山楂葉化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究近況

楊明宇，潘偉東，潘海峰

（河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

山楂葉化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究近況

楊明宇，潘偉東，潘海峰△

（河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

山楂葉；化學(xué)成分；質(zhì)量控制

山楂葉為薔薇科植物山里紅（Crataegus pinnatifida Bge. Var. Major N.E.Br.）或山楂（Crataegus pinnatifida Bge.）的干燥葉，主要功能為活血化瘀、理氣通脈、化濁降脂，用于氣滯血瘀、胸痹心痛、胸悶憋氣、心悸健忘、眩暈耳鳴、高脂血癥等［1］。我國(guó)山楂葉植物資源豐富，廉價(jià)易得，療效確切，有較強(qiáng)的臨床應(yīng)用價(jià)值，是現(xiàn)今研究熱點(diǎn)中藥之一。本文就其化學(xué)成分 研究和質(zhì)量控制研究進(jìn)行綜述，為其深度開發(fā)和利用提供依據(jù)。

1 山楂葉的化學(xué)成分研究

山楂化學(xué)成分的研究始于1921年Anon的文獻(xiàn)報(bào)告［2］，20世紀(jì)50年代前主要研究其營(yíng)養(yǎng)成分，50年代之后主要研究黃酮類化合物［3］。目前，從山楂葉中分離出的化合物主要有黃酮類、有機(jī)酸類、微量元素、含氮化合物等［4］。

1.1 黃酮類成分 山楂葉總黃酮，是從山楂葉中提取的黃酮類化合物的總稱，是山楂葉中主要的活性成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，山楂葉中的黃酮類化合物具有降壓、增加冠脈血流量、降低血脂、降低甘油三酯及膽固醇、耐缺氧、抑制或清除氧自由基、抗脂質(zhì)過氧化、改善肝微循環(huán)及抗炎癥損傷、強(qiáng)心等作用，在心腦血管系統(tǒng)方面具有較大的臨床價(jià)值［4］。山楂葉黃酮類成分主要包括黃酮和黃酮醇類，不存在二氫黃酮和二氫黃酮醇類［5］。黃酮類成分主要有牡荊素、牡荊素-2”-O-鼠李糖、牡荊素-4”-O-葡萄糖、牡荊素-4′-O-鼠李糖、牡荊素-4′，7-雙葡萄糖、6”-O-乙酰牡荊素、2”-O-乙酰牡荊素、乙酰牡荊素-4-鼠李糖苷、異葒草素、pinnatifide（A）、pinnatifide（B）、pinnatifide（C）、pinnatifide（D）、pinnatifide（E）、pinnatifide（F）等［5］。黃酮醇類成分主要有槲皮素、山奈酚、蘆丁、金絲桃苷［6］、4”-O-鼠李糖蘆丁、3-O-β-D-吡喃半乳糖槲皮素、3-O-β-D-吡喃葡萄糖槲皮素、3-O-β-D-吡喃葡萄糖（6-1）-α-L-鼠李糖槲皮素、3-O-β-D-吡喃半乳糖（6-1）-α-L-鼠李糖槲皮素、7-O-α-L鼠李糖-3-O-β-D-葡糖山奈酚、7-O-α-L-鼠李糖-3-O-β-D-葡糖山奈酚、淫羊藿苷等［7］。

1.2 有機(jī)酸類成分 有機(jī)酸類成分是山楂葉中另外一類主要成分，其中三萜類有機(jī)酸主要有熊果酸、山楂酸和2α，3β，19α-三羥基熊果酸等［8］。藥理研究表明，這類成分有強(qiáng)心、增加冠流和改善循環(huán)等作用［2］。除了三萜類有機(jī)酸，山楂葉中還有綠原酸、五加皮酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸和對(duì)羥基苯甲蘋果酸等［7］。

