一株產(chǎn)ε-聚賴(lài)氨酸的白色鏈霉菌遺傳轉(zhuǎn)化體系

孫朱貞，馮小海，許召賢，曹長(zhǎng)虹，徐　錚，徐　虹

(1. 南京工業(yè)大學(xué)材料化學(xué)工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210009;

2. 南京工業(yè)大學(xué)食品與輕工學(xué)院，江蘇南京211800)

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一株產(chǎn)ε-聚賴(lài)氨酸的白色鏈霉菌遺傳轉(zhuǎn)化體系

孫朱貞1,2，馮小海1,2，許召賢1,2，曹長(zhǎng)虹1,2，徐錚1,2，徐虹1,2

(1. 南京工業(yè)大學(xué)材料化學(xué)工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210009;

2. 南京工業(yè)大學(xué)食品與輕工學(xué)院，江蘇南京211800)

摘要：為了更好地研究ε-聚賴(lài)氨酸(ε-PL)生物合成的分子機(jī)制以及構(gòu)建ε-PL高產(chǎn)基因工程菌株，擬建立一株ε-PL產(chǎn)生菌株Streptomyces albulus PD-1的遺傳轉(zhuǎn)化體系。通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基類(lèi)型、孢子預(yù)萌發(fā)處理、培養(yǎng)基中Mg(2+)濃度等條件進(jìn)行考察，以Escherichia coli ET12567(pUZ8002)為供體菌，成功地將pIB139質(zhì)粒導(dǎo)入S. albulus PD-1中。結(jié)果表明：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率達(dá)到(3±0.4)× 10(-6)個(gè)接合轉(zhuǎn)化子/受體。接合子傳代實(shí)驗(yàn)和PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pIB139質(zhì)粒能夠穩(wěn)定整合在S. albulus PD-1染色體的attB位點(diǎn)上。本研究建立了一株ε-PL生產(chǎn)菌株的遺傳轉(zhuǎn)化體系，為從分子水平上研究ε-PL的合成及ε-PL高產(chǎn)菌株的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：ε-聚賴(lài)氨酸；白色鏈霉菌；遺傳轉(zhuǎn)化體系；pIB139

ε-聚賴(lài)氨酸(ε-poly-L-lysine，ε-PL)是由L-賴(lài)氨酸的α-氨基和ε-羧基通過(guò)酰胺鍵連接而成的同型聚氨基酸。由于其良好的抑菌性和生物安全性，ε-PL已經(jīng)作為一種天然的食品及化妝品防腐劑被多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)使用[1-2]。2014年我國(guó)批準(zhǔn)ε-PL及其鹽酸鹽作為新型食品添加劑可以在食品行業(yè)中使用[3]，極大地推動(dòng)了國(guó)內(nèi)ε-PL的生產(chǎn)和研究工作。

在工業(yè)上，ε-PL主要是通過(guò)放線(xiàn)菌發(fā)酵獲得。自1977年第1株ε-PL產(chǎn)生菌株被篩選出來(lái)，研究者們通過(guò)新型菌株篩選、高效菌株誘變、發(fā)酵體系優(yōu)化等措施大大提高了微生物合成ε-PL的效率[4-6]，但是關(guān)于ε-PL合成機(jī)制的研究卻較少。究其原因是缺少ε-PL相關(guān)產(chǎn)生菌株的遺傳轉(zhuǎn)化體系。遺傳轉(zhuǎn)化體系是對(duì)菌株進(jìn)行基因鑒定分析、代謝途徑改造和其他遺傳操作的前提。2000～2006年期間，Pandey等[5,7-11]利用基于S.albulusIFO14147內(nèi)源質(zhì)粒復(fù)制子構(gòu)建的復(fù)制型質(zhì)粒建立了適用于S.albulusIFO14147的接合轉(zhuǎn)移體系，并借助此遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了ε-PL的合成機(jī)制探索。但由于此工作是基于S.albulusIFO14147內(nèi)源質(zhì)粒復(fù)制子展開(kāi)的，并不能為其他ε-PL產(chǎn)生菌株所借用。盡管近年來(lái)多個(gè)ε-PL研究小組指出ε-PL產(chǎn)生菌株遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建的重要性[12-14]，但是由于放線(xiàn)菌絲狀菌體形態(tài)、較厚的細(xì)胞壁以及較長(zhǎng)的生長(zhǎng)周期等特點(diǎn)，未見(jiàn)有其他關(guān)于ε-PL生產(chǎn)菌株遺傳轉(zhuǎn)化體系及其分子改造的報(bào)道[15-18]。

