精子染色質結構與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的相關性研究

姚寧++徐迎++何亞瓊

【摘要】目的：分析精子染色質結構與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的關系。方法：選擇2013年4月至2014年4月期間收治的40例不明原因復發(fā)性流產(chǎn)孕婦的配偶組成實驗組，同時選擇40例正常男性組成對照組。對兩組男性的精液進行常規(guī)檢查、精子染色質擴散試驗（sperm chromatin dispersion，SCD）實驗以及苯胺藍染色實驗，分析兩組男性精液的常規(guī)數(shù)值、DNA完整性以及核蛋白組型，分析不明原因復發(fā)性流產(chǎn)與精子染色質結構的關系。結果：經(jīng)過檢測，實驗組男性精液的pH、精液體積與對照組比較無差異性（P>005），但實驗組精液的密度、活動率、活動力均顯著低于對照組，畸形率顯著高于對照組（P<005）；經(jīng)過分析，實驗組男性的SCD大光暈與中光暈的比值顯著小于對照組，小光暈、無光暈以及DFI值顯著高于對照組（P<005）；經(jīng)過苯胺藍染色實驗分析，實驗組男性苯胺蘭染色陽性例數(shù)以及陽性比例均顯著高于對照組（P<005）。結論：男性精子染色質DNA異?？赡苁遣幻髟驈桶l(fā)性流產(chǎn)發(fā)生的原因之一，需要進一步深入的科學研究。

【關鍵詞】精子染色質；精子染色質擴散試驗；苯胺藍染色實驗；不明原因復發(fā)性流產(chǎn)【中圖分類號】R6【文獻標志碼】A

妊娠不足28周、胎兒體重不足1000g而終止妊娠者稱為自然流產(chǎn)，連續(xù)2次或2次以上的自然流產(chǎn)則成為復發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneousabortions，RSA）[1]。RSA發(fā)生的病因有生殖道解剖畸形、內分泌紊亂、自身免疫性疾病等，但約有50%的RSA患者的發(fā)病原因不明，臨床上稱之為不明原因性復發(fā)性流產(chǎn)（Unexplained recurrent spontaneous abort ions URSA）[2]。URSA是臨床上較為常見的且難以治療的不孕癥，影響到了患者的身心健康，甚至造成患者家庭的和睦與社會穩(wěn)定。URSA的發(fā)生與男性的精子質量密不可分，但是關于男性精子質量與URSA的關系的研究性文章較少。本文的目的分析精子染色質結構與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的關系。

1臨床資料與方法

11臨床資料

選擇2013年4月至2014年4月期間收治的40例不明原因復發(fā)性流產(chǎn)孕婦的配偶組成實驗組，同時選擇40例配偶已正常生育的男性組成對照組。其中實驗組男性年齡23～48歲，平均年齡（345±45）歲，文化程度小學15例，中學18例，大學7例。對照組年齡24～47歲，平均年齡（335±35）歲，文化程度小學14例，中學17例，大學9例。兩組患者在年齡、性別以及文化程度等臨床資料無差異性（P>005）。

12病例納入標準

（1）夫婦雙方染色體均正常；（2）女方年齡<38 歲、≥3 次的自然流產(chǎn)史；（3）排除影響男性生育功能的放化療史、創(chuàng)傷史、精索靜脈曲張史、慢性疾病或服用藥物史的患者；（4）排除女方身體異常造成RSA的男性；（5）入組患者均簽署知情同意書。

13檢測方法[3]

采用國產(chǎn)WLJY-9000偉力彩色精子質量檢測系統(tǒng)軟件及計算機操作，對精液的pH、精液體積、密度、活動率、活動力、畸形率進行檢測?！禬HO人類精液及精子-宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》為正常精液參照標準；采用SCD實驗檢測男性DNA的完整性，具體操作嚴格按照說明進行，根據(jù)光暈與精子頭部橫徑的比例，粗分為大、中、小和無光暈4個等級。大和中光暈表示精DNA完整無碎片，小和無光暈表示精子DNA斷裂為碎片。小光暈：精子頭直徑≤1/4。中光暈：精子頭直徑>1/4且<2/3。大光暈：精子頭直徑>2/3。DNA斷裂指數(shù)（DFI）=小光暈+無光暈。采用苯胺藍染色實驗進行男性精子核蛋白組型的檢測，嚴格按照實驗組操作步驟進行操作。

14統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)處理軟件包為SPSS160，計量資料比較采用t值檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P<005表示有顯著性差異。

2結果

21兩組患者精液常規(guī)檢查結果的分析

經(jīng)過檢測，實驗組男性精液的pH、精液體積與對照組比較無差異性（P>005），但實驗組男性精液的密度、活動率、活動力均顯著低于對照組，畸形率顯著高于對照組（P<005）。見表1。

22兩組患者精子DNA完整性檢查的分析

經(jīng)過分析，實驗組男性的SCD大光暈與中光暈的比值顯著小于對照組，小光暈、無光暈以及DFI值顯著高于對照組（P<005）。見表2。

23兩組患者精子核蛋白組型檢測結果的分析

經(jīng)過苯胺藍染色實驗分析，實驗組男性苯胺蘭染色陽性比例均顯著高于對照組（P<005）。見表3。

3討論

URSA是指妊娠28周前排除遺傳、解剖、內分泌、感染及自身免疫功能異常等病因的和同一性伴侶連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)[4，5]。近年的生殖免疫學研究證明：2次或超過2次的自然流產(chǎn)的發(fā)病率為5%，而3次或3次以上自然流產(chǎn)的患者約占生育期婦女的1%～2%，并且流產(chǎn)的復發(fā)風險會隨著流產(chǎn)的次數(shù)增加而增加，嚴重影響了患者的家庭幸福，甚至導致患者抑郁、焦慮等不良情緒的發(fā)生[6，7]。隨著女性健康檢查力度的加大，孕婦的自身狀況造成URSA發(fā)生的原因基本明了，關于男性精子與URSA的關系的研究不多。因此，分析男性精子DNA的質量與URSA具有重要的臨床意義。