1.3 黃烷及其聚合物 山楂葉中含有的黃烷類成分主要有兒茶素、表兒茶素［9］、二聚無色矢車菊素、無色締紋天竺素、締紋天竺素苷［7］等5種成分。

1.4 其它類化合物 山楂葉中還含有皂苷、膽堿、嘌呤衍生物［10］、維生素類［11］、多糖類、氨基酸、多種微量元素（Mg、Si、K、Ca、Na、Al、Mn、Fe、Sr、Ba）［12］和揮發(fā)油［13］。宋少江等［14］利用硅膠減壓柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜從山楂葉的體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇-水提取物中分離得到40個(gè)化合物，并鑒定了其中37個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中包括醇類、醛類等。 陳佳等［15］通過硅膠柱色譜和聚酰胺柱色譜及Sephadex LH-20等分離手段，分離出一個(gè)新聯(lián)苯苷（山楂葉苷）。

2 山楂葉的質(zhì)量控制研究

2.1 含量測(cè)定 山楂葉的含量測(cè)定方法較多，總成分主要采用傳統(tǒng)的紫外-可見分光光度法。目前，一些新的技術(shù)也普遍用于含量測(cè)定，最常用的有高效液相色譜法（HPLC）、超高相液相色譜（UPLC）、氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）和電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）等。

張文莉等［16］以蘆丁為對(duì)照品，采用NaNO2-Al（NO3）-NaOH和AlCl3兩種常用的紫外-可見分光光度法對(duì)山楂葉總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定，并進(jìn)行比較，結(jié)果表明：兩種方法所測(cè)得的結(jié)果相差較大，NaNO2-Al（NO3）-NaOH為顯色劑測(cè)定總黃酮的方法專屬性不強(qiáng)，有局限性，準(zhǔn)確性較差，而采用AlCl3比色法測(cè)定總黃酮的含量具有一定的合理性和專屬性。

王肖等［17］以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）-四氫呋喃（C）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0-20-30-40-50min），A（90%-84%-84%-78%-74%），B（8%-14%-14%-20%-24%），C（2%-2%-2%-2%-2%），采用HPLC對(duì)不同月份承德產(chǎn)山楂葉中牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷5種黃酮類成分進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果表明：牡荊素鼠李糖苷含量在6月份含量最高，8月份次之。

劉婷婷等［18］以乙腈（A）-0.3%甲酸水（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0-4-5-10-16min），A（0%-13%-15%-15%-16%），采用UPLC測(cè)定了含山楂葉的成藥三葉片中蘆丁和金絲桃苷的溶出度，該方法具有較強(qiáng)的專屬性、高效性、快速性。

崔鳳俠等［13］采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)及克瓦茲指數(shù)對(duì)山楂葉中提取出的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析，并以歸一化法計(jì)算各個(gè)成分的相對(duì)含量，最終分離出154個(gè)色譜峰，鑒定了其中93個(gè)化合物。

微量元素是山楂葉中基本的組成成分，傳統(tǒng)的微量元素分析多采用無機(jī)分析手段。英錫相等［12］通過研究，建立ICP-MS半定量分析模式，測(cè)定不同采收期山楂葉中微量元素的含量及種類，最終測(cè)定28種微量元素，并確定了10種主要微量元素。

2.2 指紋圖譜研究 中藥指紋圖譜是借助于色譜和波譜等技術(shù)獲得的中藥化學(xué)成分的色譜（或光譜）圖，是一種綜合的鑒別手段。中藥化學(xué)指紋圖譜分析技術(shù)因其能夠表征中藥所含的物質(zhì)成分，符合中醫(yī)理論的整體性和中藥作用機(jī)理的模糊性，已被廣泛用于鑒別中藥真?zhèn)?、評(píng)價(jià)其質(zhì)量一致性及中藥產(chǎn)品的穩(wěn)定性［19］。

