血糖參考測量實驗室能力驗證*

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血糖參考測量實驗室能力驗證*

全燦1，李紅梅1，徐蓓1，吳佳佳1，史光華2，呂京2，陳寶榮3

(1.中國計量科學(xué)研究院，北京 100029；2.中國合格評定國家認(rèn)可委員會，北京 100062；

3.北京航天總醫(yī)院檢驗科，北京 100076)

本論文在質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項項目的資助下，建立同位素稀釋質(zhì)譜技術(shù)開展國際比對，研制血清葡萄糖國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并應(yīng)用于參考測量實驗室的血糖能力評估，驗證我國參考測量實驗室血糖測量能力，為參考測量程序提供可溯源性，報道如下。

1計劃概述

1.1項目簡介葡萄糖是人體內(nèi)新陳代謝的重要物質(zhì)，是人體能量的主要來源之一。血糖濃度測定、口服糖耐量試驗是臨床診斷糖尿病的重要指標(biāo)[1]。人血清葡萄糖的常規(guī)測定方法主要包括葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。葡萄糖氧化酶法操作簡便，性能較好，廣泛用于臨床，但是此方法線性范圍較窄，抗干擾能力稍差；己糖激酶方法性能優(yōu)于前者，但由于價格偏高，臨床應(yīng)用受到限制；干化學(xué)法快速簡便，主要用于急診[2]。參考測量程序：亦稱參考方法，是經(jīng)過充分研究的測量程序，給出的量值測量不確定度適合其預(yù)期用途，主要用于評價測量相同被測量的其他測量程序[3]。血清葡萄糖測定的一級參考測量程序是同位素稀釋質(zhì)譜法(IDMS)，二級參考測量程序是己糖激酶分光光度法[4]?！堆迤咸烟菧y定參考方法》WS/T 350-2011是由衛(wèi)生部臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會提出改采用由國際檢驗醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會(JCTLM)批準(zhǔn)的《CDC人血清葡萄糖己糖激酶參考方法(分光光度法)》,并參考ISO15193：2009《體外診斷器具-生物源樣品中量的測定-參考測定程序的表述》適當(dāng)增加內(nèi)容[5]。

1.2參加實驗室本次選用中國計量科學(xué)研究院實驗室建立的同位素稀釋質(zhì)譜法作為參考值的確定方法。中國計量科學(xué)研究院建立的同位素稀釋質(zhì)譜法參加了CCQM的血糖國際比對CCQM K11.1和K11.2[6]。本次能力驗證得到了國家科技基礎(chǔ)性專項項目(2011FY130100)的支持。共10家來自北京、上海、廣東、四川、浙江、吉林共5省的10家血糖參考實驗室參加了本次能力驗證項目，包括醫(yī)院、臨床檢驗、醫(yī)療器械及民營實驗室等。每個參加實驗室被賦予唯一的實驗室代碼,能力驗證相關(guān)報告均按代碼標(biāo)識參加實驗室。

2能力驗證

2.1方案設(shè)計依據(jù)CNAS-CL03：2006《能力驗證提供者認(rèn)可規(guī)則》[7]設(shè)計本次能力驗證。

2.1.1樣品制備及濃度水平本次PT樣品為健康人血清樣品和添加樣本，依據(jù)CNAS-CL03：2006《能力驗證提供者認(rèn)可規(guī)則》。本次能力驗證樣品為血清中葡萄糖基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品，按照一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范(JJG1006-94)[8]進行制備。每家機構(gòu)將獲得2個濃度水平的樣品，各濃度樣品量不少于10瓶，每瓶約0.5 mL。樣品基質(zhì)為人體血清。濃度1，量值在5～7 mmol/L;濃度2，量值在12～15 mmol/L范圍。

2.1.3樣品儲存、運輸和分發(fā)每家實驗室發(fā)給隨機配對抽取的兩個濃度水平的樣品，與能力驗證實施指南、樣品確認(rèn)單、實驗室代碼編號和測量結(jié)果總結(jié)表等，采用現(xiàn)場或特快專遞的方式發(fā)給各參加實驗室。樣品長期保存需-80 ℃，干冰運輸，以物流方式將樣品發(fā)送至各參加技術(shù)機構(gòu)。當(dāng)樣品到達(dá)后，參加者應(yīng)立即核查運輸包裝是否有損壞、干冰是否還有剩余、樣品是否保持低溫狀態(tài)。如果情況正常，則填寫接收交接單，并發(fā)送郵件或傳真至組織單位。如果在傳送過程中有意外情況發(fā)生，應(yīng)及時通報組織單位，由組織單位按意外情況進行處理。

2.1.4能力驗證方法本次能力驗證，參加實驗室可選用：(1)WS/T 350——《人血清葡萄糖己糖激酶參考方法(分光光度法)》；(2)《同位素稀釋質(zhì)譜法(GC ID/MS 或LC/ID/MS/MS) 測定血清葡萄糖》的1種或者兩種。參加實驗室在收到樣品后，根據(jù)檢驗方法進行檢測，最后報告血糖的測量結(jié)果。

2.2統(tǒng)計評價方法能力驗證統(tǒng)計方法取決于實驗結(jié)果的總體分布，通過統(tǒng)計驗證實驗室的數(shù)據(jù)分布,以確定合適的統(tǒng)計方法。

2.2.1數(shù)據(jù)準(zhǔn)備在對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析之前，應(yīng)確保數(shù)據(jù)是正確、合理的。輸入并檢查所有數(shù)據(jù)結(jié)果(必要時經(jīng)過轉(zhuǎn)換)，制作顯示結(jié)果分布的數(shù)據(jù)直方圖，以檢驗正態(tài)性假設(shè)。通過數(shù)據(jù)直方圖檢查結(jié)果是否連續(xù)和對稱。

