連香樹愈傷組織誘導(dǎo)研究

師春娟, 王 齊

(1.云南省林業(yè)科學(xué)院，云南昆明 650201；2.云南林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650224)

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連香樹愈傷組織誘導(dǎo)研究

師春娟1, 王 齊2*

(1.云南省林業(yè)科學(xué)院，云南昆明 650201；2.云南林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650224)

摘要[目的] 為珍稀瀕危樹種連香樹尋求組培快繁方法。[方法]以1/4MS、1/2MS、MS添加不同濃度的NAA、KT、GA3為培養(yǎng)基，以連香樹當(dāng)年生帶芽莖段為外植體進行愈傷組織誘導(dǎo)。[結(jié)果]以 4月份采集的帶芽莖段作為外植體愈傷組織誘導(dǎo)效果相對較好；在1/4MS+NAA 1.0 mg/L + KT 0.2 mg/L+GA3 1.00 mg/L培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)效果相對較好，但總體而言愈傷組織誘導(dǎo)率較低。[結(jié)論] 連香樹愈傷組織誘導(dǎo)具有可行性，需進一步研究。

關(guān)鍵詞連香樹；愈傷組織；誘導(dǎo)

Study on Callus Induction ofCercidiphyllumjaponicumSieb.

SHI Chun-juan1, WANG Qi2*(1.Yunnan Academy of Forest, Kunming, Yunnan 650201; 2.Yunnan Forestry Technological College, Kunming, Yunnan 650224)

Abstact [Objective] The aim was to seek a way of tissue culture propagation toCercidiphyllumjaponicum.[Method]Calli were induced from young stem with a bud ofC.japonicumas experimental explants, callus induction was studied on 1/4 MS,1/2 MS,MS basal medium added with different concentration hormone NAA, KT, and GA3.[Result] The effect of calli induced with explants collected in April was better than other time; and the optimum cultural medium was 1/4MS+NAA 1.0 mg/L + KT 0.2 mg/L+GA31.0 mg/L, as a whole, the callus induction rate was low.[Conclusion] The induction of callus is feasible and needs to be further studied.

Key wordsCercidiphyllumjaponicum; Callus; Induction

連香樹CercidiphyllumjaponicumSieb.et Zuce.又名山白果、子母樹、紫荊葉木,屬連香樹科Cercidiphyllaceae連香樹屬Cercidiphyllum,是一種古老稀有的珍貴落葉高大喬木,屬古老孑遺植物之一。其星散分布于皖、浙、贛、鄂、川、陜、甘、豫及晉東南地區(qū)，為第三紀(jì)孑遺植物，因其種子細小，難以成苗，天然更新能力極差，加上人為破壞，種群已處于完全衰退狀態(tài)[1]。小隴山林區(qū)位于亞熱帶向暖溫帶的過渡地帶，自然條件優(yōu)越，氣候濕潤，物種豐富，區(qū)內(nèi)有許多珍稀瀕危樹種，如國內(nèi)分布很少的紅豆杉(Taxus)、連香樹、金錢槭(Dipteroniasinensis)、廟臺槭(AcermiaotaienseP.)等，這些珍稀瀕危樹種不僅對維持該地區(qū)生物多樣性具有重要意義，而且還具有很多用途，但由于受其本身生物學(xué)特性的影響，適應(yīng)的生態(tài)環(huán)境獨特，數(shù)量稀少；且具有競爭性能弱、繁殖能力差、自然更新困難的特點[2-5]。目前，連香樹的繁殖大部分采用種子播種、扦插等方法[6-7]。筆者應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，以連香樹帶芽莖段為材料，探索連香樹應(yīng)用組織培養(yǎng)方法進行繁殖過程中愈傷組織誘導(dǎo)適宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，為進一步研究連香樹的組培快繁提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料及處理供試材料為云南省林業(yè)科學(xué)院內(nèi)所栽植連香樹苗木。剪取連香樹當(dāng)年生帶芽莖段為外植體，長度1~5 cm；先用洗潔精清洗，自來水流水沖洗1~2 h；再用0.1%氯化汞溶液浸泡消毒4~5 min，后用無菌水沖洗4～6 次。在超凈工作臺上吸干水分后，切成0.5 cm長的帶芽莖段，分別接種于試驗培養(yǎng)基中，每個處理30瓶，每瓶1株。

1.2培養(yǎng)基分別選用1/4MS、1/2MS、MS 作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基及繼代生長培養(yǎng)基，附加1 g/L活性炭、7~8 g/L瓊脂和30 g/L蔗糖，用0.1 mol/L NaOH溶液及0.1 mol/L HCl溶液將pH調(diào)至5.4～5.8,培養(yǎng)基在121 ℃滅菌25～30 min。1~5號培養(yǎng)基分別為MS+NAA 1.0 mg/L + KT 0.1 mg/L；1/2MS+NAA 1.0 mg/L + KT 0.1 mg/L+GA31.00 mg/L；1/2MS+NAA 0.2 mg/L + KT 1.0 mg/L+GA31.00 mg/L；1/4MS+NAA 1.0 mg/L + KT 0.2 mg/L+GA31.00 mg/L；1/4MS+NAA 0.2 mg/L + KT 0.2 mg/L+GA30.75 mg/L。

