中，還是電針組、藥物組與模型組比較中蛋白表達(dá)均有顯著的變化，推測(cè)電針可能通過(guò)抑制MMP-8/MMP-13的蛋白表達(dá)從而降低應(yīng)激狀態(tài)下病理性血管的生成和神經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，同時(shí)對(duì)神經(jīng)血管產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng)，從而良性調(diào)節(jié)VEGF/VEGF-C的蛋白表達(dá)水平，發(fā)揮抗抑郁的作用。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族具有增加微靜脈、小靜脈的通透性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，以及誘導(dǎo)血管生成等作用。通常所說(shuō)VEGF即指VEGF-A。其中VEGF-A及VEGF-C是主要成員，VEGF-A是最早發(fā)現(xiàn)的，其促進(jìn)血管生成的作用也最強(qiáng)。在腦內(nèi)，VEGF與神經(jīng)、血管再生聯(lián)系緊密，它能特異性地通過(guò)提高血管通透性、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及遷移，在血管新生形成過(guò)程發(fā)揮重要作用[7]，此外，它還具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞存活與抗凋亡的作用。而且越來(lái)越多的研究表明VEGF影響海馬神經(jīng)的發(fā)生，它主要通過(guò)參與海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的多條信號(hào)通路促進(jìn)海馬神經(jīng)元前體生存、滲透、遷移和增殖[8]。Palmer等[9]研究中發(fā)現(xiàn)海馬中含有較高水平的VEGF，由此VEGF很可能直接促進(jìn)了神經(jīng)細(xì)胞的增殖；也有可能通過(guò)刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，間接地誘導(dǎo)神經(jīng)祖細(xì)胞的分裂。在調(diào)節(jié)血管生成方面VEGF-C與VEGF有相同的作用：能刺激內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增生，增加血管通透性，同時(shí)它還表現(xiàn)出與VEGF的協(xié)同作用[7]。

許多研究表明，抑郁大鼠海馬內(nèi)VEGF的表達(dá)降低[10-11]，但也有研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者與健康人相比VEGF水平升高[12-14]，且有研究證實(shí)缺氧、缺血及實(shí)體腫瘤等情況下可以提高VEGF的表達(dá)[15-16]，并且在某些病理狀態(tài)也有VEGF合成增加的情況。本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)篩查發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠海馬VEGF、VEGF-C蛋白表達(dá)水平上調(diào)，推測(cè)應(yīng)激狀態(tài)下，造成了神經(jīng)血管的損傷和凋亡，而機(jī)體可能通過(guò)升高VEGF、VEGF-C的途徑促進(jìn)血管和神經(jīng)的再生，從而啟動(dòng)了機(jī)體的神經(jīng)血管保護(hù)機(jī)制，以拮抗應(yīng)激對(duì)抗神經(jīng)血管的損傷；電針干預(yù)后，大鼠海馬的VEGF/VEGF-C蛋白表達(dá)趨于正常水平。推測(cè)電針治療可通過(guò)某種途徑減輕了慢性應(yīng)激對(duì)大鼠海馬神經(jīng)和血管的損傷，使大鼠腦內(nèi)穩(wěn)態(tài)趨于正常，從而良性調(diào)節(jié)了VEGF及VEGF-C的蛋白表達(dá)。

