金櫻子多糖的分離純化及藥理作用

周苗苗，李 峰

(皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽六安 237005)

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金櫻子多糖的分離純化及藥理作用

周苗苗，李 峰*

(皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽六安 237005)

摘要金櫻子具有較好的保健功能和多種藥理功效，金櫻子中含有多糖的量較多，金櫻子多糖是發(fā)揮藥理作用的重要成分。該研究詳細(xì)闡述了金櫻子多糖的分離純化過程，并對金櫻子多糖的藥理作用進(jìn)行探討，結(jié)果表明，金櫻子多糖具有降血脂、降血糖、抗心肌缺血、抗衰老、抗腫瘤、抗應(yīng)激、強(qiáng)化機(jī)體免疫能力等作用，可對多種疾病進(jìn)行治療。

關(guān)鍵詞金櫻子；多糖；分離純化；藥理作用

Separation, Purification and Pharmacological Action of Polysaccharides fromRosalaevigata

ZHOU Miao-miao, LI Feng*(West Anhui Health Vocational College, Liuan, Anhui 237005)

AbstractRosalaevigatahas relatively high healthcare function and various pharmacological effects. The content of polysaccharides was relatively high inR.laevigata. The separation and purification processes of polysaccharides fromR.laevigatawere expounded in detail. The pharmacological action of polysaccharides was discussed. Results showed that polysaccharides fromR.laevigatahad the functions of anti-hyperlipidemia, anti-aging, anti-tumor, anti-stress, reducing blood sugar, anti-myocardial ischemia, strengthening the body's immune ability and so on. Thus,R.laevigatacould be used for the treatment of various diseases.

Key wordsRosalaevigata; Polysaccharides; Separation and purification; Pharmacological action

多糖的潛在功能較多，細(xì)胞的生長、增殖、衰老等過程的調(diào)節(jié)與多糖存在一定的關(guān)系。醫(yī)藥領(lǐng)域一直對作為生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑的多糖進(jìn)行研究，癌癥的診斷和治療、細(xì)胞間物質(zhì)的運(yùn)輸、細(xì)胞與細(xì)胞識別、免疫功能的調(diào)節(jié)均與多糖存在緊密聯(lián)系[1]。多糖具有降血脂、抗輻射的作用，在胃潰瘍、糖尿病等疾病的治療中發(fā)揮著重要作用[2]。多種植物的多糖能對人體的免疫能力進(jìn)行強(qiáng)化，促使補(bǔ)體、抗體、干擾素的生成[3]。人類很早就開始利用植物中的非淀粉多糖成分加工生產(chǎn)食品，隨著社會(huì)科技水平的不斷提高，人們可利用較高的技術(shù)對多糖等物質(zhì)進(jìn)行提取純化。金櫻子是薔薇科常綠攀援植物，富含多糖、黃酮類物質(zhì)、三萜類及其衍生物，主要生長在安徽、江蘇、浙江、江西、湖南、廣西、廣東等地。金櫻子果實(shí)的體形為倒卵狀，直徑為1.2～1.8 cm，長度為2.2～3.5 cm，呈紅棕色或紅黃色，頂端有宿存花萼，味甜微帶澀味，可用于鎮(zhèn)咳、利尿，有助于慢性腎炎、神經(jīng)性頭痛、高血壓、神經(jīng)衰弱、燒傷、燙傷、皮膚腫瘤等疾病的治療，是我國常見的中藥[4]。鑒于金櫻子的重要價(jià)值，為促進(jìn)其更深入的研究開發(fā)，筆者對金櫻子多糖的分離純化及藥理作用進(jìn)行了探討。

1金櫻子多糖的分離純化

1.1儀器和試劑

1.1.1儀器。SJD型電磨機(jī)，AEG-220電子天平，UV-120-02紫外/可見光分光光度計(jì)，ZFQ85A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，NEOCOOL冷凍干燥機(jī)，UV/Vis Lambda Bio 40，SCR 20BC高速冷凍離心機(jī)，2023MinicoldLab層析系統(tǒng)。

1.1.2試劑。Sephadex G-100，CM-Sepharose Fast Flow，DEAE-Sepharose Fast Flow，標(biāo)準(zhǔn)多糖，標(biāo)準(zhǔn)單糖，H2O2、NaCl、HCl、苯胺-鄰苯二甲酸、吡啶、醋酸、異丙醇、正丁醇、三氟乙酸、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸鈉、檸檬酸、濃硫酸、苯酚、異戊醇、氯仿、聚乙二醇、丙酮、無水乙醚、無水乙醇。

