添加氧化石墨烯對義齒基托樹脂細(xì)胞毒性及抗菌性能影響的研究*

吳雨宸 劉 凱 蘇儉生

長期佩戴義齒往往會(huì)影響口腔微生態(tài)平衡，沉積于義齒基托表面上的菌斑及其毒素產(chǎn)物可導(dǎo)致基牙齲病、牙周病及義齒性口炎等口腔疾病，且與細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、吸入性肺炎和胃腸道感染等多種全身疾病相關(guān)［1］，提高義齒的抗菌性一直是國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。向基托中添加抗菌劑是提高義齒抗菌性能的常用方法之一［2-4］，近年來，隨著納米材料的發(fā)展，納米抗菌劑高效、長效、安全性高等獨(dú)特性能引起了學(xué)者們的關(guān)注［5］。氧化石墨烯（Grapheneoxide，GO）作為一種新型納米材料，是石墨烯功能化后的衍生物。2010年我國中科院Hu等［6］首次報(bào)道了GO具有抗菌作用，此后關(guān)于GO抗菌性能的研究不斷深入［7-9］，這些研究為GO成為新一代納米抗菌劑提供了理論依據(jù)［10］。目前，少有將GO作為抗菌劑添加到義齒基托樹脂聚甲基丙烯酸甲酯（Polymethylmethacrylate，PMMA）中的研究報(bào)道。

本研究將不同濃度的GO添加PMMA中，以小鼠成纖維細(xì)胞L929為代表，探究其細(xì)胞毒性；并以齲病、牙周病、義齒性口炎的主要致病菌變形鏈球菌、伴放線放線桿菌、白色念珠菌為代表，探究其體外抗菌效果，從而為臨床抗菌義齒基托樹脂的選擇提供參考。

1.材料和方法

1.1 材料和試劑PMMA熱凝義齒基托粉（Ⅰ型Ⅰ類）及基托液（天津登士柏牙科有限公司）；單層氧化石墨烯粉末（片徑500 nm-5 μm，厚度0.8-

1.2 nm，單層率~99%，純度~99%）（南京先豐納米材料科技有限公司）；小鼠成纖維細(xì)胞L929細(xì)胞株（上海拜力生物科技有限公司）；變形鏈球菌（Streptococcusmutans，ATCC25175）、伴放線放線桿菌（Actinobacillusactinomycetemcomitans，ATCC43717）（北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院）；白色念珠菌（Candidaalbicans，SC5314）（同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院抗感染藥物研究實(shí)驗(yàn)室安毛毛教授惠贈(zèng)）；腦心浸液肉湯瓊脂培養(yǎng)基、培養(yǎng)液（BHI）、哥倫比亞血瓊脂平板培養(yǎng)基（CBA）、沙氏培養(yǎng)基（SDA）、RPMI1640培養(yǎng)液（環(huán)凱微生物科技公司）；CCK-8細(xì)胞毒性/增殖檢測試劑盒（Dojindo，日本）；厭氧產(chǎn)氣袋、厭氧密封罐（日本三菱化學(xué)株式會(huì)社）；LIVE/DEAD細(xì)胞活性檢測試劑盒（ThermosFisher，美國）；胎牛血清FBS、DMED培養(yǎng)液（Gibco，美國）；0.25%胰蛋白酶（Sigma，美國）；熒光倒置顯微鏡（Zeiss，德國）；場發(fā)射掃描電子顯微鏡（Hitachi，F(xiàn)E-SEM，SU8010，日本）；多功能酶標(biāo)儀（BioTek，美國）；傅里葉變換紅外光譜儀（ThermoScientific，NicoletiS5，美國）。

1.2 添加不同濃度GO的PMMA樣品制備 分別按照GO/PMMA 質(zhì)量比為0wt.%、0.25wt.%、0.5wt.%、1.0wt.%的比例稱取適量GO置于去離子水中，超聲攪拌30分鐘后加入純PMMA干燥粉末并繼續(xù)攪拌1小時(shí)，將混合懸液置于烘箱中干燥后得到混合粉末，將粉末分別裝入微型球磨儀中球磨100分鐘，得到不同濃度GO與PMMA均勻混合粉末。根據(jù)QB/T2591-2003標(biāo)準(zhǔn)［11］，參照熱凝義齒基托樹脂制作工藝，制備出規(guī)格為2.0cm×2.0cm×2.0mm的樣品每個(gè)濃度組各30個(gè)，所有樣品在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行滅菌。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品表征檢測 每個(gè)濃度組各取1個(gè)樣品表面噴金處理后，使用掃描電子顯微鏡（SEM）進(jìn)行表面形貌觀察，并通過傅里葉變換紅外光譜儀對樣品材料的官能團(tuán)進(jìn)行檢測。