2.2.2總計統(tǒng)計量完成了數(shù)據(jù)準(zhǔn)備，就可以用總計統(tǒng)計量來描述結(jié)果，包括結(jié)果數(shù)、中位值、標(biāo)準(zhǔn)四分位數(shù)間距(IQR)、穩(wěn)健的變異系數(shù)(CV)、最小值、最大值和極差等統(tǒng)計量[10-11]。結(jié)果數(shù)是從一個特定檢測中得到的結(jié)果總數(shù)，符號為N。

3血糖能力驗證結(jié)果及統(tǒng)計評價

3.1樣品A血糖能力驗證結(jié)果見表1、圖1(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

表1　　樣品A的能力驗證結(jié)果

3.2樣品B血糖能力驗證結(jié)果見表2、圖2(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

表2　　樣品B的能力驗證結(jié)果

-：無數(shù)據(jù)。

3.3圖形顯示在最終報告中應(yīng)有結(jié)果的圖示及其相關(guān)的不確定度。圖3、4(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)分布顯示了在表1、2中的結(jié)果。每個參加實驗室的值和參考值用菱形◆表示。實驗室值向上和向下延伸的線段代表實驗室報告的不確定度。

4技術(shù)分析

4.1不同參考測量程序的比較絕大部分參加實驗室采用第一法：WS/T350-2011血清葡萄糖測定參考方法，該方法采用在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷酸腺苷(ATP)磷

酸化反應(yīng)，生成葡萄糖-6-磷酸與ADP。葡萄糖-6-磷酸催化脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸，同時NAD還原成NADH。通過紫外可見分光光度計檢測吸光度；只有2號實驗室采用同位素稀釋氣相色譜質(zhì)譜法(ID-GC/MS)，對應(yīng)的前處理方法為衍生化，先后和鹽酸羥胺、醋酐反應(yīng)，得到糖腈乙酰酯衍生物。利用IDGCMS具有更小的不確定度。

4.2不確定度評定部分參考實驗室尚未掌握不確定度評定，沒有依據(jù)《測量不確定度要求的實施指南》[14]開展不確定度評定，對A類、B類、樣品稱量、前處理、定值等不確定度分量不能正確分析和評定，對線性擬合不確定評定基本沒有考慮。

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血清腫瘤標(biāo)志物PSA檢測助力前列腺癌有效管理

日前，在北京舉辦的腫瘤標(biāo)志物大師班交流會上，西班牙巴塞羅那臨床醫(yī)院生化實驗室癌癥研究中心主任Rafael Molina教授就PSA的研究發(fā)展、醫(yī)學(xué)價值及其對前列腺癌管理的應(yīng)用進行了深入探討。

WHO 1999年發(fā)布的PSA校準(zhǔn)方法(WHO 96/670)將截斷(cut-off)值定為3.1 ng/mL，一般超過10 ng/mL考慮罹患前列腺癌的可能。但血清PSA濃度在前列腺增生和前列腺炎中均有升高，前列腺良性疾病與前列腺癌在2～10 ng/mL時有交叉，存在很高比例的假陰性和假陽性結(jié)果。若假陰性出現(xiàn)在2～4 ng/mL，可導(dǎo)致15%癌癥漏檢；假陽性在4～10 ng/mL出現(xiàn)時，被認(rèn)為是判斷前列腺癌的灰區(qū)，65%良性疾病被錯判為癌癥。此時，可通過結(jié)合fPSA計算游離前列腺指數(shù)(%fPSA)，提高檢出率。在tPSA水平為4～10 ng/mL的患者中，以%fPSA為標(biāo)準(zhǔn)可減少35%不必要的活檢，檢出敏感性達(dá)94%。

Molina教授介紹了一項覆蓋歐洲八個國家、入組50～74歲男性人群的歐洲前列腺癌隨機篩查研究(ERSPC)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨訪至第9年時，核心年齡段定期篩查組與對照組的前列腺癌死亡率之比為0.85；隨訪至第11年時，比值為0.78。近期，在《柳葉刀》雜志上公布的13年隨訪結(jié)果顯示，55～69歲男性中，PSA篩查使前列腺癌死亡率下降了21%，且與隨訪9年和11年結(jié)果相比，獲益呈增長趨勢。

PSA篩查也存在潛在傷害，包括過度診斷和隨之而來的過度治療。Molina教授表示：“篩查前，建議醫(yī)生和患者討論檢測項目的選擇、益處和可能的副作用，以便患者根據(jù)情況做出自己的選擇，對有早期診斷要求的人群不應(yīng)拒絕進行PSA篩查。”

由于tPSA檢測方法多樣，不同廠商試劑、不同檢測方法之間差異水平達(dá)10%～40%。為提高PSA檢測特異性，臨床醫(yī)生需結(jié)合年齡特異性參考范圍、PSA抗原密度(PSA/D)、速率(PSAV)、游離與總PSA比(f/t)、外周帶PSA(PSA-TZD)檢測等附加指標(biāo)綜合判斷。雖然當(dāng)前不同PSA檢測方法之間差異仍較大，但隨著診斷技術(shù)改進，PSA檢測精準(zhǔn)度正在不斷提高。羅氏診斷Elecsys?PSA和fPSA檢測擁有WHO標(biāo)準(zhǔn)溯源，只需一管血，18分鐘就能為臨床提供準(zhǔn)確結(jié)果和高醫(yī)學(xué)價值信息，為患者長期隨訪提供可靠依據(jù)，有助于實現(xiàn)前列腺癌高效管理。

(收稿日期：2015-09-24)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.068

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1673-4130(2016)04-0571-03

基金項目：質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項項目(201410234)；質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項項目(201210066);國家科技基礎(chǔ)性專項項目(2011FY130100)。

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