姜黃素固體脂質(zhì)納米粒制備及體外釋放的研究*

李春華，劉志東，丁伶伶，黃 瑞，王舒雅

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程研究中心，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193）

·中藥研究·

姜黃素固體脂質(zhì)納米粒制備及體外釋放的研究*

李春華1，2，劉志東1，2，丁伶伶1，2，黃 瑞1，2，王舒雅1，2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程研究中心，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193）

[目的]以單硬脂酸甘油酯為載體材料制備姜黃素固體脂質(zhì)納米粒及其體外釋放行為的研究。[方法]采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備姜黃素固體脂質(zhì)納米粒，高速離心法測其包封率，激光粒徑儀測定其粒徑、電位，用差示掃描量熱儀(DSC)表征其性質(zhì)，采用透析法考察固體脂質(zhì)納米粒中姜黃素的體外釋放行為。[結(jié)果]姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的平均粒徑為（89.24±2.06）nm，Zeta電位為（-18.77±1.27）mV，藥物平均包封率為（89.55±1.84）%，DSC結(jié)果表明其理化性質(zhì)穩(wěn)定可靠，體外12 h累計釋放率為（43.12±1.02）%。[結(jié)論]制備的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒粒徑小且分布均勻，具有良好的緩釋作用。

姜黃素；固體脂質(zhì)納米粒；體外釋放

姜黃素（Cur）是從姜黃屬植物姜黃、郁金等根莖中提取的一種多酚類化合物。近年來國內(nèi)外對Cur的研究表明，Cur具有多種生物學(xué)活性，如抗腫瘤，抗炎，抗氧化，降血脂，保護(hù)心肌等廣泛的藥理活性，并且對嚙齒類動物和人的毒副作用小[1-4]。但是由于姜黃素的活性低，水溶性差，生物利用度低和穩(wěn)定性差等特點，限制了其在臨床上的應(yīng)用[5-6]。因此，如何提高Cur生物利用度，研制生物利用度高，用量低且高效，穩(wěn)定性好的制劑成為亟待解決的課題。

固體脂質(zhì)納米粒（SLN）是近年來正在發(fā)展的一種新型毫微粒類給藥系統(tǒng)，作為一種新型給藥載體綜合了納米乳和脂質(zhì)體的優(yōu)點，不僅可以改善藥物穩(wěn)定性，親水性和生物利用度，還具有緩控釋的作用[7-11]。

本實驗采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備姜黃素固體脂質(zhì)納米粒（Cur-SLN），并對其粒徑、電位、包封率進(jìn)行測定，用差示掃描量熱法（DSC）表征其性質(zhì)，同時考察了其體外釋放。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Nano ZS型激光散射粒徑分析儀（Malvern，英國）；TK-20A型透皮散試驗儀（上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（Millipore，美國）；XS20S型電子天平（十萬分之一，Mettler-Toledo，瑞士）；CP70ME超高速離心機(jī)（日立公司，美國）。

1.2 材料 姜黃素對照品（天津中新藥業(yè)，≥98%）；姜黃素原料藥（西安賽揚物科技有限公司，≥95%）；卵磷脂（Lipoid，上海東尚實業(yè)有限公司）；單硬脂酸甘油酯（天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠）；聚氧乙烯（40）硬脂酸酯（Myrj52，南京威爾化工有限公司）；透析袋（上海源葉生物科技有限公司）；乙醇（分析純，天津康科德科技有限公司）；乙腈，甲醇（色譜純，Sigma）。

2 方法與結(jié)果

2.1 姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的制備 稱取處方量Myrj52加入超純水10 mL，75℃水浴使溶解作為水相。另稱取處方量的Cur，大豆卵磷脂，單硬脂酸甘油酯溶于4 mL無水乙醇，加熱至溶解作為有機(jī)相，將有機(jī)相緩慢注入600 r/min攪拌的水相中，繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)至8 mL[12-15]。

2.2 粒徑及Zeta電位測定 取最優(yōu)處方制備的Cur-SLN混懸液適量，用水稀釋20倍，分別測定粒徑和Zeta電位[16]。粒徑為（89.24±2.06）nm，見圖1，Zeta電位為（-18.77±1.27）mV，見圖2。

圖1 Cur-SLN粒徑圖

圖2 Cur-SLN Zeta電位圖

2.3 Cur-SLN包封率的測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動相：乙腈-0.2%甲酸水（42∶58），等度洗脫；流速：0.2 mL/min；檢測波長：427 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：5 μL。

