BRM基因多態(tài)與食管鱗狀細(xì)胞癌易感性的關(guān)聯(lián)研究

陳　斌，朱　勇，張舒龍

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·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

BRM基因多態(tài)與食管鱗狀細(xì)胞癌易感性的關(guān)聯(lián)研究

陳斌1，朱勇2，張舒龍3

[摘要]目的：研究BRM-741位點(diǎn)和BRM-1321位點(diǎn)的插入/缺失多態(tài)與中國(guó)漢族人群食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)易感性的關(guān)系。方法：采用病例-對(duì)照研究，以聚合酶鏈反應(yīng)-聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法，分析343例ESCC患者和362名性別、年齡等人口學(xué)特征與病例頻數(shù)匹配的健康對(duì)照者的BRM-741以及BRM-1321基因型分布情況。logistic 回歸分析BRM基因多態(tài)與ESCC易感性的關(guān)系。結(jié)果：BRM-741多態(tài)與ESCC的患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，而B(niǎo)RM-1321多態(tài)與ESCC的發(fā)生有相關(guān)性(P<0.01)。攜帶BRM-1321插入/插入基因型的個(gè)體發(fā)生ESCC的風(fēng)險(xiǎn)較攜帶BRM-1321缺失/缺失基因型者增加了94.0%(OR=1.94，95%CI=1.11～3.38)。與缺失型等位基因比較，插入型等位基因增加了35.0%的ESCC易感性(OR=1.35，95%CI=1.07～1.71)。結(jié)論：BRM-1321多態(tài)與中國(guó)漢族人群ESCC遺傳易感性有關(guān)，BRM-741基因多態(tài)與中國(guó)漢族人群ESCC的患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)。

[關(guān)鍵詞]食管腫瘤；癌，鱗狀細(xì)胞；BRM基因；基因多態(tài)

食管癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在惡性腫瘤中居第八位，死亡率居第六位，全世界每年約有48萬(wàn)新增病例[1]。我國(guó)是世界上食管癌發(fā)病率和病死率較高的國(guó)家之一，2015中國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，食管癌居惡性腫瘤死因第4位[2]。食管癌主要分為食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)和食管腺癌兩種類(lèi)型，其中ESCC是中國(guó)食管癌的主要病理類(lèi)型。ESCC的發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果。BRM基因位于染色體9p24，其表達(dá)的蛋白是染色質(zhì)重塑復(fù)合物(SWI/SNF)的一個(gè)重要催化亞基。SWI/SNF對(duì)腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)起著重要的作用[3]。研究[4-7]表明,至少在10%的實(shí)體瘤中存在BRM表達(dá)缺失，包括肺癌、乳腺癌、食管癌等。最近已有報(bào)道[8-9]指出，BRM-741多態(tài)和BRM-1321多態(tài)與肺癌和原發(fā)性肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。但是BRM-741多態(tài)和BRM-1321多態(tài)與ESCC易感性的相關(guān)性研究少有報(bào)道。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析方法，探討B(tài)RM-741多態(tài)和BRM-1321多態(tài)與ESCC易感性的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料343例ESCC患者(ESCC組)為安徽省來(lái)安縣人民醫(yī)院和來(lái)安縣家寧醫(yī)院2009年1月至2012年3月住院及門(mén)診患者,均經(jīng)組織病理學(xué)確診。362名健康對(duì)照者(對(duì)照組)為同期在該兩所醫(yī)院參加體檢的無(wú)腫瘤及其他遺傳疾病的健康體檢者。所有研究對(duì)象均為無(wú)親緣關(guān)系的中國(guó)漢族人，經(jīng)知情同意后進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，并同時(shí)收集外周靜脈血標(biāo)本5 mL，調(diào)查內(nèi)容包括詳細(xì)的人口學(xué)資料、吸煙及飲酒情況等。每周至少飲1次以上白酒或乙醇性飲料連續(xù)6個(gè)月以上為飲酒。每天吸煙1支以上并持續(xù)1年以上為吸煙。

