夏枯草莖葉中三萜類成分研究

蔡凡，嚴(yán)啟新（.深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院藥劑科，廣東深圳587；.深圳市海王生物工程股份有限公司，廣東深圳58057）

夏枯草莖葉中三萜類成分研究

蔡凡1，嚴(yán)啟新2
（1.深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院藥劑科，廣東深圳518172；2.深圳市海王生物工程股份有限公司，廣東深圳518057）

目的研究夏枯草莖葉中的化學(xué)成分。方法 采用正反相硅膠、Sephadex LH-20凝膠、ODS柱層析等手段，對夏枯草莖葉體積分數(shù)80%乙醇提取物的乙酸乙酯部位進行分離純化，再采用紫外、紅外、質(zhì)譜法進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果從夏枯草莖葉中分離得到7個烏蘇烷型三萜類化合物:烏蘇酸（1）、1β，3β-二羥基烏蘇烷-12烯-28-酸（2）、2α，3β-二羥基烏蘇烷-12烯-28-酸（3）、3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖-19α-羥基-烏蘇烷-12烯-28-酸（4）、3β，23-二羥基-烏蘇烷-12烯-28-酸（5）、2α，3β，19α，23β-四羥基烏蘇烷-12烯-28-酸（6）、3α，19α，23，24-四羥基-烏蘇烷-12烯-28-酸（7）。結(jié)論化合物2、4～7為首次從該植物中分離得到。關(guān)鍵詞：夏枯草；化學(xué)成分；烏蘇烷型三萜類化合物

夏枯草Prunella vulgaris L.為唇形科夏枯草屬植物，其果穗作為常用中藥夏枯草收載于歷版《中國藥典》，具有清火明目、散結(jié)消腫之功效，用于治療目赤腫痛、頭痛眩暈、高血壓等癥［1］。據(jù)考證，夏枯草入藥部位古代用莖葉，現(xiàn)代用果穗［2］。國內(nèi)外對夏枯草果穗的研究較多，但夏枯草莖葉的報道很少。夏枯草主要含三萜皂苷、蕓香苷、金絲桃苷等苷類物質(zhì)及熊果酸、咖啡酸、游離齊敦果酸等有機酸，花穗中含飛燕草素、矢車菊素的花色苷、d-樟腦、d-小茴香酮等［1］。為了研究夏枯草莖葉與果穗中化學(xué)成分的異同，擴大用藥范圍、合理開發(fā)利用該植物資源，本文對夏枯草莖葉的化學(xué)成分進行了研究，從80%（體積分數(shù)，下同）乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離和鑒定了7個烏蘇烷型三萜類化合物。

1　儀器與材料

Büchi Melting point B-540型熔點測定儀（瑞士Büchi公司），溫度未經(jīng)校較正；LCQ DECAXPplus質(zhì)譜儀（美國菲尼根質(zhì)譜公司）；Bruker AM 500型核磁共振儀（德國Brucker公司，TMS為內(nèi)標(biāo)）；DMSO-d6（批號B00038104，上海楚柏實驗室設(shè)備有限公司）。柱層析硅膠（200～300目，青島海洋化工有限公司），薄層層析硅膠（青島海洋化工有限公司），凝膠Sephadex LH-20（Pharmacia），ODS SepaxGP-C18（40～60 μm，Sepax Technologies Inc.）。

夏枯草莖葉于2009年5月采自安徽蕪湖，原植物經(jīng)嚴(yán)啟新博士鑒定為夏枯草Prunella vulgaris L.，標(biāo)本保管在深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院。

2　提取與分離

取自然干燥夏枯草莖葉5 kg，粉碎，經(jīng)80%乙醇40 kg加熱回流提取2次，每次2 h，提取液濃縮得浸膏2.1 kg。用5 L水溶液使之混懸，再分別用乙酸乙酯3 kg、正丁醇4 kg萃取，回收溶劑，得乙酸乙酯部分200 g。取乙酸乙酯萃取部位（180 g）進行硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇（體積比100∶0，20∶1，10∶1，5∶1，1∶1，0∶100）梯度洗脫，得到Fr.1～Fr.6共6個流分（各流分質(zhì)量為15 g左右）。將以上各個流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析、凝膠柱層析、反相C18柱層析進行分離，分別從Fr.1～Fr.5得到化合物1（90 mg）、2（8 mg）、3（35 mg）、4（9 mg）、5（15 mg），從Fr.6得到化合物6（55 mg）、7（9 mg）。