近幾十年來，臨床上反映男性生殖能力的主要檢測手段仍然為精液常規(guī)檢查如精液體積、密度、活力及形態(tài)等，這是評估男性生育力的一項基本檢測手段，具有簡單、快速、便宜、無創(chuàng)傷等優(yōu)點[8，9]。當精液常規(guī)檢查結果為異常時，男性的生育力會普遍低下，造成夫妻雙方不孕癥的發(fā)生[10]。筆者研究發(fā)現(xiàn)，實驗組男性的精液的密度、活動率、活動力均顯著低于對照組，具有明顯差異性，說明實驗組男性可能生育力低于正常男性。但是有權威部門研究發(fā)現(xiàn)，精液常規(guī)參數(shù)分析不能直接反映精子的生育功能，如受精能力或對胚胎發(fā)育的影響，若只針對精液常規(guī)參數(shù)進行檢測，這不能夠全面了解男方的生育能力[11，12]。檢測精子DNA碎片的方法有多種，如SCD試驗、精子染色質結構分析（SCSA）法、原位標記法（TUNEL）等[13]，其中SCSA 法是一種快速、敏感的檢測方法，是檢測精子 DNA 完整性的金標準，在臨床上廣泛運用[14]。本文作者研究發(fā)現(xiàn)，實驗組男性精子小光暈、無光暈以及DFI值顯著高于對照組（P<005），說明實驗組男性精子DNA損傷比較嚴重?，F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)[15]，精子染色質的完整性能夠影響精子的受精能力、受精卵的分裂以及胚胎的繼續(xù)發(fā)育。國外學者也發(fā)現(xiàn)男性精子DNA碎片率與胚胎質量、囊胚獲得率呈負相關，進一步說明了男性染色質的完整性對胚胎的發(fā)育的重要性。本文作者進行的苯胺藍染色實驗分析，實驗組男性的苯胺蘭染色陽性例數(shù)以及陽性比例均顯著高于對照組（P<005），進一步表明了實驗組男性精子DNA損傷比較嚴重，與不明原因不明復發(fā)性流產(chǎn)有一定的關系。endprint

綜上所述，男性精子染色質DNA異?？赡苁遣幻髟驈桶l(fā)性流產(chǎn)發(fā)生的原因之一，需要進一步深入的科學研究。

參考文獻

[1]龐麗紅，李敏清，楊冬梅，等. 可溶性血管內皮生長因子受體-1（sFlt-1）與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的相關性研究. 生殖與避孕，2011，31（1）：58-61.

[2]趙靜，鞏曉蕓，胡泊，等. 淋巴細胞主動免疫治療不明原因復發(fā)性流產(chǎn)91例臨床研究. 新疆醫(yī)科大學學報，2011，34（1）：77-80.

[3]曹曉敏，劉麗，劉清華，等. 精子染色質結構與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的相關性. 中國優(yōu)生與遺傳雜志，2015，23（2）：113-115.

[4]葉恒君，周玉玲，何淑貞，等. 丙種球蛋白含量與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的相關性研究. 河北醫(yī)藥，2010，32（14）：1908-1909.

[5]劉成軍，王藹明，商微，等. 精子DNA損傷與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的關系. 中華男科學雜志，2011，17（7）：619-621.

[6]張洲，師娟子，邢俊平，等. 復發(fā)性流產(chǎn)與精液常規(guī)參數(shù)、精子畸形率和DNA完整性的相關性. 第三軍醫(yī)大學學報，2010，32（16）：1788-1792.

[7]曹曉敏，蘇園園，何茜冬，等. 精子因素對不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的影響. 實用醫(yī)學雜志，2010，26（17）：3142-3144.

[8]馬芳芳，王厚照，周友泉，等. 不明原因復發(fā)性流產(chǎn)與精子DNA完整性的關系. 中國優(yōu)生與遺傳雜志，2012，7：64-65.

[9]張旭賓，韋劍洪，方小武，等. 精子染色質擴散試驗檢測在早期不明原因復發(fā)性流產(chǎn)中的臨床價值研究. 中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志，2012，15（6）：822-823.

[10]倪吳花，金建遠，楊旭，等. 精子染色質結構分析和染色質擴散試驗檢測精子DNA碎片的比較研究. 實用醫(yī)學雜志，2014，30（5）：821-823.

[11]秦文松，劉英，段金良，等.精子DN A碎片指數(shù)與精液參數(shù)的相關性研究.中國性科學，2014，23（4）：55-57.

[12]龔琴琴，張昌軍.活性氧與精子DNA損傷的保護.中國性科學，2012，21（4）：3-6，10.

[13]Yeste M， Estrada E， Rivera del lamo M-M， et al. The increase in phosphorylation levels of serine residues of protein HSP70 during holding time at 17°C is concomitant with a higher cryotolerance of boar spermatozoa. PLoS ONE， 2014，9（3）：e90887.

[14]Gawecka JE， Marh J， Ortega M， et al. Mouse zygotes respond to severe sperm DNA damage by delaying paternal DNA replication and embryonic development. PLoS ONE， 2013，8（2）：e56385.

[15]Riel JM， Yamauchi Y， Huang TTF， et al. Short-term storage of human spermatozoa in electrolyte-free medium without freezing maintains sperm chromatin integrity better than cryopreservation. Biology of Reproduction，2011，85（3）：536-547.

（收稿日期：2015-04-15）endprint