目前鏈霉菌常用的遺傳轉(zhuǎn)化體系有3種：原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、電轉(zhuǎn)化和接合轉(zhuǎn)移。在此3種方法中，接合轉(zhuǎn)移由于其操作簡(jiǎn)便、轉(zhuǎn)化效率高、穩(wěn)定性好而被應(yīng)用于許多鏈霉菌中。根據(jù)相關(guān)報(bào)道表明，不同鏈霉菌進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移的培養(yǎng)基是不同的，例如，方志鍇等[19]研究金色鏈霉菌遺傳轉(zhuǎn)化體系時(shí)發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基為其最理想的接合轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基； Park等[20]發(fā)現(xiàn)ISP-4是S.mobaraensisATCC29032最適接合轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基，而以AS-2和ISP-2作為接合轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基時(shí)無(wú)S.mobaraensisATCC29032接合子長(zhǎng)出；朱云霞等[21]發(fā)現(xiàn)ISP-4是抗生素Bagremycin生產(chǎn)菌Streptomycessp. Tü4128最適的接合轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基。因此，本文中，筆者嘗試采用接合轉(zhuǎn)移的方法應(yīng)用于遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立，并嘗試上述幾種培養(yǎng)基，最終選擇轉(zhuǎn)化效率最高的培養(yǎng)基，作為本實(shí)驗(yàn)的最適培養(yǎng)基。在此基礎(chǔ)上對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各條件進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到最高的轉(zhuǎn)化效率。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1菌株與質(zhì)粒

ε-PL高產(chǎn)菌株S.alublusPD-1，由徐虹老師課題組篩選、誘變獲得，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC M2011043。pIB139質(zhì)粒是由pSET152質(zhì)粒發(fā)展而來(lái)的大腸桿菌-鏈霉菌穿梭型質(zhì)粒，其中包含紅霉素抗性基因強(qiáng)啟動(dòng)子、pUC18復(fù)制子、阿泊拉霉素抗性基因以φ31的整合酶基因和整合位點(diǎn)。E.coliET12567(pUZ8002)為接合轉(zhuǎn)移供體菌。pIB139質(zhì)粒和E.coliET12567(pUZ8002)菌株均由武漢大學(xué)瞿旭東老師饋贈(zèng)。

1.1.2培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨10，酵母粉5，NaCl 10，固體培養(yǎng)基加20 g/L瓊脂。

胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基(g/L)：TSB 30,購(gòu)于Oxoid公司。

接合轉(zhuǎn)移用培養(yǎng)基有MS培養(yǎng)基(g/L)：甘露醇20，大豆粉20，瓊脂20。AS-1培養(yǎng)基(g/L)：酵母粉10，L-丙氨酸0.2，L-精氨酸0.5，可溶性淀粉5，NaCl 2.5，Na2SO410，瓊脂20；pH 7.5。ISP-2培養(yǎng)基(g/L)：酵母粉4，麥芽提取物10，葡萄糖4，瓊脂20。ISP-4培養(yǎng)基(g/L)：可溶性淀粉10，(NH4)2SO42， MgSO4·7H2O 2，CaCO32，NaCl 1，K2HPO41，ZnSO41，F(xiàn)eSO4·7H2O 1，MnCl21，瓊脂20；pH 7.2。所有接合轉(zhuǎn)移用固體培養(yǎng)基均添加10 mmol/L的MgCl2。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1S.albulusPD-1菌株對(duì)抗生素的敏感性測(cè)試