1.4 細(xì)胞毒性檢測

1.4.1 樣品浸提液制備 根據(jù)GB/T16886.5-2017標(biāo)準(zhǔn)［12］，按1.2 cm2/mL的浸提比例，從每個(gè)濃度組各取15個(gè)樣品放入120mL含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液，置于37 ℃培養(yǎng)箱分別浸提24h、48h后取出樣品，過濾浸提液后調(diào)整PH至7.4獲得樣品浸提液。以含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液作為陰性對照（空白對照），不添加GO的PMMA樣品浸提液作為陽性對照，分別添加0.25wt.%、0.5wt.%、1.0wt.%GO的PMMA樣品浸提液為實(shí)驗(yàn)組。

1.4.2 CCK-8 法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞毒性評級取對數(shù)生長期的L929細(xì)胞配置成濃度為5x104/mL的細(xì)胞懸液，接種于3塊96孔培養(yǎng)板，每組8孔、每孔100μL，在37 ℃、5%CO2條件下細(xì)胞貼壁培養(yǎng)24h后，吸棄原液，PBS 洗滌2次后分別加入各組浸提液100μL。在第1、3、5d 末各取一培養(yǎng)板，每孔加入10μLCCK-8檢測液，于37 ℃恒溫箱內(nèi)孵育2h后用酶標(biāo)儀于450 nm處測定吸光度值（OD450Value)，計(jì)算細(xì)胞相對增殖率（RelativeGrowthRate，RGR），RGR=樣本組吸光光度平均值/空白對照組吸光光度平均值×100%，根據(jù)GB/T16886.5-2017中6級毒性評級標(biāo)準(zhǔn)對材料進(jìn)行細(xì)胞毒性分級（cytoxicityscale，CTS)（表1）。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

表1 細(xì)胞毒性分級標(biāo)準(zhǔn)

1.4.3 活/死細(xì)胞雙染色法細(xì)胞活性檢測 取5x104/mL的L929細(xì)胞懸液500μL接種于24孔板,培養(yǎng)方法同1.4.2,培養(yǎng)2d后制備濃度為1×105/mL的各組細(xì)胞懸液。將5μL鈣黃綠素-AM（組分A）和20μL乙錠二聚體-1（組分B）加入到10mLPBS中配置雙染色液。取各組細(xì)胞懸液200μL置于EP管中,每管加入100μL染色液,25 ℃避光孵育30 min。然后將染色后的各組細(xì)胞懸液分別滴加于載玻片上,置于熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,ImageJ軟件分析,細(xì)胞存活率=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)。

1.5 抗菌性能檢測

1.5.1 實(shí)驗(yàn)菌液制備 分別復(fù)蘇變形鏈球菌、伴放線放線桿菌、白色念珠菌凍干菌株得到菌懸液。采用平板劃線法進(jìn)行轉(zhuǎn)接活化,采用連續(xù)轉(zhuǎn)接2次之后的新鮮菌液培養(yǎng)物,挑取變形鏈球菌和伴放線放線桿菌單菌落混懸于BHI培養(yǎng)液中,37 ℃厭氧培養(yǎng)24h;挑取白色念珠菌單菌落混懸于RPMI1640培養(yǎng)液中,30 ℃需氧培養(yǎng)12h。血球計(jì)數(shù)板分別配置密度為1×105CFU/mL的3種菌液為實(shí)驗(yàn)菌液,備用。