1.2DNA提取和基因分型采用Qiangen試劑盒提取外周血白細(xì)胞DNA。用上游引物：5′-TTG TGC CCG CCT CCC TTT TC-3′和下游引物：5′-GGC TCC GAG TGG CAC CAA AG-3′擴(kuò)增BRM-741位點(diǎn)。用上游引物：5′-GGG AAG AAT CCT CAA CCA GAT AGT C-3′和下游引物：5′-GTT TTA TGA AGT GTG AAA GAA TGT TAG G-3′擴(kuò)增BRM-1321位點(diǎn)。PCR反應(yīng)體系為25 μL,其中包括模板DNA 100 ng,10×PCR緩沖液2.5 μL(內(nèi)含20 mmol/L MgCl2),染料2.5 μL,Taq-DAN 聚合酶2.5 U,10 mmol/L dNTPs 1 μL和5 μmol/L上、下游引物各1 μL。PCR反應(yīng)條件:BRM-741為94 ℃預(yù)變性5 min,然后94 ℃ 30 s、59 ℃ 40 s、72 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán)后,72 ℃延伸5 min；BRM-1321為94 ℃預(yù)變性5 min,然后94 ℃ 30 s、56 ℃ 40 s、72 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán)后,72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)7%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染法分析[10]。依據(jù)膠上條帶的數(shù)目和長(zhǎng)度對(duì)個(gè)體進(jìn)行基因分型。為了保證結(jié)果的可靠性,將10%的隨機(jī)樣本進(jìn)行二次分型,其結(jié)果100%一致。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)及Hardy-Weinberg平衡分析比較基因型頻率的觀察值與預(yù)期值和非條件logistic回歸分析。

2結(jié)果

2.12組一般特征比較2組性別、年齡、吸煙和飲酒差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表1)。BRM-741和BRM-1321基因分型見(jiàn)圖1。

2.2BRM多態(tài)與ESCC易感性的關(guān)系

表1　2組一般情況比較[n;百分率(%)]

*示t值

2.2.1BRM-741與ESCC易感性的關(guān)系對(duì)照組BRM-741基因型分布符合Hardy-Weinberg 平衡(P>0.05)(見(jiàn)表2)。2組基因型分布總體上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與缺失/缺失(DD)基因型相比,攜帶插入/缺失(ID)和插入/插入(II)基因型不影響ESCC 的患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.02,95%CI=0.68～1.54和OR=1.14,95%CI=0.74～1.76)。同時(shí),2組D和I等位基因頻率分別為42.0%、58.0%、44.1%和55.9%,等位基因的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與D等位基因比較,攜帶I等位基因不影響ESCC 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.09,95%CI=0.88～1.35)(見(jiàn)表3)。

2.2.2BRM-1321與ESCC易感性的關(guān)系對(duì)照組的BRM-1321基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)(見(jiàn)表2)，說(shuō)明對(duì)照組具有群體代表性。ESCC組和對(duì)照組的基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與DD 基因型比較,攜帶II基因型增加患ESCC風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.94,95%CI=1.11～3.38)。同時(shí),2組D和I等位基因頻率分別為65.5%、34.5%、72.0%和28.0%,等位基因的分布差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與D等位基因比較,攜帶I等位基因亦可增加ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.35,95%CI=1.07～1.71)(見(jiàn)表3)。

3討論

食管癌對(duì)居民生命健康危害極大，雖然迄今為止,食管癌的真正病因尚未認(rèn)定，但是流行病學(xué)研究表明,不良飲食習(xí)慣、腌制食品、吸煙、飲酒等環(huán)境致癌因素以及遺傳因素在ESCC的發(fā)生中起重要作用[11-15]。

表2對(duì)照組BRM-741和BRM-1321位點(diǎn)的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

*預(yù)期值為依據(jù)Hardy-Weinberg平衡定律計(jì)算所得

表3　BRM-741和BRM-1321基因型和ESCC風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系[n;百分率(%)]

BRM屬于SWI/SNF復(fù)合物的亞單位之一,具有ATP酶催化活性。BRM在惡性腫瘤發(fā)生中的作用很可能與染色質(zhì)重塑復(fù)合物SWI/SNF有關(guān)，SWI/SNF通過(guò)ATP水解產(chǎn)生的能量改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)來(lái)調(diào)控基因表達(dá)，參與細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和腫瘤發(fā)生等過(guò)程的調(diào)節(jié)[16]。有報(bào)道[3]指出，SWI/SNF復(fù)合物可以與Rb和p53關(guān)鍵腫瘤抑制基因相互作用。BRM缺失表達(dá)會(huì)損害Rb介導(dǎo)的生長(zhǎng)調(diào)控。利用基因敲除小鼠與細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)方法發(fā)現(xiàn),BRM具有抑制腫瘤發(fā)生的作用[17-18]。