為了確定用于S.albulusPD-1菌株進(jìn)行遺傳操作的選擇標(biāo)記，筆者考察S.albulusPD-1對(duì)阿泊拉霉素、卡那霉素、氨芐青霉素、氯霉素、硫鏈絲菌素、萘啶酮酸等6種常用抗生素的抗性水平。試驗(yàn)中分別配制了含0、5、10、25、50 和100 μg/mL上述抗生素的MS平板。之后將200 μL含有約108個(gè)S.albulusPD-1的孢子懸浮液均勻涂布于平板上，30 ℃培養(yǎng)7 d后對(duì)平板上菌落長(zhǎng)出情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，確定S.albulusPD-1對(duì)各種抗生素的敏感性。

1.2.2接合轉(zhuǎn)移

接合轉(zhuǎn)移方法參照鏈霉菌操作手冊(cè)，且進(jìn)行了適當(dāng)?shù)膬?yōu)化。首先將pIB139質(zhì)粒通過(guò)熱激轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入E.coliET12567(pUZ8002)中，得到供體菌株E.coliETl2567(pUZ8002,pIB139)。挑取E.coliET12567(pUZ8002,pIB139)單菌落接種在50 mL LB培養(yǎng)基(含有50 μg/mL的阿泊拉霉素、卡那霉素和氯霉素)中，37 ℃培養(yǎng)至OD600達(dá)到0.5左右，離心收集菌體。使用同等體積的新鮮LB培養(yǎng)基洗滌菌體2次，以除去菌體上附著的抗生素，將洗滌好的供體菌懸浮于0.5 mL新鮮LB培養(yǎng)基中待用。同時(shí)，將事先凍藏的S.albulusPD-1的孢子(約108個(gè))懸浮于TSB培養(yǎng)基中，然后經(jīng)過(guò)熱激處理誘導(dǎo)孢子萌發(fā)后懸浮于0.5 mL新鮮LB培養(yǎng)基中。最后，將處理好的E.coliET12567(pUZ8002,pIB139)和S.albulusPD-1孢子混合均勻分別涂布于MS、AS-1、ISP-2、ISP-4固體培養(yǎng)基中，30 ℃培養(yǎng)15～18 h后，將1 mL含有阿泊拉霉素和萘啶酮酸(質(zhì)量濃度分別為50和25 μg/mL)的無(wú)菌水覆蓋，以殺滅平板上的大腸桿菌和未發(fā)生質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的S.albulusPD-1。30 ℃培養(yǎng)7 d后統(tǒng)計(jì)平板上接合子菌落長(zhǎng)出情況。

2結(jié)果與討論

2.1S.albulusPD-1菌株對(duì)抗生素的敏感性測(cè)試

表1為S.albulusPD-1菌株對(duì)抗生素的敏感性試驗(yàn)結(jié)果。由表1可知：S.albulusPD-1對(duì)硫鏈絲菌素和阿泊拉霉素非常敏感，分別在質(zhì)量濃度為5和10 μg/mL時(shí)即可完全抑制S.albulusPD-1在MS平板上的生長(zhǎng)；對(duì)卡那霉素、氨芐青霉素、氯霉素表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗性，在100 μg/mL的平板上仍有少量S.albulusPD-1菌落長(zhǎng)出。鑒于此，硫鏈絲菌素和阿泊拉霉素的抗性基因可以作為S.albulusPD-1進(jìn)行遺傳操作的選擇標(biāo)記，以建立其遺傳轉(zhuǎn)化體系。本研究中選擇的質(zhì)粒是含有阿泊拉霉素抗性基因和φ31整合酶基因的大腸桿菌-鏈霉菌穿梭質(zhì)粒pIB139。萘啶酮酸是鏈霉菌屬間接合轉(zhuǎn)移過(guò)程中常用的一種可完全抑制供體菌(大腸桿菌)生長(zhǎng)的化學(xué)藥品，因此在選擇用于S.albulusPD-1菌株進(jìn)行遺傳操作選擇標(biāo)記的同時(shí)也考察了S.albulusPD-1對(duì)萘啶酮酸的敏感性，最終發(fā)現(xiàn)50 μg/mL的萘啶酮酸可抑制部分S.albulusPD-1的生長(zhǎng)，而在25 μg/mL萘啶酮酸時(shí)S.albulusPD-1即可較好的生長(zhǎng)，因此在接合轉(zhuǎn)移過(guò)程完成后，選定萘啶酮酸的工作濃度為25 μg/mL，可以高效地抑制供體大腸桿菌的生長(zhǎng)而對(duì)S.albulusPD-1的生長(zhǎng)沒(méi)有影響。