1.5.2 抗菌率測定 根據(jù)QB/T2591-2003標(biāo)準(zhǔn),采用薄膜密貼法進(jìn)行抗菌性能測試。每個(gè)濃度組各取3個(gè)樣品分別置于12個(gè)滅菌平皿中,分別取200μL變形鏈球菌/伴放線放線桿菌/白色念珠菌實(shí)驗(yàn)菌液滴加在各樣品表面,用聚丙烯薄膜鋪平覆蓋樣品表面,使菌液均勻接觸樣品。在37 ℃下厭氧培養(yǎng)（變形鏈球菌和伴放線放線桿菌）48h/30 ℃下需氧培養(yǎng)（白色念珠菌）24h。而后在每個(gè)平皿中加入20mL 無菌生理鹽水洗脫液,反復(fù)清洗樣品及聚丙烯薄膜,充分混勻洗脫液并進(jìn)行倍比稀釋,每個(gè)濃度各取100μL分別接種至BHI瓊脂培養(yǎng)基（變形鏈球菌）/CBA培養(yǎng)基（伴放線放線桿菌）/SDA培養(yǎng)基（白色念珠菌）上,厭氧培養(yǎng)48h（變形鏈球菌和伴放線放線桿菌）/需氧培養(yǎng)24h（白色念珠菌）。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并計(jì)算抗菌率。抗菌率R%=（A-B）/A×100,式中R抗菌率（%）,A：對照樣品平均回收菌數(shù)（CFU/片）,B：抗菌樣品平均回收菌數(shù)（CFU/片）,參照QB/T2591-2003,抗菌率r≥99%的抗菌樹脂可以報(bào)告有強(qiáng)抗菌作用,r≥90%的抗菌樹脂可以報(bào)告有抗菌作用。

1.5.3 樣品表面細(xì)菌形態(tài)觀察 樣品表面細(xì)菌培養(yǎng)方法同1.5.2,培養(yǎng)結(jié)束后棄去菌液及覆蓋膜,每個(gè)濃度組各取1個(gè)樣品,表面用PBS液輕柔漂洗3次后加入5 ml2.5 %戊二醛于4 ℃過夜固定,再次PBS液輕柔漂洗3次,乙腈梯度脫水、真空干燥、噴金、掃描電鏡下觀察細(xì)菌形態(tài),隨機(jī)選取視野并拍照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS24.0對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)分布及方差齊性檢驗(yàn)后使用,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示,采用單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)比較各組間差異,P＜0. 05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 表征檢測

2.1.1 樣品表面形貌 通過掃描電鏡SEM觀察樣品表面形貌,不添加GO的PMMA表面光滑平坦（圖1a）;添加0.25wt.%GO的PMMA表面略粗糙,未見明顯顆?；驁F(tuán)塊（圖1b）;添加0.5wt.%GO的PMMA表面觀察到少量類似玻璃顆粒狀形貌（圖1c）;添加1.0wt.%GO的PMMA表面呈現(xiàn)團(tuán)塊聚集現(xiàn)象,局部出現(xiàn)褶皺和凹坑（圖1d）。

圖1 添加不同濃度GO的PMMA樣品表面SEM形貌（x1000）

2.1.2 傅里葉變換紅外光譜分析 將添加不同濃度GO的PMMA樣品進(jìn)行傅里葉變換紅外光譜分析,可檢測到PMMA 和GO 官能團(tuán) 如-CH2（2948 cm-1）、C=O（1717 cm-1）、C-H（1452 cm-1）、C-O-C（1179 cm-1）和C-O（1084 cm-1）的特征峰值,且四組波形未見明顯差異（圖2）。

圖2 添加不同濃度GO的PMMA樣品傅里葉變換紅外光譜圖

表2 各組樣品的24h、48h浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞1、3、5天后的CCK-8測試OD450值（±s)

表2 各組樣品的24h、48h浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞1、3、5天后的CCK-8測試OD450值（±s)

注：a：與陰性對照組相比,P＜0.05;b：與陽性對照組相比,P＜0.05

GO添加量（wt.%）陰性對照0 0.25 0.5 1.0 24h 3天1.595±0.292 1.473±0.166 1.405±0.460 1.657±0.421 1.596±0.422 48h 3天1.315±0.156 1.344±0.288 1.455±0.167 1.469±0.145 1.628±0.214ab 5天2.082±0.311 2.388±0.204a 2.316±0.247 2.273±0.372 2.393±0.066a 1天0.544±0.012 0.535±0.026 0.558±0.029 0.566±0.011b 0.562±0.027b 5天2.421±0.227 2.394±0.120 2.451±0.089 2.582±0.184 2.442±0.205 1天0.389±0.043 0.393±0.021 0.397±0.024 0.396±0.033 0.381±0.015