2.3.2 線性關(guān)系的考察 精密稱取姜黃素標(biāo)品適量，用甲醇依次稀釋到14.7、19.6、29.4、39.2、58.8mg/L的系列對照品溶液。分別取5 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以濃度C（mg/L）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=2.520× 105C-2.858×105、相關(guān)系數(shù)r2=0.999 1，結(jié)果表明姜黃素在14.7～58.8 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度實驗 取質(zhì)量濃度為 14.7、29.4、58.8 mg/L的Cur甲醇溶液，分別于1 d內(nèi)測定5次，計算日內(nèi)精密度；每日測定1次，連續(xù)測定3 d，計算日間精密度。結(jié)果日內(nèi)RSD分別為0.13%、0.52%和0.19%，日間RSD分別為0.29%、0.26%和0.65%。

2.3.4 Cur-SLN包封率的測定 取0.2mLCur-SLN加入甲醇稀釋至2mL，超聲30min使之破乳，4000r/min離心30 min，采用UPLC測定其總藥物質(zhì)量濃度（C總）。取0.2 mL Cur-SLN加入超純水稀釋至2 mL，60 000 r/min離心1 h，取上清液進(jìn)樣，UPLC測定其游離藥物的質(zhì)量濃度（C游離）。計算Cur-SLN包封率。包封率=（1-C游離/C總）×100%，其中C游離為Cur-SLN混懸液中游離藥物的濃度，C總為Cur-SLN混懸液中藥物總的質(zhì)量濃度。經(jīng)測定，Cur-SLN的包封率為（89.55±1.84）%。

2.3.5 DSC檢測 取Cur原料藥，Cur-SLN凍干粉，空白SLN凍干粉和Cur原料藥與空白SLN凍干粉物理混合物（1∶1）適量分別置于坩堝中，在氮氣流20 mL/min、加熱速率10℃/min的條件下，從30℃升溫到300℃，見圖3。

圖3 差示掃描量熱儀（DSC）圖譜

結(jié)果顯示，姜黃素在180℃有相變峰，空白SLN在50℃出現(xiàn)相變峰。比較姜黃素與物理混合物DSC曲線，物理混合物在49℃和177℃出現(xiàn)兩個相變峰，分別對應(yīng)空白SLN和姜黃素的相變溫度。而Cur-SLN的DSC曲線中，姜黃素單體的相變峰消失，表明姜黃素被包裹于納米粒中。

2.3.6 Cur-SLN體外釋放 以0.2%吐溫80的磷酸鹽緩沖溶液（PBS）（pH 7．4）為溶出介質(zhì)，采用透析袋法進(jìn)行測定[17-19]。精密吸取1 mL Cur-SLN和姜黃素溶液，分別置于透析袋中，兩端封口固定于溶出杯內(nèi)。取釋放介質(zhì)50 mL加熱至37℃，在0.5、1、1.5、2、4、6、8、10、12 h取樣1 mL，同時補充同溫度同體積的介質(zhì)。取出液體12 000 r/min離心15 min，取上清液進(jìn)樣UPLC測定含量并計算其累計釋放度。結(jié)果見圖4。結(jié)果顯示，姜黃素溶液組在8 h釋放完全，達(dá)到平臺期，釋放率達(dá)96.34%。而Cur-SLN在10 h時釋放達(dá)到平臺期，釋放率為39.04%.

3 討論

固體脂質(zhì)體納米粒的制備方法主要有高壓乳均法，高速攪拌超聲法，微乳法，乳化-固化法等[8,20]。高壓乳均法適用于工業(yè)的生產(chǎn)[8]，高速攪拌超聲法需要高濃度的乳化劑來降低粒徑，過高的乳化劑含量可能產(chǎn)生毒性[8]，微乳法制備的SLN的包封率和載藥量較低[3]，本實驗采用乳化-固化法制備了Cur-SLN，簡單易行，通過對各項理化性質(zhì)及物理穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明乳化-固化法制備的制劑物理穩(wěn)定性好。

圖4 Cur累計釋放曲線

在篩選處方的過程中，選用了單硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯（ATO888）作為脂質(zhì)材料，分別單獨使用一種脂質(zhì)材料和兩者聯(lián)合使用，最終確定以單硬脂酸甘油酯單獨為載體材料制備的固體脂質(zhì)納米粒穩(wěn)定性以及粒徑、電位、包封率均較好，故選用單硬脂酸甘油酯為脂質(zhì)載體。單因素考察Myrj52和卵磷脂的量，選擇Myrj52的用量為400、500、600、700 mg和卵磷脂的用量為200、250、300 mg分別進(jìn)行單一變量分析，最終確定Myrj52為700 mg，卵磷脂為250 mg時，納米粒的粒徑和包封率較適宜。