表1　S. albulus PD-1菌株對(duì)不同抗生素的抗性

2.2培養(yǎng)基類(lèi)型對(duì)S.albulusPD-1接合轉(zhuǎn)移效率的影響

表2為不同培養(yǎng)基對(duì)S.albulusPD-1的接合轉(zhuǎn)移效率的影響結(jié)果。

表2　培養(yǎng)基類(lèi)型對(duì)接合轉(zhuǎn)移效率的影響

由表2可知，固體培養(yǎng)基種類(lèi)對(duì)S.albulusPD-1的接合轉(zhuǎn)移效率具有很大影響。使用MS培養(yǎng)基接合轉(zhuǎn)移時(shí)的效率最高，為(4.0±0.5)×10-7，而ISP-4作為接合轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基并沒(méi)有轉(zhuǎn)化子長(zhǎng)出。因此，選定MS培養(yǎng)基為S.albulusPD-1接合轉(zhuǎn)移時(shí)使用的培養(yǎng)基。

2.3孢子熱激處理對(duì)S.albulusPD-1接合轉(zhuǎn)移效率的影響

除了培養(yǎng)基的選擇，對(duì)受體菌孢子進(jìn)行熱激處理能夠在一定程度上提高接合轉(zhuǎn)移的效率[19,21-22]。因?yàn)殒溍咕咦映墒旌蠹?xì)胞壁較厚，不易與大腸桿菌發(fā)生接合轉(zhuǎn)移；但經(jīng)過(guò)熱激處理后能夠促使孢子快速萌發(fā)，進(jìn)而能夠提高接合轉(zhuǎn)移的效率。根據(jù)鏈霉菌孢子常用熱激溫度，選取30～60 ℃下對(duì)孢子處理不同的時(shí)間來(lái)研究熱激處理對(duì)接合轉(zhuǎn)移效率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，在孢子進(jìn)行50 ℃熱激處理10 min時(shí)接合轉(zhuǎn)移效率最佳。太高和太低的熱激溫度均不利于S.albulusPD-1接合轉(zhuǎn)移的進(jìn)行，可能是由于太高的熱激溫度會(huì)對(duì)孢子造成損傷而太低的熱激溫度下孢子萌發(fā)不完全。

圖1　　　孢子熱激處理溫度對(duì)S. abulus PD-1　　　接合轉(zhuǎn)移效率的影響Fig.1　　　Heat shock treatment of spores on the trans-　　　conjugation efficiency of S. albulus PD-1

2.4其他處理?xiàng)l件對(duì)接合轉(zhuǎn)移效率的影響

除培養(yǎng)基種類(lèi)和熱激處理?xiàng)l件以外，培養(yǎng)基中MgCl2的濃度和供體菌/受體菌的比例同樣對(duì)接合轉(zhuǎn)移效率有著重要的影響。因此，后續(xù)對(duì)接合轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基中不同MgCl2的濃度(5、10、20、40、60和80 mmol/L)進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)初始條件的培養(yǎng)基中含10 mmol/L MgCl2時(shí)接合轉(zhuǎn)移效率最高。同樣，改變供體菌和受體菌的比例也未進(jìn)一步提高接合轉(zhuǎn)移的效率。最終以S.albulusPD-1孢子作為受體菌，50 ℃熱激處理10 min，使用含有10 mmol/L MgCl2的MS培養(yǎng)基進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移，其轉(zhuǎn)化效率最高，為(3.0±0.4)×10-6(圖2)。此外，抗生素覆蓋時(shí)間也對(duì)接合轉(zhuǎn)移效率同樣影響顯著：就本實(shí)驗(yàn)而言，16～18 h覆蓋效果最佳；時(shí)間少于16 h，接合轉(zhuǎn)移不完全；時(shí)間長(zhǎng)于18 h，由于菌絲體大量生長(zhǎng)，工作濃度的抗生素則無(wú)法完全抑制未發(fā)生接合轉(zhuǎn)移的S.albulusPD-1生長(zhǎng)。