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloprotein, MMPs)是一個(gè)可以降解細(xì)胞外基質(zhì)不同成分的鋅依賴蛋白家族[17]，它們?cè)谏砗筒±硇匝苌芍邪l(fā)揮重要作用。MMP-8在內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多處表達(dá)[18]，并且在血管組織中非常活躍，可以使內(nèi)皮細(xì)胞功能變得敏感[19]，同時(shí)它還會(huì)促使血管結(jié)構(gòu)破壞，功能紊亂，分布無(wú)序的病理性血管生成[20]。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，MMP-13來(lái)自神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元及腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，其活化可通過(guò)降解神經(jīng)細(xì)胞外的基質(zhì)，從而破壞腦神經(jīng)細(xì)胞和血管的完整性[21]，并且在某些病理狀態(tài)也有MMP-13合成增加的情況[22-23]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：CUMS大鼠海馬內(nèi)MMP-8、MMP-13明顯高于正常組，而經(jīng)過(guò)電針干預(yù)后的大鼠海馬內(nèi)這兩種蛋白表達(dá)會(huì)顯著降低。電針可能通過(guò)下調(diào)MMP-8、MMP-13的蛋白表達(dá)水平，從而抑制了慢性應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)的降解及病理性血管的生成，改善了神經(jīng)血管的損傷，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞和血管行使保護(hù)的效應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)中從電針對(duì)神經(jīng)血管保護(hù)效應(yīng)的角度，從篩查的蛋白中關(guān)注和分析了與神經(jīng)血管密切相關(guān)的VEGF/VEGF-C及MMP-8/MMP-13,發(fā)現(xiàn)電針能夠通過(guò)啟動(dòng)大鼠的神經(jīng)血管保護(hù)機(jī)制，抵抗慢性應(yīng)激對(duì)大鼠海馬的損害，維護(hù)海馬的穩(wěn)態(tài)，從而產(chǎn)生抗抑郁的作用。與神經(jīng)血管保護(hù)相關(guān)的蛋白仍有許多，本文只從篩查蛋白中重點(diǎn)描述了VEGF、VEGF-C、MMP-8及MMP-13，對(duì)針刺抗抑郁作用的靶點(diǎn)和途徑的描述是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，在今后的研究中，將繼續(xù)深入研究其他被篩查出來(lái)有顯著差異的與神經(jīng)血管密切相關(guān)的蛋白，通過(guò)結(jié)合相關(guān)信號(hào)通路，繼續(xù)深入進(jìn)行針刺的抗抑郁機(jī)制研究。

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(本文編輯： 董歷華)

Influence of electroacupuncture on the expression of related proteins in the hippocampus of rats with chronic stress induced depression

YUMiao，ZHANGDan-mei，WUJi-hong，etal.

SchoolofAcu-moxibustionandTuina，BeijingUniversityofChinese

medicine，Beijing100029，ChinaCorrespondingauthor：WUJi-hong，E-mail：wujihong@sohu.com；TUYa，E-mail：Tuyab@263.net

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of electric acupuncture (EA) on VEGF, VEGF-C, MMP-8 and MMP-13, which are relevant to angiogenesis and injuries in vessels and nerves in hippocampus of CUMS rats. The protective effect of electric acupuncture on the hippocampus neurons of rats with depression induced by chronic stress was explored. Methods40 SD rats were randomly divided into four groups：blank group，model group，EA group，and fluoxetine group. The chronic unpredictable mild stress model was established. Biotin-labeled protein chip technology were used to detect the expression of VEGF ,VEGF-C,MMP-8 and MMP-13. ResultsCompared with the blank group，the protein expressions of VEGF，VEGF-C, MMP-8 and MMP-13 in the model group were increased( fold change =1.20,1.34,1.25，1.31) . Compared with the model group，VEGF was decreased in EA group and fluoxetine group(fold change=0.73,0.70). VEGF-C was decreased in EA group and fluoxetine group (fold change=0.66, 0.59), MMP-8 was decreased in EA group and fluoxetine group (fold change=0.70, 0.58) and MMP-13 was decreased in EA group and fluoxetine group. ConclusionEA can reduce the influence of chronic stress on the hippocampus of rats, and has protective effect on nerve and vessels, which may be one of the molecular mechanisms of anti depression.

【Key words】Electric acupuncture；Depression；Hippocampus；VEGF；MMPs

(收稿日期：2015-09-07)

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.04.001

作者簡(jiǎn)介：于淼(1989- )，女，2013級(jí)在讀碩士研究生。研究方向：影響針灸療效的相關(guān)因素研究。E-mail:guihebie@163.com通訊作者：鄔繼紅(1964- )，女，碩士，教授，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。研究方向：影響針灸療效的相關(guān)因素研究。E-mail：wujihong@sohu.com；圖婭(1955- )，女，博士，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師。研究方向：針刺抗抑郁機(jī)理與臨床研究。E-mail：Tuyab@263.net

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81173334，81373729)