Th17/Treg細胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表達及意義

施文娟　賈瑾堂　李彩東　王慧芬

730046　甘肅　蘭州市第二人民醫(yī)院傳染科(施文娟，賈瑾堂，李彩東)；解放軍第三○二醫(yī)院(王慧芬)

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·論著·

Th17/Treg細胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表達及意義

施文娟賈瑾堂李彩東王慧芬

730046甘肅蘭州市第二人民醫(yī)院傳染科(施文娟，賈瑾堂，李彩東)；解放軍第三○二醫(yī)院(王慧芬)

【摘要】目的探討乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者(HBV-ACLF)血清中Th17/Treg細胞因子(IL-17/IL-35)的表達及其臨床意義。方法收集蘭州市第二人民醫(yī)院2010年12月至2013年12月收治的HBV-ACLF患者共33例 (HBV-ACLF 組)，選取同期住院的慢性乙型肝炎(CHB)患者42 例(CHB組)和20 例健康體檢者(健康對照組)。采用ELISA 法檢測3組病例血清中IL-17與IL-35水平，同時檢測各項肝功能指標。結(jié)果HBV-ACLF組與CHB組患者IL-17、IL-35水平分別為(137.47±60.81)、(242.39±81.80)、(121.63±57.25)、(212.05±123.98) pg/mL，均高于健康對照組(16.37±8.47)、(33.6±24.63) pg/mL，(t=6.496、6.136、5.857、5.441，P<0.01)；HBV-ACLF組與CHB組IL-17、IL-35水平差異無統(tǒng)計學意義(t=0.987、1.034，P>0.05)。結(jié)論IL-17、IL-35的高水平表達可能與乙型肝炎慢加急性肝功能衰竭的發(fā)生有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】慢加急性肝衰竭；慢性乙型肝炎；Th17/Treg細胞因子

在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)基礎(chǔ)上發(fā)生的慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是我國傳染病死亡的重要原因之一。目前很多研究證實Th17參與到急性或慢性肝損害的炎性反應中，其分泌的IL-17能夠調(diào)控粒細胞的生成，阻斷細胞外病原體的入侵，同時和自身免疫性疾病關(guān)系密切，IL-17還能刺激細胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表達，因此，IL-17在HBV感染過程中能夠促進肝臟炎性反應，導致肝功能衰竭[1]。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是一組自然存在或來自于誘導性T細胞的細胞亞群，可以通過控制炎性反應(如暴發(fā)性肝炎、自身免疫性肝炎)來減輕肝損傷，IL-35作為唯一由Treg細胞特異性分泌的抑制性細胞因子，在機體抗感染、維持自身免疫耐受及避免自身免疫性疾病的發(fā)生等方面均有重要作用[2]。為進一步研究HBV-ACLF患者中Th17與Treg細胞因子的變化，研究比較了HBV-ACLF患者和CHB患者血清IL-17與IL-35的水平，現(xiàn)報道如下。

資料和方法

一、研究對象

選擇2010年12月至2013年12月蘭州市第二人民醫(yī)院的HBV-ACLF患者33例，其中男性28例，女性5例，年齡18～63歲，平均年齡(35.1±12.3)歲；選取同期住院的CHB患者42例，其中男性36例，女性6例，年齡19～61歲，平均年齡(35.7±10.1)歲；健康對照組為健康體檢者20名，其中男性16名，女性4名，年齡29～48歲，平均年齡(32.6±4.8)歲。CHB診斷標準參照《慢性乙型肝炎防治指南》[3]。HBV-ACLF 診斷標準參照《肝衰竭診療指南》[4]。排除其他病毒感染、免疫相關(guān)性疾病和免疫調(diào)節(jié)劑使用者導致的肝功能衰竭。

二、標本采集與檢測

收集患者和健康對照人群清晨空腹靜脈血5 mL, 分離血清, -80℃冰箱保存?zhèn)溆?。細胞因子IL-17、IL-35檢測采用雙抗體夾心ELISA法, 試劑盒由美國R&D公司生產(chǎn)，上海尚樂生物技術(shù)有限公司分裝，具體操作按說明書進行。

三、統(tǒng)計學方法

結(jié)果

一、臨床資料

3組研究對象性別構(gòu)成比與年齡均值經(jīng)統(tǒng)計學分析差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.035，P=0.983；F=0.523，P=0.596)；HBV-ACLF組與CHB組ALT、AST差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，TBil、Alb、PTA、INR、TC差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