姜黃素是脂溶性的藥物，難溶于水，所以在體外釋放實驗中，釋放介質(zhì)中加入0.2%吐溫80增加姜黃素的溶解度。從體外釋放的結(jié)果可以看出，Cur-SLN中藥物從脂質(zhì)體釋放時沒有突釋效應(yīng)，說明此固體脂質(zhì)納米粒的載藥機(jī)制主要為包裹鑲嵌[14]；Cur-SLN組體外釋放前10 h釋放較快，累計釋放率為39.04%，10 h以后緩慢釋放，12 h累計釋放率為43.12%，表明Cur-SLN具有良好的緩釋作用，而在動物甚至人體內(nèi)的相應(yīng)特征尚待進(jìn)一步研究證實。

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·啟 事·

《天津中醫(yī)藥》和《天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》再次入選中國科技核心期刊

2016年10月12日，科技部中國科學(xué)技術(shù)信息研究所（ISTIC）在北京國際會議中心舉行中國科技論文統(tǒng)計結(jié)果新聞發(fā)布會暨《2016年版中國科技期刊引證報告（核心版）自然科學(xué)卷》發(fā)布會。天津中醫(yī)藥大學(xué)主辦的《天津中醫(yī)藥》和《天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》兩刊均再次入選“中國科技核心期刊”（中國科技論文統(tǒng)計源期刊）。

據(jù)悉，《2016年版中國科技期刊引證報告（核心版）自然科學(xué)卷》中，《天津中醫(yī)藥》屬于中醫(yī)學(xué)類和中藥學(xué)類期刊，2015年核心影響因子0.659、排名第7，核心總被引頻次1534、排名第16，綜合評價總分45.80、總排名第17?！短旖蛑嗅t(yī)藥大學(xué)學(xué)報》屬于中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報類期刊，2015年核心影響因子為0.984、排名第1，核心總被引頻次703、綜合評價總分46.5、總排名第6，取得了歷次期刊評價中的最好成績。

自1987年以來，中國科學(xué)技術(shù)信息研究所每年定期公布中國科技論文發(fā)表狀況和趨勢，并在此基礎(chǔ)上拓展到中國專利、科技期刊、學(xué)術(shù)圖書等領(lǐng)域產(chǎn)出情況的統(tǒng)計分析。2016年統(tǒng)計報告包括我國發(fā)表的國際論文數(shù)量、國際論文被引用情況、國內(nèi)發(fā)表論文數(shù)量、國內(nèi)論文被引用情況、我國各學(xué)科領(lǐng)域論文分布和影響、我國各地區(qū)論文分布和影響、我國各類型機(jī)構(gòu)論文分布和影響、我國國際合著論文情況、我國高影響科技論文情況、我國科技期刊有關(guān)指標(biāo)的統(tǒng)計分析以及我國出版社引證報告。

Preparation and in vitro release of curcumin solid lipid nanoparticle

LI Chun-hua1,2,LIU Zhi-dong1,2,DING Ling-ling1,2,HUANG Rui1,2,WANG Shu-ya1,2
（1．Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China;2.Tianjin Modern Chinese Medicine Key Laboratory,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To prepare curcumin solid lipid nanoparticles(Cur-SLN)with glyceryl monostearate as its lipid matrix and study its in vitro release behavior.[Methods]Emulsification-evaporation was used to prepare Cur-SLN and entrapment efficiency was measured by ultracentrifugation method.The properties including particle size and Zeta potential and physical property were measured by laser particle size analyzer and differential scanning calorimetry(DSC),respectively.In vitro release behavior was studied by diameter methods.[Results]Mean diameter and Zeta potential of Cur-SLN were(89.24±2.06)nm and(-18.77±1.27)mV.The mean entrapment efficiency was (89.55±1.84)%.The physical property tested by the DSC was stability,and the in vitro accumulative release until 12 h was(43.12±1.02)%.[Conclusion]Cur-SLN prepared in this study has small size which has an even distribution and satisfactory sustained release efficacy.

curcumin;solid lipid nanoparticle;in vitro release

R284

A

1673－9043（2016）06－0400-04

2016-08-30）

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.06.10

教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃（NCET-12-1068）。

李春華（1989-），女，碩士研究生，研究方向為藥物新劑型。

劉志東，E-mail：lonerliuzd@163.com。