CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達及臨床病理分析

羅華榮，柯莽，周濤，徐鋮，包衛(wèi)光

（溫州醫(yī)科大學附屬臺州醫(yī)院，浙江 臺州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.組織庫）

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CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達及臨床病理分析

羅華榮1，柯莽2，周濤1，徐鋮1，包衛(wèi)光3

（溫州醫(yī)科大學附屬臺州醫(yī)院，浙江 臺州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.組織庫）

[摘 要]目的：檢測CD147和Survivin在人腎細胞癌組織中的表達，以探討二者在腎細胞癌中表達的相關性及其與預后的關系。方法：利用組織芯片技術構建85例腎細胞癌與35例癌旁正常腎組織芯片，應用免疫組織化學Envision法檢測CD147和Survivin在腎癌組織中的表達。結果：腎細胞癌組中CD147和Survivin的表達率分別為65.7%（23/35）和71.4%（25/35），顯著高于癌旁對照組（P＜0.01）。CD147在腎細胞癌中的表達隨著腫瘤大小與病理分級的升高而升高（P＜0.05）；Survivin在腎細胞癌中的表達隨著病理分級與臨床分期的升高而升高（P＜0.05）。CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達具有弱一致性（Kappa=0.388，P ＜0.05）。Logistic回歸分析顯示Survivin的表達是腎細胞癌的獨立危險因素（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05）。結論：CD147和Survivin在腎細胞癌中均有過量表達，可能參與了腎癌的發(fā)生發(fā)展過程，兩者聯(lián)合檢測可用于評估腎細胞癌的惡性程度和預后。

[關鍵詞]腎細胞癌；組織芯片；免疫組織化學；CD147；Survivin

CD147又稱為細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），是一種新的細胞表面黏附分子，介導細胞間及細胞與間質間的黏附作用，可通過多種途徑刺激腫瘤細胞及周圍間質成纖維細胞合成并釋放基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs），降解細胞外基質，促進腫瘤的浸潤與轉移。生存素（Survivin）是一種獨特的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAPs），選擇性地表達于大多數(shù)腫瘤細胞中，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。我們采用免疫組織化學方法檢測CD147和Survivin在腎細胞癌組織中的表達，旨在探討二者與腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展及預后的關系。

1　材料和方法

1.1材料來源 收集本院病理科2005年1月至2008 年12月間手術切除腎細胞癌石蠟包埋標本85例，其中男57例，女28例，男女比例為2.04:1，年齡最小17歲，最大80歲，平均56.3歲。標本按2004年WHO腎細胞癌的病理學分類分為：透明細胞癌63例，乳頭狀腎細胞癌12例，嫌色細胞癌6例，Bellini集合管癌2例，黏液樣小管狀和梭形細胞癌1例，多囊性腎細胞癌1例。第1種類型歸為經典型腎細胞癌組，共63例；后5種類型歸為非經典型腎細胞癌組，共22例。核分級按Fuhrman分級標準：I級核33例，II級核30例，III級核15例，IV級核7例。腫瘤大?。耗[瘤小于5 cm 32例，5～7 cm 28例，大于7 cm 25例。按Robson法臨床分期分為：I期45例，II期30例，III期9例，IV期1例。因標本限制等客觀原因，隨機選取了35例腎癌旁（距腎癌組織邊緣＞5 cm）正常腎組織作癌旁對照組。有完整隨訪資料的患者共72例，所有標本的患者術前均未接受化療及放療。

1.2實驗試劑 所用一抗CD147試劑為鼠抗人單克隆抗體，購自北京中杉金橋生物技術有限公司。Survivin試劑為兔抗人多克隆抗體，購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。EnVision檢測試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自Dako公司。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3實驗方法 所有標本均經10%中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，使用組織芯片打孔儀穿取合格組織芯轉移到受體蠟塊，構建和制備腎癌及癌旁正常對照標本組織芯片。將制成的組織芯片行4 μm連續(xù)切片，進行HE及免疫組織化學染色。免疫組織化學采用EnVision兩步法，高溫高壓抗原修復，DAB顯色。

1.4結果判定 CD147以細胞膜或細胞質出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，Survivin主要以細胞質出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，偶見于細胞核。觀察5個以上高倍視野，計數(shù)不少于1 000個細胞中的陽性細胞數(shù)。陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，陽性細胞數(shù)≥10%為陽性。

1.5統(tǒng)計學處理方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計。計數(shù)資料單因素比較采用x2檢驗，采用Kappa檢驗評判兩種抗體表達的一致性，危險因素分析采用logistic回歸分析，通過向后剔除法擬合腎細胞癌的logistic回歸模型，獲得比值比（odds ratio，OR）和95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）。以α=0.05為顯著性檢驗水準。