HBV-ACLF組33例患者最終有26例完成隨訪，治愈好轉(zhuǎn)14例(早期5例，中期7例，晚期2例)，12例患者死亡，7例因病情加重放棄治療出院，9例患者住院期間合并細菌、真菌等感染。CHB組患者42例均臨床治愈或好轉(zhuǎn)出院。

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注：HBV-ACLF為乙型肝炎病毒相關(guān)慢加急性肝衰竭；CHB為慢性乙型肝炎；ALT為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；AST為天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；TBil為總膽紅素；Alb為白蛋白；PTA為凝血酶原活動度；INR為國際標準化比值；TC為總膽固醇

二、HBV-ACLF組、CHB組患者與HC 組IL-17、IL-35水平比較

3組研究對象IL-17、IL-35水平經(jīng)單因素方差分析，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2；3組研究對象組間進行LSD-t檢驗分析，結(jié)果顯示，ACLF組與CHB組患者IL-17、IL-35水平均高于健康對照組(P<0.05)，ACLF組與CHB組患者IL-17、IL-35水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3。

表2　3組研究對象IL-17、IL-35水平比較的

三、HBV-ACLF患者治愈好轉(zhuǎn)組與無效死亡組IL-17、IL-35水平比較

HBV-ACLF患者中治愈好轉(zhuǎn)組與無效死亡組血清中IL-17、IL-35水平經(jīng)t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表4。

表3　3組研究對象IL-17、IL-35檢測結(jié)果的LSD-t檢驗分析

表4　HBV-ACLF 患者治愈好轉(zhuǎn)組與

討論

Th17是一類在分化、生物學作用等方面都不同于Th1和Th2細胞的輔助性T淋巴細胞，以分泌IL-17為主要特征，IL-17作為一種強致炎因子可能參與了ACLF免疫反應，通過誘導中性粒細胞、NK細胞等至肝臟炎性部位，加重肝臟損傷。目前很多研究證實，IL-l7參與急性或慢性肝損害的炎性反應。Lemmers等[5]研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，酒精性肝病患者血漿IL-17水平明顯升高，外周血分泌IL-17的CD4+T淋巴細胞比例明顯升高，PBMC經(jīng)PHA刺激后IL-17分泌細胞的比例也明顯增加。Yasumi等[6]發(fā)現(xiàn)，IL-17的水平在急性肝損害患者和暴發(fā)性肝衰竭患者顯著升高，而且IL-17水平與凝血酶原時間有關(guān)，并指出IL-17可以作為急性肝損傷程度的一項指標。

Treg和Th17來源于同一原始CD4+T細胞，發(fā)揮與Th17相反的作用，防止機體發(fā)生免疫過激反應， IL-35是2007年底由Lauren等[7]研究發(fā)現(xiàn)并命名，它是目前唯一發(fā)現(xiàn)的由Treg分泌的抑制性細胞因子，與多種自身免疫性疾病如類風濕性關(guān)節(jié)炎等密切相關(guān)[8]，IL-35在感染性疾病中亦具有重要的作用。在急性感染時，IL-35可以通過誘導Th1細胞的增殖來清除病原體，另一方面也可以通過抑制Th17細胞的分化從而阻止過度的免疫反應對機體的免疫損傷[9]；慢性感染時，IL-35可刺激調(diào)節(jié)性T細胞的增殖，抑制效應性T細胞對機體的免疫損傷，但同時也造成感染的慢性化如慢性HBV感染等[10]。Stoop等檢測23例健康對照和9例HBV急性感染恢復期患者外周血中的Treg數(shù)量和功能，發(fā)現(xiàn)慢性HBV感染患者外周血中Treg數(shù)量明顯高于非感染人群。

目前已知，人類感染HBV后預后差異性很大，患者病情的進展與機體特異性T細胞反應強弱密切相關(guān)。超強的免疫應答被認為是慢加急性肝衰竭的重要發(fā)病機制之一。為進一步研究Th17/Treg細胞因在HBV-ACLF中的免疫作用機制，本研究觀察了IL-17與IL-35在例患者血清中的表達，并與CHB患者和健康人群進行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：HBV-ACLF與CHB患者血清中IL-17與IL-35水平明顯高于健康對照組，由此可推斷IL-l7與IL-35參與到慢性肝損害的炎性反應中，與目前的相關(guān)研究結(jié)論相符合[11-14]，但是HBV-ACLF與CHB兩組患者之間未見明顯差異，與陳麗等[2]的研究結(jié)果不符，可能與樣本量少有關(guān)。

總之，以上對IL-17與IL-35的研究提示Th17/Treg細胞因子與HBV-ACLF的發(fā)病有一定相關(guān)性，對IL-17與IL-35的研究有助于進一步了解Th17細胞與Treg細胞在慢性乙型肝炎以及慢加急性肝衰竭中的作用機制，并將為HBV-ACLF的免疫調(diào)控治療提供一定的理論基礎(chǔ)。

參考文獻

1 周雙南，張寧，李筠，等. HBV相關(guān)慢性肝衰竭患者白介素-17及白介素-6檢測分析. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2013，23：297-298.