1.2金櫻子粗多糖的提取取干燥干凈的金櫻子果實(shí)100 g，將其粉碎后用1∶1的無水乙醚和無水乙醇浸泡12 h，使用布氏漏斗對浸泡后的金櫻子進(jìn)行抽濾并風(fēng)干，之后用80 ℃的水浸提5 h，重復(fù)3次，提取并濃縮提取液，使用Sevage法對提取液進(jìn)行脫蛋白處理，直至完全除盡蛋白質(zhì)，使用雙氧水對提取液進(jìn)行脫色處理，使用ZFQ85A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對提取液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，之后將95%乙醇與提取液混合，比例為4∶1，使用SCR 20BC高速冷凍離心機(jī)對該溶液進(jìn)行離心處理，使用丙酮和無水乙醇對沉淀物進(jìn)行清洗，使用NEOCOOL冷凍干燥機(jī)處理沉淀物獲得金櫻子粗多糖。

1.3金櫻子多糖的分離純化使用pH7.6 tris-HCl buffer溶解金櫻子粗多糖，離心，使用DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析，使用pH7.6 tris-HCl buffer進(jìn)行洗脫處理，采用苯酚-硫酸法進(jìn)行檢測。收集洗脫峰值的多糖洗脫液，透析過夜處理后濃縮，可使用聚乙二醇進(jìn)行濃縮處理，之后使用CM-Sepharose Fast Flow進(jìn)行柱層析，用pH5.4 tris-HCl buffer進(jìn)行洗脫處理，采用苯酚-硫酸法進(jìn)行檢測，單個(gè)峰值為一種多糖。收集峰值多糖，對多糖進(jìn)行透析、濃縮、冷凍干燥處理，得到多糖組分RLPSI、RLPSII，形態(tài)為絮狀，呈白色，具有較好的水溶性。使用紫外光譜對多糖進(jìn)行檢查，該多糖不含核酸和蛋白質(zhì)時(shí)，270、280 nm無顯著吸收峰。對該多糖進(jìn)行凝膠過濾檢測，檢測顯示為單一對稱峰，表明提取的多糖為純品。使用三氟乙酸在密閉條件下對純金櫻子多糖進(jìn)行水解，溫度調(diào)至110 ℃。冷卻后進(jìn)行減壓蒸干處理，使用硅膠薄層色譜法對處理后多糖進(jìn)行檢測，用苯胺-鄰苯二甲酸試劑使該多糖顯色，并對比分析該產(chǎn)物圖和標(biāo)準(zhǔn)單糖樣品圖，確定該多糖的組分[5-7]。

金櫻子多糖分離純化的過程中，常用柱層析方法進(jìn)行多糖純化，如離子交換層析和凝膠柱層析，離子交換層析根據(jù)分子的極性進(jìn)行分離，可對粘多糖、中性多糖、酸性多糖進(jìn)行分離；凝膠柱層析主要根據(jù)多糖分子的形狀和大小進(jìn)行分離，具有分子篩的作用。多糖純度鑒定可使用紫外檢測、示差折射、高效液相法、凝膠過濾法、高壓電泳法、超離心法等方法進(jìn)行。

2金櫻子多糖的藥理作用

金櫻子具有較好的保健功能和多種藥理功效。有學(xué)者對金櫻子提取物影響泌尿系統(tǒng)的效果進(jìn)行研究，結(jié)果表明金櫻子提取物能夠?qū)Υ笫箅x體膀胱平滑肌痙攣性收縮產(chǎn)生抑制作用，減少大鼠排尿的次數(shù)，延長排尿時(shí)間間隔，增大單次尿量，對家兔離體空腸平滑肌自主收縮產(chǎn)生抑制作用，對乙酰膽堿產(chǎn)生拮抗作用，對去甲腎上腺素導(dǎo)致的家兔離體胸主動(dòng)脈條收縮產(chǎn)生抑制[8]。相關(guān)研究指出，金櫻子中含有多糖的量較多，金櫻子多糖是發(fā)揮藥理作用的重要成分[9]。