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色粉末（甲醇），mp 260～261℃。ESI-MS m/z:457［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:5.58（1H，br.s，H-12），3.57（1H，dd，J= 5.9，5.7 Hz，H-3），2.74（1H，d，J=11.3 Hz，H-18），1.34（3H，s，H-23），1.32（3H，s，H-27），1.15（3H，s，H-26），1.10（3H，s，H-25），0.90（3H，s，H-24），1.09 （3H，d，J=8.2 Hz，H-30），1.05（3H，d，J=4.8 Hz，H-29）。13C-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:180.0（C-28），139.4（C-13），125.8（C-12），78.2（C-3），56.0（C-5），53.7（C-18），48.2（C-9），48.2（C-17），42.6（C-14），40.1（C-8），39.6（C-19），39.5（C-20），39.4（C-4），39.2（C-1），37.6（C-22），37.4（C-10），33.7（C-7），31.2（C-21），28.9（C-23），28.8（C-15），28.2（C-2），25.0（C-16），24.0（C-11），23.8（C-27），21.5（C-30），18.9（C-6），17.6（C-26），17.5（C-29），16.7（C-24），15.8（C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻［3］對照基本一致，故鑒定化合物1為烏蘇酸（ursolic acid）。

化合物2:白色粉末（甲醇），mp 122～123℃。ESI-MS m/z:473［M+H］+。1H-NMR（400 MHz， C5D5N）δ:5.58（1H，br.s，H-12），3.63（1H，dd，Jaa= 11.5 Hz，Jae=5.2 Hz，H-1），3.40（1H，dd，Jaa= 11.6 Hz，Jae=5.0 Hz，H-3），1.37（3H，s，H-23），1.32 （3H，s，H-27），1.12（3H，s，H-26），1.11（3H，s，H-25），0.95（3H，s，H-24），1.09（3H，d，J=7.2 Hz，H-30），1.03（3H，d，J=6.5 Hz，H-29）。13C-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:180.3（C-28），140.9（C-13），124.1 （C-12），78.8（C-1），78.1（C-3），55.9（C-5），52.8（C-18），48.2（C-17），46.7（C-9），42.3（C-14），40.0（C-8），39.8（C-20），39.4（C-19），39.0（C-4），38.6（C-10），37.5（C-22），34.3（C-7），33.3（C-21），31.0（C-21），30.9（C-2），28.4（C-23），28.2（C-15），26.2（C-16），23.9（C-11），24.8（C-27），22.6（C-30），19.8（C-6），18.5（C-29，25），17.7（C-26），16.6（C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻［4］對照基本一致，故鑒定化合物2為1β，3β-二 羥 基 烏 蘇 烷-12烯-28-酸 （1β，3βdihydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物3:白色粉末（甲醇），mp 253～254℃。ESI-MS m/z:473［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:5.56（1H，t，J=3.2 Hz，H-12），4.16（1H，m，H-2β），3.44（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），2.70（1H，d，J=11.2 Hz，H-18），1.36（3H，s，H-23），1.28（3H，s，H-27），1.18（3H，s，H-26），1.16（3H，s，H-25），1.13 （3H，s，H-24），1.14（3H，d，J=6.4 Hz，H-30），1.12 （3H，d，J=6.4 Hz，H-29）。13C-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:180.0（C-28），139.4（C-13），125.6（C-12），83.9（C-3），68.7（C-2），56.0（C-5），53.6（C-18），48.2（C-17，1），48.1（C-9），42.6（C-14），40.1 （C-8），40.0（C-4），39.6（C-19），39.5（C-20），38.5 （C-10），37.6（C-22），33.6（C-7），31.2（C-21），29.5 （C-23），28.7（C-15），25.0（C-16），24.0（C-11），23.8 （C-27），21.5（C-30），19.0（C-6），17.8（C-29），17.6 （C-26），17.5（C-24），17.1（C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻［5］對照基本一致，鑒定化合物3為2α，3β-二羥基烏蘇烷-12烯-28-酸（2α，3β-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物4:白色粉末（甲醇），mp 243～245℃。ESI-MS m/z:627［M+Na］+。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:5.64（1H，br.s，H-12），5.45（1H，t，J= 8.7 Hz，H-3），5.21～3.95（5H，glc-H），3.14（1H，s，H-18），1.82（3H，s，H-23），1.50（3H，s，H-24），1.26 （3H，s，H-27），1.16（3H，s，H-26），0.91（3H，s，H-25），1.05（3H，d，J=6.3 Hz，H-29），1.21（3H，d，J= 6.3 Hz，H-30）。13C-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:180.9 （C-28），140.1（C-13），128.1（C-12），106.4（C-glc-1），89.0（C-3），82.2（C-glc-3），75.2（C-glc-4），73.9 （C-glc-2），72.8（C-19），63.9（C-glc-5），55.9（C-5），54.8（C-18），47.8（C-17），47.8（C-9），42.5（C-20），42.3（C-14），40.5（C-8），39.6（C-1，4），38.6（C-22），37.0（C-10），33.7（C-7），30.1（C-15），29.5（C-23），28.3（C-2），27.3（C-29），27.1（C-21），26.6（C-16），24.9（C-27），24.1（C-11），18.8（C-6），17.3（C-26），17.0（C-30），16.9（C-24），15.6（C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］對照基本一致，鑒定化合物4為3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-19α-羥基-烏蘇烷-12烯-28-酸（3-O-α-L-arabinophyranose-19α-hydroxylurs-12-en-28-oic acid）。