目前，針對(duì)山楂葉中主要活性成分（黃酮類）進(jìn)行的化學(xué)指紋圖譜的研究較多。王領(lǐng)弟等［8］以乙腈（A）-0.5%甲酸水溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0-18- 24-50-65min），B（10%-18%-18%-35%-60%），建立了不同產(chǎn)地山楂葉藥材的HPLC指紋圖譜，并進(jìn)行比較，共標(biāo)定15個(gè)共有峰，同時(shí)建立了綠原酸、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、金絲桃苷和槲皮素5種主要成分的HPLC分析方法，并進(jìn)行了含量測(cè)定。

崔鳳俠等［20］以0.5%甲酸（A）-乙腈（B）-甲醇（C）-四氫呋喃（D）溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫（0-15-20- 30-35-60min），A（97%-93%-89%-80%-80%-56%），B（0.5%- 0.5%- 0.5%-0.5% -0.5%-6%），C（0.5%-0.5%- 0.5%- 0.5%-0.5%-6%），D（2%- 6%-10%-19%- 19%-32%），通過實(shí)驗(yàn)研究了不同批次山楂葉提取物的HPLC指紋圖譜，并對(duì)18批山楂葉提取物的HPLC指紋圖譜標(biāo)定出了10個(gè)共有峰，同時(shí)測(cè)定了其中7個(gè)成分（綠原酸、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、蘆丁、牡荊素、金絲桃苷、槲皮素）的含量，為山楂葉提取物的質(zhì)量控制提供了方法依據(jù)。

劉榮華等［21］以乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0-12-45-50min），A（12%-18%-18% -100%），以綠原酸為內(nèi)參照物，檢測(cè)牡荊素、金絲桃苷、牡荊素鼠李糖苷、蘆丁、鼠李糖蘆丁、槲皮素、葡萄糖牡荊素7種成分的含量，分別對(duì)10個(gè)產(chǎn)地的山楂葉進(jìn)行了化學(xué)指紋圖譜的研究。結(jié)果顯示：山楂屬植物種間差別較大，且其主要特征性成分的含量存在明顯差異，實(shí)驗(yàn)為該屬不同種的植物葉的鑒別和山楂葉的合理利用提供了依據(jù)。

雖然中藥化學(xué)指紋圖譜技術(shù)能解決一些實(shí)際問題，但也有一定的局限性，因?yàn)樗从车膬H是中藥中的化學(xué)信息，與藥效活性信息無關(guān)。因此，將中藥指紋圖譜與中藥的藥效評(píng)價(jià)相結(jié)合，開展藥效與指紋譜的相關(guān)性研究，即中藥譜-效相關(guān)研究，顯得尤為重要［22］。關(guān)于山楂葉譜-效關(guān)系的研究也有相關(guān)報(bào)道，如劉榮華等［23］以抗超氧陰離子為生物活性評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別對(duì)5種不同山楂葉HPLC指紋圖譜的各指紋峰進(jìn)行藥效試驗(yàn)，建立了各指紋峰峰面積與抗超氧陰離子活性之間關(guān)系（峰效關(guān)系）的數(shù)學(xué)模型，并通過數(shù)學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)、計(jì)算機(jī)編程與模擬手段將化學(xué)指紋峰翻譯成生物活性值，最終建立了山楂葉的生物活性指紋圖譜，完善和豐富了中藥指紋圖譜的研究，更加客觀地反應(yīng)了中藥的質(zhì)量，為中藥現(xiàn)代化研究及中藥的譜效關(guān)系研究提供了新的方向。

3 小結(jié)

我國(guó)盛產(chǎn)山楂，山楂葉來源充足、成本低，且為藥食兩用之佳品，山楂葉及其制劑是臨床上的常用藥，山楂葉中總黃酮類成分是治療心腦血管疾病和抗腫瘤的主要活性成分，有很好的應(yīng)用前景。但目前山楂葉的研究還不夠系統(tǒng)、完善，鑒于山楂葉的良好療效，有必要對(duì)其進(jìn)行深入研究，為臨床合理用藥提供依據(jù)，為其更好地開發(fā)和利用提供基礎(chǔ)。

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1004-6879（2016）02-0155-03

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（2015-09-29）