2.1抗氧化、抗輻射金櫻子多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性作用，羥自由基、超氧陰離子自由基等含氧自由基會(huì)損傷機(jī)體，超氧陰離子自由基的危害性較大，會(huì)對多種生物膜、生物大分子產(chǎn)生損害作用，從而引發(fā)疾病。金櫻子多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化功效，金櫻子多糖清除超氧陰離子自由基的效果可使用鄰三酚自氧化法進(jìn)行檢測，金櫻子多糖抑制羥自由基氧化作用的效果可使用比色法進(jìn)行檢測，而相關(guān)試驗(yàn)表明，金櫻子多糖清除超氧陰離子自由基的效果顯著，能夠?qū)αu自由基發(fā)揮氧化作用而產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的過程產(chǎn)生抑制作用[10]。

2.2降血糖、降血壓、降血脂多糖能促使機(jī)體有效利用葡萄糖，可對糖異生的過程產(chǎn)生抑制作用，能促進(jìn)機(jī)體分泌胰島素，可對人體糖代謝酶的活性進(jìn)行調(diào)節(jié)，使機(jī)體的糖代謝紊亂得到改善，減弱機(jī)體抗胰島素的作用，最終促使機(jī)體血糖水平降低。相關(guān)研究指出，金櫻子不同活性部位對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶具有抑制作用，阻礙馬尿酸和二肽的生成，具有降低血壓的功能[11]。金櫻子多糖還可在腸道內(nèi)抑制膽固醇的吸收，對試驗(yàn)性小鼠高膽固醇血癥有一定的預(yù)防和治療作用[12]。

2.3強(qiáng)化機(jī)體免疫功能大量研究表明多糖具有強(qiáng)化免疫能力的作用[13]。金櫻子能強(qiáng)化巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的功能，可對淋巴細(xì)胞產(chǎn)生作用，促使其轉(zhuǎn)化，強(qiáng)化巨噬細(xì)胞的吞噬能力，從而強(qiáng)化機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能。金櫻子多糖具有較好的促免疫功能的作用，對巨噬細(xì)胞殺傷抗原作用的激活有促進(jìn)作用，激活T協(xié)助細(xì)胞的活性，促使抗胸腺依賴性抗原體液性抗體濃度增大。相關(guān)試驗(yàn)中，小鼠服用金櫻子多糖后，小鼠巨噬細(xì)胞清除血中剛果紅能力顯著增強(qiáng)，溶血素的濃度顯著提高，自身免疫能力逐漸恢復(fù)。金櫻子多糖能顯著強(qiáng)化細(xì)胞免疫功能，對體液免疫、非特異性免疫有促進(jìn)作用[14]。

2.4抗炎抑菌金櫻子多糖具有抑制鉤端螺旋體、破傷風(fēng)桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的作用，也可抑制流感病毒。有學(xué)者在金櫻子抗炎抑菌的研究中指出，金櫻子多糖能對金黃色葡萄球菌、白葡萄球菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌有抑制作用，且敏感性較強(qiáng)；金櫻子多糖的濃度越大，抑菌圈的直徑越大，若金櫻子多糖的濃度達(dá)10~15 mg/mL，其抑菌效果大于50 mg/mL的鏈霉素；金櫻子多糖可抑制放線菌和釀酒酵母菌；金櫻子多糖可對二甲苯引發(fā)的小鼠耳腫脹的發(fā)展產(chǎn)生抑制作用，且抗炎效果較理想[15]。

3小結(jié)

提取金櫻子的多糖物質(zhì)，并將混合多糖轉(zhuǎn)化為多糖分子，可充分發(fā)揮多糖的生物活性，該提取純化的多糖能夠強(qiáng)化人體淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫系統(tǒng)的功能，在免疫性疾病的自我修復(fù)、抗病毒、抗感染、治療腫瘤等過程中發(fā)揮重要作用[14]。金櫻子多糖具有降血脂、降血糖、抗心肌缺血、抗衰老、抗腫瘤、抗應(yīng)激、強(qiáng)化機(jī)體免疫能力等作用，可對多種疾病進(jìn)行治療[16]。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究者可利用多種生化儀器對金櫻子多糖進(jìn)行分離提純，從而進(jìn)一步提高人們對金櫻子多糖功效的認(rèn)識。學(xué)者們應(yīng)在研究金櫻子多糖結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討通過化學(xué)改性增強(qiáng)其生理活性的方法，為促進(jìn)其更廣泛利用提供理論依據(jù)[17]。

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收稿日期2015-12-28

作者簡介周苗苗(1978- )，女，安徽六安人，講師，碩士，從事生化與分子生物學(xué)研究。*通訊作者，副教授，碩士，從事生化與分子生物學(xué)研究。

基金項(xiàng)目安徽高校自然科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2015A427)。

中圖分類號S 567

文獻(xiàn)標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611(2016)03-141-02