2　 結果

2.1組織芯片 共制備了3個組織芯片，每個芯片包含42個位點，比較原HE切片，剔除切片不全及圖象不良者，實際包含85例腎細胞癌組織及35例癌旁腎組織。

2.2免疫組織化學染色結果 CD147在腎細胞癌中的總陽性率為71.8%（61/85），主要在細胞膜或細胞質表達，染色較強（見圖1-2）。CD147在35例有癌旁對照的腎細胞癌組中的陽性率為65.7%（23/35），癌旁對照組僅10例呈陽性表達，陽性率為28.6%（10/ 35），主要表現(xiàn)為腎小管上皮細胞膜或細胞質的陽性表達，腎細胞癌組CD147陽性率顯著高于癌旁對照組（P＜0.01）。Survivin在腎細胞癌組織中的總陽性表達率為76.5%（65/85），主要在腎細胞癌的細胞質表達（見圖3），部分病例也可見到細胞質和細胞核同時著色，且染色較強（見圖4）。Survivin在35例有癌旁對照的腎細胞癌組中的陽性率為71.4%（25/ 35），癌旁對照組無一例表達，腎細胞癌組Survivin陽性率顯著高于癌旁對照組（P＜0.01）。CD147在腎細胞癌中的陽性率隨著腫瘤大小和病理分級的升高而升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。不同組織學分型和臨床分期間CD147的表達差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Survivin在腎細胞癌中的陽性表達率隨著病理分級和臨床分期的升高而升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Survivin在不同腫瘤大小和組織學分型間的表達均無顯著性差異（P ＞0.05）。見表1。

圖1　CD147在腎細胞癌中呈細胞膜和細胞質強陽性表達（EnVision，×100）

圖2　CD147在腎細胞癌中呈細胞膜陽性表達（EnVision，×200）

圖3　Survivin在腎細胞癌中呈細胞質陽性表達（EnVision，×200）

圖4　Survivin在腎細胞癌中呈細胞質和細胞核強陽性表達（EnVision，×200）

表1　CD147和Survivin表達與腎細胞癌臨床病理因素的關系[n（%）]

2.3CD147和Survivin在腎細胞癌中表達的一致性CD147和Survivin在腎細胞癌組織中表達的共同陽性率為62.4%（53/85），共同陰性率為14.1%（12/ 85）。Kappa檢驗統(tǒng)計分析顯示CD147和Survivin的表達具有一致性（Kappa=0.388，P＜0.05），但在Kappa系數(shù)區(qū)段中一致性程度屬于弱。見表2。

表2　CD147和Survivin在腎細胞癌中表達的一致性

2.4CD147、Survivin表達與腎細胞癌患者的預后分析 85例腎細胞癌患者中共獲得72例隨訪資料，隨訪時間2～98個月。其中存活5年以上的有55例，因腫瘤復發(fā)或轉移5年內死亡的共17例，總的5年生存率為76.4%。生存組中CD147陽性表達率為61.8%（34/55），Survivin陽性表達率為65.5%（36/ 55）；死亡組中CD147陽性表達率88.2%（15/17），Survivin陽性表達率為94.1%（16/17）。取腫瘤大小、組織學分型、病理分級、臨床分期、CD147表達及Survivin表達為自變量，以隨訪5年是否死亡為應變量，通過向后剔除法作logistic回歸分析，依次剔除CD147表達和組織學分型兩個自變量，結果顯示腫瘤大小、病理分級、臨床分期和Survivin表達是腎細胞癌的獨立危險因素。見表3。

表3　腎細胞癌危險因素logistic回歸分析

3　討論

腎細胞癌的浸潤和轉移是一個多因素、多步驟的級聯(lián)反應過程。細胞外基質（包括基底膜）的降解是腫瘤浸潤和轉移的關鍵步驟之一[1]。MMPs能夠降解細胞外基質，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與腫瘤浸潤、轉移關系最為密切的蛋白水解酶[2-3]。CD147是一種單鏈跨膜糖蛋白，在惡性腫瘤細胞膜上有較強表達，能刺激腫瘤周圍微環(huán)境細胞分泌MMPs，在癌細胞表面形成復合物，將MMPs濃聚于癌細胞周圍，破壞天然組織屏障，導致基底膜和間質成分降解，促進腫瘤的浸潤和轉移[4-5]。本實驗結果顯示CD147在腎細胞癌中的陽性表達率顯著高于癌旁正常腎組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。CD147在腎細胞癌組中的表達隨著病理分級的升高而增加（P＜0.05），組織分化程度越低，CD147的表達強度越強。另外CD147的表達率與腫瘤的大小也有密切關系，腫瘤越大，CD147的表達率越高。提示CD147可能參與腎癌的發(fā)生發(fā)展過程，影響腫瘤的惡性程度和發(fā)展趨勢。

Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子，特異表達于人和鼠的胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類腫瘤細胞，而在成人正常分化的組織中除了少數(shù)組織外極少表達[6]。Survivin通過直接或間接地干預凋亡蛋白酶Caspases的功能而發(fā)揮其抗凋亡作用，在調控細胞周期和抑制細胞凋亡過程中起重要作用[7-8]。本實驗結果顯示85例腎細胞癌Survivin陽性表達率為76.5%（65/85），35例癌旁正常腎組織無一例表達，表明Survivin在腎細胞癌組織中有高度選擇性表達的特征，可能參與了腎癌的發(fā)生。另外Survivin表達隨著病理分級和臨床分期的升高而增加（P＜0.05），組織分化程度越低，臨床分期越高，Survivin的表達陽性率越高。這說明Survivin的表達與腎癌的惡性生物學行為有關，Survivin的高表達可能參與惡性腫瘤的臨床進展。

最新研究[9]表明，在子宮內膜異位癥的發(fā)展過程中，CD147的過表達能夠抑制子宮內膜細胞的凋亡，并能促進細胞的遷移。Tang等[10]的研究表明，CD147能夠通過增加細胞內質網(wǎng)應激相關基因免疫球蛋白結合蛋白（BIP），誘導內質網(wǎng)未折疊蛋白反應（UPR），從而抑制肝癌細胞的凋亡。這些均表明CD147參與了細胞的凋亡抑制過程，并且可能在腫瘤細胞的浸潤、遷移過程中起著重要的作用。本實驗結果顯示腎細胞癌中CD147和Survivin均高表達，癌旁正常組織中CD147和Survivin低表達或不表達；Kappa檢驗顯示CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達有弱一致性?？梢酝茰yCD147與凋亡抑制因子Survivin之間可能存在相同的信號通路，兩者在腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉移過程中可能存在相互誘導、相互協(xié)同的作用。

本組多因素logistic回歸分析顯示Survivin的表達是腎細胞癌的獨立危險因素，且比值比較大（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05），這與文獻[11]報道一致。Rabien等[12]的研究表明，CD147在腎細胞癌中存在過表達，并且與腎透明細胞癌患者的不良預后有關。本研究顯示CD147雖不是腎細胞癌的獨立危險因素，但死亡組中CD147陽性表達率高于生存組，表明CD147的陽性表達在一定程度上可以提示腫瘤的不良預后。

CD147和Survivin在腎細胞癌中高表達，而在正常腎組織中不表達或弱表達的特點，為腎癌的分子靶向治療提供了新的靶點，使得促進腫瘤細胞調亡而不影響周圍正常組織細胞的抗腫瘤療法成為可能[5，13]。因此，聯(lián)合檢測腎細胞癌組織中CD147和Survivin的表達，對于臨床治療可能具有重要的指導意義。

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[13]YAMADA T,HORINAKA M,SHINNOH M,et al.A novel HDAC inhibitor OBP-801 and a PI3K inhibitor LY294002 synergistically induce apoptosis via the suppression of survivin and XIAP in renal cell carcinoma[J].Int J Oncol,2013,43(4):1080-1086.

（本文編輯：丁敏嬌）

·臨 床 經 驗·

Expression of CD147 and Survivin in renal cell carcinoma and their correlation with clinicopathologic pa-rameters

LUO Huarong1,KE Mang2,ZHOU Tao1,XU Cheng1,BAO Weiguang3.1.Department of Pathology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 2.Department of Urology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 3.Human Tissue Bank,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000

Abstract:Objective:To investigate the expression of CD147 and Survivin in human renal cell carcinoma (RCC) and their correlation with clinicopathologic parameters.Methods:The RCC tissue microarrays containing 85 renal cell carcinoma specimens and 35 normal kidney tissue specimens were used to detect CD147 and Survivin expression by immunohistochemistry.Results:The expression rates of CD147 and Survivin were 65.7% (23/35) and 71.4% (25/35) in RCC group,respectively,signifi cantly higher than that in control group (P＜0.01).The expression of CD147 in RCC increased with the size of tumor and pathological grade (P＜0.05).And the expression of Survivin in RCC increased with the pathological grade and clinical stage (P＜0.05).The expression of CD147 and Survivin in RCC specimens showed weak consistency (Kappa=0.388,P＜0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that the positive expression of Survivin was an independent risk factor of RCC (OR=16.256,95%CI:1.132～ 233.515,P＜0.05).Conclusion:CD147 and Survivin are over-expressed in RCC specimens.CD147 and Survivin may play a crucial stage in development of human RCC.Detection of the expression of CD147 and Survivin can be used in the evaluation of malignant degree and prognosis of RCC.

Key words:renal cell carcinoma; tissue microarray; immunohistochemistry; CD147; Survivin

作者簡介：羅華榮（1980-），男，浙江臺州人，主治醫(yī)師。

收稿日期：2014-09-04

[中圖分類號]R737.11

[文獻標志碼]B

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.01.013