表3 各組樣品的24h、48h浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞1、3、5天后的細(xì)胞相對增殖度和毒性反應(yīng)分級

2.2 細(xì)胞毒性

2.2.1 CCK-8檢測結(jié)果 用陰性對照組、陽性對照組（0wt.%）和各實(shí)驗(yàn)組樣品的24h、48h浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞1、3和5天后進(jìn)行CCK-8檢測,OD450結(jié)果表明：樣品在24h浸提液作用下,第1天觀察期末各組OD450為0.535-0.566,其中0.5wt.%和1.0wt.%兩組OD450值均顯著高于陽性對照組（P＜0.05）;第3天、5天觀察期末各組OD450為1.405-1.657和2.394-2.582,組間無顯著差異（P＞0.05）。樣品在48h浸提液作用下,1天觀察期末各組OD450為0.381-0.397,組間無顯著差異（P＞0.05）;3天觀察期末各組OD450為1.315-1.628,其中1.0wt.%組OD450顯著高于陰性對照組和陽性對照組（P＜0.05）;5天觀察期末各組OD450為2.082-2.393,其中0wt.%組和1.0wt.%組OD450顯著高于陰性對照組（P＜0.05）, 見表2。

2.2.2 細(xì)胞毒性分級24h 浸提液作用1 天后,0wt.%組細(xì)胞毒性分級為1級,其余各組為0級;作用3天后,0wt.%組和0.25wt.%組細(xì)胞毒性分級為1級,其余組為0級;作用5天后,0wt.%組細(xì)胞毒性分級為1級,其余各組為0級。48h浸提液作用1天后,1.0wt.%組細(xì)胞毒性分級為1級,其余各組為0級;作用3天和5天后,各組細(xì)胞毒性分級均為0級。

2.2.3 活/死細(xì)胞雙染色結(jié)果 通過熒光顯微鏡觀察,活細(xì)胞被標(biāo)記為綠色,死細(xì)胞被標(biāo)記為紅色（圖3）。空白對照組、0wt.%、0.25wt.%、0.5wt.%、1.0wt.%組的L929細(xì)胞存活率分別為98.76%、98.85%、98.70%、98.73%、98.83%（圖4）,各組間無顯著差異（P＞0.05）。

圖3 各組樣品浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞2天后活/死細(xì)胞雙染色觀察（熒光顯微鏡,x100）

圖4 各組樣品浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞2天后細(xì)胞存活率

圖5 各組樣品對口腔3種常見致病菌的抗菌效果

2.3 抗菌性能

2.3.1 菌落計(jì)數(shù)和抗菌率 各組樣品對口腔3種常見致病菌的抗菌效果顯示,對照組菌落多且密集,實(shí)驗(yàn)組菌落少且稀疏（圖5）。計(jì)算各組樣品對3種菌的抗菌率,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組變形鏈球菌、伴放線放線桿菌和白色念珠菌的菌落數(shù)均顯著降低（P＜0.05）,且隨著GO添加濃度的依次增加,各實(shí)驗(yàn)組菌落數(shù)依次降低,組間有顯著差異（P＜0.05）。0.5wt.%組對變形鏈球菌、伴放線放線桿菌和白色念珠菌的抗菌率分別為92.48%、96.04%、94.01%,具有抗菌作用;1.0wt.%組對變形鏈球菌、伴放線放線桿菌和白色念珠菌的抗菌率分別為99.13%、99.62%、99.05%,具有強(qiáng)抗菌作用（表4）。

表4 各組樣品對口腔3種常見致病菌的抗菌率（菌落數(shù)單位：105CFU/mL，±s）

表4 各組樣品對口腔3種常見致病菌的抗菌率（菌落數(shù)單位：105CFU/mL，±s）

注：*：與其他各組相比,P＜0.05

GO添加量（wt.%）0 0.25 0.5 1.0變形鏈球菌S.m菌落數(shù)42.50±0.89*5.82±0.66*3.20±0.09*0.37±0.01*R（%）-86.31 92.48 99.13伴放線放線桿菌A.a菌落數(shù)36.65±0.75*5.49±0.09*1.45±0.06*0.14±0.01*R（%）-85.03 96.04 99.62白色念珠菌C.a菌落數(shù)69.17±4.54*17.53±0.54*4.14±0.10*0.66±0.05*R（%）-74.66 94.01 99.05