2 陳麗，羅二平，黃小平，等. 乙型慢加亞急性肝衰竭患者血清白細胞介素-35的表達及其臨床意義. 實用醫(yī)學雜志，2013,29：2800-2802.

3 中華醫(yī)學會肝病學分會，中華醫(yī)學會感染病學分會. 慢性乙型肝炎防治指南(2010年版). 肝臟，2011，16: 2-16.

4 中華醫(yī)學會感染病學會分會肝衰竭與人工肝學組，中華醫(yī)學會肝病學分會重型肝病與人工肝學組. 肝衰竭診療指南. 中華肝臟病雜志，2006，14:643- 646.

5 Lemmers A, Moreno C, Custot T, el al.The interleukin-17 pathway is involved in human alcoholic liver disease ．Hepatology, 2009,49:646-657.

6 Yasumi Y, Takikawa Y, Eedo R, el al.Interleukin-1 7 as a new marker of severity of acute hepatic injury ．Hepatol Res，2007，37：248-254.

7 Lauren WC，Creg JW，Timothy TK，et al. The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T-cell function. Nature，2007，229: 566-569.

8 Neurath MF. IL-12 family members in experimental colitis. Mucosal Immunol, 2008，1(suppl 1):S28-S30.

9 Seyerl M，Kirchberger S，Majdic O，et al. Human rhinoviruses induce IL-35-producing Treg via induction of B7-H1(CD274)and sialoadhesin (CD169)on DC. Eur J Immunol，2010,40：321-329.

10Ning-Wei Z. Interleukin(IL)-35 is raising our expectation. Rev Med Chil，2010,138: 758-766.

11李晨，王慧芬，萬謨彬. HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者體內(nèi)細胞因子表達及動態(tài)變化的研究.傳染病信息，2011,24：151-155.

12甄沛林，鄧洪. 血清中IL-6和IL-10變化與慢性乙型肝炎急性發(fā)作導致肝衰竭的關(guān)系.熱帶醫(yī)學雜志，2010,10：842-844.

13徐燕，杜文軍，秦來英，等. 白細胞介素17在乙型肝炎肝纖維化中的表達及意義.細胞與分子免疫學雜志，2009，12：279-280.

14陳川英，程全紅，涂相林，等. 乙型重型肝炎患者細胞因子水平及其與預后的關(guān)系.實用肝臟病雜志，2009,12：279-280.

(本文編輯：錢燕)

Study on serum levels of Th17/ Treg cytokines in HBV-related acute-on-chronic liver failure patientsSHIWen-juan，JIAJin-tang，LICai-dong，WANGHui-fen.DepartmentofInfectiousDiseases,theSecondPeople'sHospitalofLanzhou,Gansu730046,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression levels of Th17/Treg cytokines in HBV-related acute-on-chronic liver failure (HBV-ACLF) patients and its clinical significance. MethodsNinety-five patients admitted in Lanzhou Second People's Hospital from December 2010 to December 2013 were enrolled, including 33 HBV-ACLF patients (HBV-ACLF group), 42 chronic hepatitis B patients (CHB group) and 20 healthy people (HC group). Enzyme-linked immune-sorbent assay (ELISA) was applied to detect the levels of IL-17 and IL-35 among groups, respectively. Meanwhile, measurement of liver function parameters was carried out. ResultsLevels of IL-17 and IL-35 in both HBV-ACLF group (137.47±60.81 and 242.39±81.80 pg/mL) and CHB group (121.63±57.25 and 212.05±123.98 pg/mL) were higher than those in HC group (16.37±8.47 and 33.6±24.63 pg/mL) (t=6.496, 6.136, 5.857 and 5.441, P<0.01), respectively. There were no significant differences in IL-17 and IL-35 levels between HBV-ACLF group and CHB group (t=0.987 and 1.034, P>0.05). ConclusionHigh expression levels of IL-17 and IL-35 might be associated with occurrence of HBV-ACLF.

【Key words】Acute-on-chronic liver failure；Chronic hepatitis B；Th17/Treg cytokines

(收稿日期：2015-09-18)