圖2　　　 優(yōu)化前和優(yōu)化后S. albulus PD-1　　　接合子在平板上的生長(zhǎng)情況Fig.2　　　Transformation efficiency of conjugational　　　transfer before optimization and 　　　after optimization

2.5pIB139質(zhì)粒在S.albulusPD-1菌株中的穩(wěn)定性測(cè)試

為了檢測(cè)pIB139質(zhì)粒在S.albulusPD-1菌株中的穩(wěn)定性，將轉(zhuǎn)化子接種到不含抗生素的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)5 d，再轉(zhuǎn)接到新的不含抗生素的MS培養(yǎng)基中。轉(zhuǎn)接10代后，隨機(jī)挑選100個(gè)單菌落分別轉(zhuǎn)接到含有阿泊拉霉素的MS平板上，結(jié)果這些單菌落全部可以在含有阿泊拉霉素的MS平板上生長(zhǎng)。該實(shí)驗(yàn)表明pIB139質(zhì)粒在S.albulusPD-1中穩(wěn)定存在，并未發(fā)生質(zhì)粒丟失的情況。Hamano等[11]在此前的研究中截取S.albulusIFO14147內(nèi)源質(zhì)粒pNO33的復(fù)制子，并基于此復(fù)制子構(gòu)建了一系列在適用于S.albulusCR1(內(nèi)源質(zhì)粒pNO33被消除的S.albulusIFO14147菌株)的復(fù)制型質(zhì)粒。但是由于游離質(zhì)粒的不穩(wěn)定性，在使用該質(zhì)粒的過(guò)程中需要添加25 μg/mL新霉素來(lái)維持質(zhì)粒的存在，若投入工業(yè)化生產(chǎn)中， 10 t的發(fā)酵罐則需要添加175 g的新霉素(按裝液量70%計(jì)算)，而按照目前的市場(chǎng)價(jià)格，生產(chǎn)成本將增加714元；且若后期分離不當(dāng)，則會(huì)造成ε-PL產(chǎn)品的抗生素污染，將無(wú)法作為食品防腐劑應(yīng)用到食品生產(chǎn)中。pIB139質(zhì)粒能穩(wěn)定整合在S.albulusPD-1染色體上，因此使用pIB139質(zhì)粒對(duì)S.albulusPD-1基因組進(jìn)行修飾則可避免相應(yīng)抗生素的使用，節(jié)約生產(chǎn)成本，更適用于工業(yè)菌株規(guī)?；a(chǎn)。

2.6pIB139在S.albulusPD-1中整合位點(diǎn)的確定

pIB139屬于鏈霉菌基因整合型質(zhì)粒，不能單獨(dú)存在于細(xì)胞質(zhì)中，而是通過(guò)整合酶和attP位點(diǎn)整合到鏈霉菌基因組的attB位點(diǎn)上。目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)鏈霉菌的attB位點(diǎn)，并且該位點(diǎn)多存在于染色體縮合蛋白或者匹林類(lèi)似蛋白(SCO3798)中[23]。通過(guò)對(duì)S.albulusPD-1基因組序列的分析，發(fā)現(xiàn)了1個(gè)SCO3798相似蛋白(圖3(a))。為了進(jìn)一步驗(yàn)證此位點(diǎn)即為S.albulusPD-1中attB插入位點(diǎn)，以此位點(diǎn)兩翼的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR，獲得了pIB139質(zhì)粒的全部堿基以及部分attB序列(結(jié)果未列出)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明pIB139質(zhì)粒成功地插入到了S.albulusPD-1染色體的attB位點(diǎn)上(圖3(b))。后續(xù)的實(shí)驗(yàn)同時(shí)證明pIB139質(zhì)粒的引入并未引起S.albulusPD-1菌株表型以及ε-PL生產(chǎn)能力的變化，因此pIB139質(zhì)粒適用于S.albulusPD-1菌株改造。

