糖尿病足深部潰瘍患者厭氧菌分離鑒定的價(jià)值

康俊輝

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽(yáng)醫(yī)院/襄陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北襄陽(yáng)441000)

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·論著·

糖尿病足深部潰瘍患者厭氧菌分離鑒定的價(jià)值

康俊輝

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽(yáng)醫(yī)院/襄陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北襄陽(yáng)441000)

摘要:目的探討糖尿病足深部潰瘍感染患者厭氧菌的感染情況，同時(shí)進(jìn)行臨床價(jià)值分析。方法對(duì)襄陽(yáng)市第一人民醫(yī)院2012～2015年收治的87例糖尿病足深部潰瘍感染患者的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌涂片、普通及厭氧培養(yǎng)鑒定。結(jié)果細(xì)菌涂片81例陽(yáng)性，普通培養(yǎng)67例陽(yáng)性，厭氧培養(yǎng)陽(yáng)性17例。結(jié)論糖尿病足深部潰瘍感染患者存在厭氧菌感染，做普通細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)應(yīng)同時(shí)做厭氧菌的培養(yǎng)。采樣不當(dāng)，送檢不及時(shí)，培養(yǎng)前使用抗菌藥物，厭氧條件控制不好等易影響厭氧培養(yǎng)的陽(yáng)性率。

關(guān)鍵詞:糖尿病足;厭氧菌；分離鑒定

糖尿病足是糖尿病患者由于合并神經(jīng)病變及各種不同程度末梢血管病變而導(dǎo)致下肢感染、潰瘍形成和(或)深部組織的破壞[1]，嚴(yán)重威脅著糖尿病患者的健康。如何有效控制感染、盡快愈合潰瘍面是治療糖尿病足的關(guān)鍵，故病原菌的分離培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)就顯得尤為重要。臨床上常常只做普通細(xì)菌培養(yǎng)，而三級(jí)及以上糖尿病足患者的標(biāo)本常有腐敗及惡臭味，但培養(yǎng)結(jié)果是陰性，筆者常懷疑有厭氧菌的存在，對(duì)近3年本院糖尿病足感染病例同時(shí)進(jìn)行了厭氧菌的培養(yǎng)，報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年1月至2015年1月在本院住院的87例糖尿病足患者，均符合1997年美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)(ADA)制定的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn),糖尿病足按Wagner病變分級(jí)[2]分為1級(jí)0例、2級(jí)39例、3級(jí)33例、4級(jí)28例和5級(jí)2例。

1.2儀器與試劑法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK-32全自動(dòng)微生物分析儀，厭氧菌培養(yǎng)袋。培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)肉湯、血平板、Oxoid厭氧肉湯、厭氧瓊脂血平板(新鮮配制)。法國(guó)生物梅里埃公司API 20A厭氧菌鑒定系統(tǒng)。

1.3方法對(duì)糖尿病足淺表創(chuàng)面先用無(wú)菌鹽水沖洗，再用無(wú)菌棉拭子擦拭取樣,此種標(biāo)本只做普通培養(yǎng)。深部的膿腔用無(wú)菌針筒取樣,盡量不要吸入空氣，立刻送檢，按要求將該標(biāo)本接種于厭氧肉湯或厭氧血瓊脂平板上，另外接種一份普通營(yíng)養(yǎng)肉湯或血平板上，分別放于厭氧袋或普通培養(yǎng)箱中。菌株鑒定:常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性者立即進(jìn)行革蘭染色，同時(shí)采用VITEK-32全自動(dòng)細(xì)菌分析系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定。厭氧菌：經(jīng)35 ℃厭氧培養(yǎng)2 d后，若有細(xì)菌生長(zhǎng)，挑取平板內(nèi)一種或多種形態(tài)的菌落分別做染色鏡檢、耐氧試驗(yàn)和純種分離。純種分離培養(yǎng)2 d后，取耐氧試驗(yàn)不生長(zhǎng)的專性厭氧菌，應(yīng)用法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的API 20A鑒定系統(tǒng)做出厭氧菌菌種的鑒定。

2結(jié)果

87例糖尿病足潰瘍標(biāo)本中，細(xì)菌涂片陽(yáng)性81例。普通培養(yǎng)分離出病原菌67株，陽(yáng)性率為77.0%，其中革蘭陽(yáng)性菌41株(59.2%)、革蘭陰性菌21株(32.4%)、真菌5株(8.4%)，革蘭陽(yáng)性菌以表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌及鏈球菌屬為多,革蘭陰性菌以變形菌屬、大腸埃希菌、假單胞菌屬為多。厭氧菌培養(yǎng)共分離出17株厭氧菌，陽(yáng)性率為20%，經(jīng)鑒定歸4屬，記6個(gè)種。其中擬桿菌屬中的脆弱類桿菌7株、產(chǎn)黑色素?cái)M桿菌4株、真桿菌屬的遲緩真桿菌3株、韋榮球菌屬的細(xì)小韋榮球菌2株。梭狀芽孢菌屬的產(chǎn)氣莢膜梭菌1株。87例患者中,單一菌感染32例(45.07%)，其中單一厭氧菌感染6例；混合菌感染(同時(shí)檢出2種及以上細(xì)菌)29例(40.85%),同時(shí)分離出需氧菌和厭氧菌11例，其中Wagner分級(jí)大于或等于3級(jí)糖尿病足患者24例(82.76%)。病原菌檢出情況見(jiàn)表1。