2.3.2 樣品表面菌形貌 通過掃描電鏡SEM觀察樣品表面菌形貌,變形鏈球菌在對照組樣品表面生長良好,細(xì)菌光滑飽滿呈鏈球狀（圖6a黃色箭頭）,而在實(shí)驗(yàn)組樣品表細(xì)菌膜出現(xiàn)破裂,部分菌體被完全切割分裂（圖6a紅色箭頭）;伴放線放線桿菌在對照組樣品表面生長良好,細(xì)菌呈短桿狀,表面菌毛呈放射狀（圖6b黃色箭頭）,而在實(shí)驗(yàn)組樣品表面細(xì)菌菌體變形,菌膜破裂,菌內(nèi)容物外泄,呈死亡狀態(tài)（圖6b紅色箭頭）;白色念珠菌在對照組樣品表面生長良好,伸出真菌菌絲（圖6c黃色箭頭）,而在對照組樣品表面菌體形狀畸變,菌膜凹陷破損（圖6c紅色箭頭）。

圖6 各組樣品表面口腔3種常見致病菌SEM形貌（Lowx3000;Highx25000）

3.討論

義齒的清潔和抗菌是影響其使用效果的重要因素，化學(xué)法、機(jī)械法、等傳統(tǒng)清潔方法存在刺激口腔粘膜、腐蝕金屬部件、改變樹脂顏色等諸多弊端［13-15］。通過向義齒基托中添加銀類和光催化類（二氧化鈦、氧化鋅等）無機(jī)抗菌劑的方法可使其抗菌性能得到顯著提升，但同時(shí)存在著細(xì)胞毒性以及對義齒機(jī)械性能產(chǎn)生負(fù)面影響的可能［2-4,16］。目前，兼顧生物安全性、機(jī)械性等綜合性能較佳的抗菌義齒基托仍是廣大學(xué)者研究的熱點(diǎn)。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，石墨烯基納米材料（graphenebasednanomaterials，GBNs）可以通過多種機(jī)制對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌［17,18］甚至真菌病原體［19］產(chǎn)生廣譜抗菌活性。在各類GBNs 中，氧化石墨烯（Grapheneoxide，GO）因具有邊緣切割效應(yīng)、細(xì)胞包埋能力和氧化應(yīng)激反應(yīng)等多重抗菌機(jī)制［20-23］，而被認(rèn)為是目前最有效的新興納米抗菌材料［10］。本實(shí)驗(yàn)通過掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組樣品表面細(xì)菌和真菌多呈現(xiàn)出菌體變形、菌膜破裂等死亡狀態(tài)，尤其是實(shí)驗(yàn)組變形鏈球菌出現(xiàn)了菌體被整齊切割分裂的現(xiàn)象，故猜測，本實(shí)驗(yàn)中GO的抗菌機(jī)制主要在于其銳利的邊緣直接接觸菌體并對菌膜造成物理切割損傷從而達(dá)到殺菌作用，但若要確切闡述其抗菌原理尚需日后進(jìn)行更深入的機(jī)制研究。