圖3　　　pIB139插入S. albulus PD-1位點(diǎn)分析 Fig.3　　　Analysis of pIB139-based transconjugants of S. albulus PD-1

3結(jié)論

通過(guò)對(duì)上述幾種條件的探索，最終確定：以S.albulusPD-1孢子作為受體菌，50 ℃熱激處理10 min，使用含有10 mmol/L MgCl2的MS培養(yǎng)基進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移，且16 h后進(jìn)行抗生素覆蓋，其轉(zhuǎn)化效率最高，達(dá)到(3.0±0.4)×10-6；經(jīng)過(guò)傳代實(shí)驗(yàn)和PCR驗(yàn)證表明pIB139質(zhì)粒能夠穩(wěn)定存在于S.albulusPD-1染色體的attB位點(diǎn)上。在此研究中除了pIB139質(zhì)粒，也曾嘗試將復(fù)制型質(zhì)粒pIJ702和溫敏型質(zhì)粒pKC1139導(dǎo)入到S.albulusPD-1中，但并未得到相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)化子，猜測(cè)這些質(zhì)粒的復(fù)制子不能在S.albulusPD-1中行使其功能，只能作為自殺型質(zhì)粒存在，但這些質(zhì)粒攜帶同源片段可以進(jìn)行S.albulusPD-1特定基因的敲除工作。因此，筆者建立了相對(duì)高效的ε-PL生產(chǎn)菌株S.albulusPD-1的遺傳轉(zhuǎn)化體系，為將來(lái)ε-PL生產(chǎn)菌株在分子水平上的研究奠定了基礎(chǔ)。

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(責(zé)任編輯荀志金)

Genetic transformation system of aε-poly-l-lysine-producingStreptomycesalbulusstrain

SUN Zhuzhen1,2,FENG Xiaohai1,2,XU Zhaoxian1,2,CAO Changhong1,2,XU Zheng1,2,XU Hong1,2

(1. State Key Laboratory of Materials-Oriented Chemical Engineering,Nanjing Tech University,Nanjing 210009,China;

2. College of Food Science and Light Industry,Nanjing Tech University,Nanjing 211800,China)

Abstract：To study the biosynthetic mechanism of ε-Poly-l-lysine(ε-PL)in the producing strain,we developed a genetic transformation system for Streptomyces albulus PD-1,a well-known ε-PL-producing strain. Plasmid pIB139 was introduced into S. albulus PD-1 when Escherichia coli ET12567(pUZ8002)was used as a donor. After optimizing for conjugal transfer conditions,a maximal conjugation frequency of(3.0±0.4)× 10(-6) per recipient was obtained. Further test indicated that plasmid pIB139 was integrated into the attB site of S. albulus PD-1 chromosome,and the integration of plasmid pIB139 was stable after passing several generations. This inter-generic conjugal transformation system for S. albulus PD-1 will provide powerful tools to study ε-PL biosynthesis mechanism and to construct high ε-PL over-producers.

Keywords：ε-poly-l-lysine;Streptomyces albulus;genetic transformation system;pIB139

中圖分類(lèi)號(hào)：Q933；S476

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672-3678(2016)02-0027-06

作者簡(jiǎn)介：孫朱貞(1990—)，女，安徽馬鞍山人，研究方向：微生物學(xué)、發(fā)酵工程；徐虹(聯(lián)系人)，教授，E-mail:xuh@njtech.edu.cn

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(21476112)；江蘇省自然科學(xué)基金(BK20140933)；材料化學(xué)工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自主課題(ZK201403)

收稿日期：2015-11-09

doi:10.3969/j.issn.1672-3678.2016.02.006