表1　　糖尿病足感染菌的分布

續(xù)表1　　糖尿病足感染菌的分布

3討論

糖尿病患者由于代謝紊亂而處于免疫妥協(xié)狀態(tài)，易感染不易控制。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病足混合感染較為常見(jiàn)，尤其是Wagner分級(jí)大于或等于3級(jí)糖尿病足者(83.3%),這可能與糖尿病足部感染的特征有關(guān)，血糖升高，潰瘍處組織形成有利于細(xì)菌生長(zhǎng)的環(huán)境，同時(shí)高血糖使免疫細(xì)胞功能下降，致使患者在一般情況下更易發(fā)生感染，而感染有時(shí)患者免疫力進(jìn)一步下降，進(jìn)而出現(xiàn)混合感染和條件致病菌感染[3]，而在糖尿病足潰瘍創(chuàng)口較深和壞疽時(shí)組織容易缺血缺氧，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)。

根據(jù)本醫(yī)院送檢的糖尿病足潰瘍標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果可以看出，盡管尿病足感染的病原菌中以需氧菌為主，與有關(guān)報(bào)告一致[4-5],但是厭氧菌的感染已達(dá)到17例，占病原菌的20.23%，并且單純的厭氧菌感染也有6例。如果臨床上只將標(biāo)本進(jìn)行普通細(xì)菌培養(yǎng)，而忽略了厭氧培養(yǎng)，就有可能有大約20%的病例被誤診或漏診，患者將無(wú)法得到最有效的治療，以致延誤病情。如果厭氧培養(yǎng)能和普通培養(yǎng)同時(shí)進(jìn)行，就可以為臨床提供更有力的依據(jù)，減少臨床用藥的盲目性。厭氧菌培養(yǎng)未被列入細(xì)菌常規(guī)檢驗(yàn)的原因，除了國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)界對(duì)厭氧菌感染的普遍性和重要性未充分了解及重視外[6]，還有一個(gè)重要原因是厭氧菌培養(yǎng)操作麻煩，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，影響因素多，對(duì)采樣標(biāo)本要求嚴(yán)，培養(yǎng)環(huán)境特殊，這些都會(huì)影響厭氧菌培養(yǎng)的常規(guī)開(kāi)展。本研究中有部分患者標(biāo)本細(xì)菌涂片陽(yáng)性，未培養(yǎng)出任何細(xì)菌，包括厭氧菌，原因第一可能是患者在做細(xì)菌培養(yǎng)前已經(jīng)使用了大量抗菌藥物；第二可能是采集和運(yùn)送標(biāo)本過(guò)程中未注意隔絕空氣，而導(dǎo)致厭氧菌迅速地死亡。因此，能不能正確地采集并運(yùn)送標(biāo)本也嚴(yán)重影響著厭氧菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率。不過(guò)，也有厭氧培養(yǎng)是陽(yáng)性，而耐氧試驗(yàn)顯示又不是厭氧菌。所以，在厭氧菌的培養(yǎng)過(guò)程中，一定要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，對(duì)可疑標(biāo)本進(jìn)行多次培養(yǎng)，提高陽(yáng)性率和正確率。由于厭氧菌培養(yǎng)鑒定周期長(zhǎng)，影響臨床醫(yī)生的診斷與用藥，為縮短報(bào)告時(shí)間，及時(shí)給臨床提供依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)室建議實(shí)行分階段報(bào)告制度，第一階段可以先根據(jù)耐氧試驗(yàn)結(jié)果、革蘭染色、菌落特征等做出有厭氧菌生長(zhǎng)等待鑒定的初步報(bào)告供臨床參考；第二階段再根據(jù)操作規(guī)程做出最后鑒定，并及時(shí)報(bào)告培養(yǎng)結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

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The value of isolation and identification of anaerobic bacteria causing diabetic foot deep ulcers

KangJunhui

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiangyangHospitalAffiliatedtoHubeiUniversityofMedicine/theFirstPeople′sHospitalofXiangyang,Xiangyang,Hubei441000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the deep ulcer infection of anaerobic bacteria in patients with diabetic foot,while make clinical value analysis.Methods87 specimens collected from the patients with deep ulcers of diabetic foot were performed by bacteriological smear and bacterial culture respectively.ResultsThe bacteriological smear positive cases were 81,the aerobic culture positive cases were 67 and the anaerobic culture positive cases were 17.ConclusionThe deep ulcers of diabetic foot often are infected by anaerobic bacteria.Aerobic culture and anaerobic culture are both necessary to define the pathogen.It must be noted that the anaerobic culture positive rate would be interfered by incorrect sampling,no timely examination,using antibiotics and incorrect culture conditions.

Key words:diabetic foot；anaerobic bacteria；isolation and identification

(收稿日期：2015-10-15)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.012

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0461-02

作者簡(jiǎn)介：康俊輝，女，副主任技師，主要從事臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)及微生物學(xué)研究。