1.3試驗方法于4~10月，每月10日采取當(dāng)年生帶芽莖段作為外植體，分別采用上述5種培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)試驗，比較其愈傷組織生長情況，以確定最適宜的外植體采取時間。同時觀察記錄每種培養(yǎng)基上愈傷組織生長及形成情況，以愈傷組織生長最好月份的統(tǒng)計數(shù)據(jù)為主，分析對比相對適宜的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.4培養(yǎng)條件將接種好的外植體置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為(24±2)℃,濕度80%～90%，暗培養(yǎng)7~14 d后，在正常條件下培養(yǎng)，即光照時間12 h/d，光照強度2 000～3 000 lx。

1.5數(shù)據(jù)分析自接種后，每7 d對各處理外植體的生長及愈傷組織形成情況進行觀察記錄，統(tǒng)計愈傷組織的萌動數(shù)量及生長變化情況，持續(xù)進行49 d。

2結(jié)果與分析

2.1不同生長期帶芽莖段外植體對連香樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響通過試驗觀測，連香樹在初培愈傷組織誘導(dǎo)過程中確實存在一定的困難，且不同生長期連香樹帶芽莖段外植體進行愈傷組織誘導(dǎo)的情況不同(表2)。由表2可知，在4月份樹體開始萌發(fā)時采集的帶芽莖段外植體最適宜進行愈傷組織誘導(dǎo)，與其他月份相比，4月份接種的外植體生長狀況好，基端膨大出現(xiàn)的時間短，幾乎無污染現(xiàn)象，且愈傷組織萌動生長較快。與其他月份相比，7、8月采集的外植體愈傷組織生長相對較差，易污染，生長很慢，部分在生長過程中死亡，不易形成愈傷組織。

表2不同生長期帶芽莖段外植體對連香樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響

Table 2Effects of different primary culture period on callus induction ofC.japonicum

采集時期Collectingmonth外植體生長表現(xiàn)Explantgrowthperformance采集時期Collectingmonth外植體生長表現(xiàn)Explantgrowthperformance4月April外植體生長良好,部分基端膨大,35d后呈蓬松的愈傷組織;部分長出嫩綠的新葉,呈生長狀8月August外植體生長一般5月May外植體生長良好,部分基端膨大,但愈傷組織形成很慢,且不明顯9月September外植體長勢較好,但不易形成愈傷組織6月June外植體生長良好,不易形成愈傷組織10月October外植體長勢較好,基端膨大,但生長變化很慢7月July生長一般,易污染,不易形成愈傷組織,部分在生長過程中死亡

2.2不同培養(yǎng)基對連香樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響由表3可知，1~5號培養(yǎng)基連香樹愈傷組織誘導(dǎo)率均很低，3號和4號培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率較高，分別達17%和20%，1號培養(yǎng)基相對最差，未形成愈傷組織。

表3不同培養(yǎng)基對連香樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響

Table 3Effects of different culture medium on callus induction ofC.japonicum

培養(yǎng)基Culturemedium接種數(shù)Inoculationnumber∥個萌動數(shù)Germinationnumber∥個誘導(dǎo)率Inductionrate∥%1號No.130002號No.230273號No.3305174號No.4306205號No.530310

3結(jié)論與討論

連香樹在中國與日本間斷分布，我國殘遺分布于暖溫帶及亞熱帶地區(qū)，雌雄異株，結(jié)實率低，幼苗易受暴雨、病蟲等危害，天然更新極困難，種子播種、扦插等人工繁殖雖然取得一定進展，但在生產(chǎn)上仍存在一定困難[8-9]。目前關(guān)于連香樹再生體系建立也有相關(guān)的研究[10-15]。陳榮珠等[11]研究表明，基本培養(yǎng)基類型、6-BA濃度、NAA濃度對連香樹叢生芽增殖系數(shù)的影響均達顯著水平；3種因素對腋芽增殖系數(shù)影響的效果為6-BA> NAA> 基本培養(yǎng)基，同時采用2，4-D及6-BA進行組合，獲得較高的愈傷組織誘導(dǎo)率。該試驗以不同月份采集的連香樹帶芽莖段為外植體，在5種不同種類培養(yǎng)基上進行愈傷組織誘導(dǎo)，結(jié)果表明，連香樹帶芽莖段在4月份進行愈傷組織誘導(dǎo)相對較好，相對適宜的培養(yǎng)基是1/4MS+NAA 1.0 mg/L + KT 0.2 mg/L+GA31.00 mg/L，但總體而言，愈傷組織誘導(dǎo)率很低，與上述研究結(jié)果不一致[11,14]，其原因可能是培養(yǎng)基選取過于單一，激素配比不夠合理所致。但從木本植物進行組培快繁的研究來看，由于一些木本植物本身的生物學(xué)特性所致，在組培快繁中也存在一定的困難，仍需進一步研究。

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科技論文寫作規(guī)范——討論

著重于研究中新的發(fā)現(xiàn)和重要方面，以及從中得出的結(jié)論。不必重復(fù)在結(jié)果中已評述過的資料，也不要用模棱兩可的語言，或隨意擴大范圍，討論與文中無多大關(guān)聯(lián)的內(nèi)容。

收稿日期2015-12-24

作者簡介師春娟(1978- ), 女,甘肅臨洮人,助理工程師, 從事綠化苗木種苗繁育工作。*通訊作者，副教授，從事草業(yè)科學(xué)研究。

基金項目云南省高職高專院校提升專業(yè)服務(wù)產(chǎn)業(yè)能力建設(shè)項目。

中圖分類號S 723.1+32.6

文獻標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611(2016)03-131-02