已有研究[8-9]表明，BRM-741和BRM-1321多態(tài)與肺癌和原發(fā)性肝癌的易感性有關(guān)，但是BRM-741多態(tài)和BRM-1321多態(tài)與ESCC易感性的關(guān)聯(lián)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究證實(shí)了BRM-1321多態(tài)與ESCC的發(fā)生具有顯著關(guān)聯(lián)。攜帶BRM-1321 II基因型的個(gè)體發(fā)生ESCC的風(fēng)險(xiǎn)較攜帶BRM-1321 DD基因型者增加了94.0%。與D等位基因相比較，I等位基因增加了35.0%的ESCC易感性。序列同源性分析揭示含有BRM-1321 I型等位基因的序列與肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2(MEF2)結(jié)合位點(diǎn)的保守序列具有92%同源性，然而含有BRM-1321 D型等位基因的序列與MEF2結(jié)合位點(diǎn)的保守序列沒(méi)有同源性[8]。基因型-表型關(guān)聯(lián)研究[9]表明，BRM-1321 II基因型與BRM的降低表達(dá)有關(guān)。因此，BRM-1321 I型多態(tài)可能通過(guò)與轉(zhuǎn)錄因子MEF2結(jié)合，導(dǎo)致腫瘤抑癌基因BRM降低表達(dá)，從而增加患惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，本研究通過(guò)病例-對(duì)照實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，BRM-1321多態(tài)可能與中國(guó)漢族人群ESCC遺傳易感性有關(guān)，這一相關(guān)性結(jié)果在得到進(jìn)一步大樣本量和功能學(xué)研究證實(shí)后，該多態(tài)性位點(diǎn)有望作為ESCC的易感性標(biāo)志物之一。

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(本文編輯馬啟)

Association between single nucleotide polymorphisms in BRM and the susceptibility of esophageal squamous cell carcinoma

CHEN Bin1,ZHU Yong2,ZHANG Shu-long3

(1.DepartmentofRadiology,LaianCountyPeople′sHospital,LaianAnhui239200;2.DepartmentofGeneralSurgery,Jianing′sHospital,LaianAnhui239200;3.DepartmentofGeneralSurgery,ZhongdaHospitalAffiliatedtoMedicalSchoolofSoutheastUniversity，NanjingJiangsu210009,China)

[Abstract]Objective:To investigate the association of indel polymorphisms of BRM-741 and BRM-132 with the susceptibility of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) in Chinese Han population.Methods:The genotype distribution of BRM-741and BRM-1321 in 343cases of ESCC and 362 healthy controls whose gender,age and other demographic characteristics were matched with the frequency of the ESCC cases was analyzed in a case-control study by using polymerase chain reaction-polyacrylamide gel electrophoresis method.Logistic regression model was used to evaluate the association between polymorphisms and ESCC susceptibility.Results:There was no significant association between BRM-741 and ESCC(P>0.05).However,there was a significant association between BRM-1321 and ESCC susceptibility(P<0.01).The insertion/insertion genotype was associated with an increased risk of ESCC compared with the deletion/deletion genotype of BRM 1321 (OR=1.94,95%CI=1.11-3.38).The insertion allel was associated with an increased risk of ESCC compared with the deletion allel of BRM 1321 (OR=1.35,95%CI=1.07-1.71).Conclusions:The polymorphism in BRM-1321 is associated with ESCC susceptibility,but no significant association is observed between the polymorphism in BRM-741 and ESCC incidence in Chinese Han population.

[Key words]esophageal neoplasms;squamous cell carcinoma;BRM genetic;gene polymorphism

[中圖法分類(lèi)號(hào)]R 735.1

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

DOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.02.004

[作者簡(jiǎn)介]陳斌(1980-)，男，住院醫(yī)師.

[收稿日期]2013-11-13

[文章編號(hào)]1000-2200(2016)02-0152-04

[作者單位] 1.安徽省來(lái)安縣人民醫(yī)院 影像科，239200；2.安徽省來(lái)安縣家寧醫(yī)院 外科，239200；3.江蘇省東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 普外科，江蘇 南京 210009