GO片層表面和邊緣富含大量含氧基團(tuán)，使得其在水溶液及有機(jī)溶劑中的溶解性增大、在基體中的分散性增強(qiáng)，從而更易于與聚合物制備成復(fù)合材料［24］，且常作為增強(qiáng)劑來改善材料的機(jī)械性能。但高濃度的GO分散性變差，會(huì)在聚合物基體中形成大片狀類似“團(tuán)聚”的現(xiàn)象，反而對其機(jī)械性能產(chǎn)生負(fù)面影響［25,26］。Paz等人［27］將GO添加至自固化PMMA中，檢測結(jié)果表明，當(dāng)GO 濃度為0.25wt.%時(shí)，GO-PMMA 的機(jī)械性能達(dá)到最強(qiáng)，而1.0wt.%GO-PMMA的機(jī)械性能出現(xiàn)減弱。本實(shí)驗(yàn)將GO添加到PMMA 中，通過掃描電鏡觀察到濃度低于1.0wt.%的GO可在PMMA中均勻分散，而濃度達(dá)到1.0wt.%時(shí)則出現(xiàn)明顯團(tuán)聚現(xiàn)象，該現(xiàn)象與以上研究結(jié)果相符。傅里葉光譜分析顯示，添加了不同濃度GO后各組樣品波形無明顯改變，說明本實(shí)驗(yàn)采用球磨混勻法將GO添加到PMMA中屬于物理性添加，二者并未產(chǎn)生化學(xué)鍵結(jié)合反應(yīng)。

多數(shù)抗菌劑在產(chǎn)生抗菌作用的同時(shí)難免對正常細(xì)胞有毒副作用，GO也不例外［28,29］。然而有學(xué)者認(rèn)為，將GO添加到到聚合物中并使其被包裹于基質(zhì)內(nèi)不易溶出時(shí)，GO與細(xì)胞的直接接觸作用減弱，從而能降低其細(xì)胞毒性［30］。Pinto等人［31］將GO添加到聚乳酸（PLA）中制備GO/PLA復(fù)合薄膜，其上小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的粘附和增殖甚至高于PLA薄膜。本實(shí)驗(yàn)通過制備各組樣品24h和48h兩個(gè)時(shí)間段浸提液來模擬義齒佩戴后的口腔唾液環(huán)境。CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組對L929細(xì)胞增殖無抑制作用，細(xì)胞毒性評價(jià)為無毒性；活/死細(xì)胞雙染色結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組對L929細(xì)胞活性無影響。分析其原因，可能是因?yàn)镚O被包裹于PMMA基質(zhì)中不易溶出，各組樣品浸提液中GO含量較少從而沒有產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性。

本實(shí)驗(yàn)采用薄膜密貼法將實(shí)驗(yàn)菌液與基托表面直接接觸，模擬了臨床中細(xì)菌菌斑沉積于義齒基托表面的情景?？咕鷻z測結(jié)果顯示，與對照組相比，各實(shí)驗(yàn)組對變形鏈球菌、伴放線放線桿菌和白色念珠菌均具有顯著抗菌作用，且隨著GO添加濃度的增加，抗菌作用得到增強(qiáng)。同樣的，Lee 等人［32］實(shí)驗(yàn)證明，將GO 添加到樹脂基質(zhì)中可表現(xiàn)出對白色念珠菌生長和粘附的顯著抑制作用；Bregnocchi 等人［33］研究發(fā)現(xiàn)添加GO 的樹脂粘結(jié)劑對變形鏈球菌的粘附、生長及生物膜的形成均具有顯著的抑制作用；He 等人［17］研究發(fā)現(xiàn)，GO 可顯著抑制變形鏈球菌、牙齦普林單胞菌和具核桿菌的生長，且GO 濃度越高，抗菌作用越強(qiáng)。在本實(shí)驗(yàn)中，0.5wt.%組可報(bào)告為“具有抗菌作用”，1.0wt.%組可報(bào)告為“具有強(qiáng)抗菌作用”。結(jié)合GO 添加濃度為0.5wt.%時(shí)尚未出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象，將有利于PMMA 機(jī)械性能的提升，且GO 添加濃度越高對PMMA 樹脂顏色影響越大，綜合抗菌性能、機(jī)械性能以及顏色美觀考慮，本研究認(rèn)為GO 添加量為0.5wt.%時(shí)最合適。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.5wt.%GO的PMMA義齒基托樹脂對口腔常見致病菌具有顯著抗菌作用并且無細(xì)胞毒性，這在指導(dǎo)抗菌義齒的研發(fā)方面具有很大的研究意義，相信隨著該研究技術(shù)的成熟與改進(jìn)，添加GO的PMMA有望應(yīng)用于臨床成為新型抗菌義齒基托材料。未來添加GO的義齒基托顏色的改善、抗菌長效性的檢驗(yàn)、抗菌機(jī)制的研究以及一系列生物安全性評價(jià)等仍需進(jìn)一步深入。