化合物5:白色粉末（甲醇），mp 283～287℃。ESI-MS m/z:495［M+Na］+。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:5.32（1H，t，J=3.5 Hz，H-12），4.00（1H，d，J=10.6 Hz，H-23），3.58（1H，d，J=10.6 Hz，H-23），3.56（1H，m，H-3），1.34（3H，s，H-24），1.32 （3H，s，H-26），1.14（3H，s，H-27），1.12（3H，s，H-25），1.05（3H，d，J=2.8 Hz，H-30），1.03（3H，d，J= 6.5 Hz，H-29）。13C-NMR（400 MHz，C5D5N）δ:180.0 （C-28），139.7（C-13），125.2（C-12），78.2（C-3），69.3（C-23），55.9（C-5），54.8（C-18），48.2（C-17），47.8（C-9），40.4（C-14），40.0（C-4），39.9（C-8），39.5 （C-19），39.4（C-20），38.8（C-1），37.3（C-10），36.3（C-22），33.4（C-7），31.4（C-21），28.9（C-15），26.7（C-2），24.0（C-16），23.8（C-27），23.7（C-11），21.8（C-30），18.9（C-6），17.9（C-29），17.1（C-26），16.7（C-25），16.0 （C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］對照基本一致，鑒定化合物5為3β，23-二羥基烏蘇烷-12烯-28-酸（3β，23-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物6:白色粉末（甲醇），mp 283～285℃。ESI-MS m/z:505［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ:5.30（1H，m，H-12），4.35～3.45（4H，m，H-23a，23b，3，2），2.51（1H，s，H-18），1.30（3H，s，H-24），1.30（3H，s，H-26），1.18（3H，s，H-27），1.05（3H，s，H-25），1.05（3H，s，H-29），0.92（3H，d，J=6.7 Hz，H-30）。13C-NMR（400 MHz，CD3OD）δ:182.5（C-28），139.6（C-13），130.0（C-12），82.8（C-3），74.4（C-19），69.1（C-2），67.3（C-23），55.4（C-18），50.1（C-5），49.9 （C-17），48.7（C-9），44.4（C-1），43.4（C-4），43.3（20），42.0（C-14），41.8（C-8），40.5（C-10），39.3（C-22），34.0 （C-7），29.7（C-15），27.9（C-21），27.6（C-16），27.4 （C-11），25.3（C-29），25.1（C-24），24.9（C-27），18.8 （C-25），18.0（C-6），16.9（C-30），14.4（C-26）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］對照基本一致，鑒定化合物6為2α，3β，19α，23-四羥基烏蘇烷-12烯-28-酸（2α，3β，19α，23βtetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物7:白色粉末（甲醇），mp 283～285℃。ESI-MS m/z:505［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ:5.26（1H，m，H-12），4.12（1H，d，J= 11.4 Hz，H-23a），4.06（1H，d，J=11.3 Hz，H-24a），3.75 （1H，dd，J=11.6，4.5 Hz，H-3），3.64（1H，d，J= 11.3 Hz，H-23b），3.55（1H，d，J=11.4 Hz，H-24b），2.49 （1H，s，H-18），1.34（3H，s，H-26），1.19（3H，s，H-27），0.97（3H，s，H-29），0.78（3H，s，H-25），0.94（3H，d，J= 6.7 Hz，H-30）。13C-NMR（400 MHz，CD3OD）δ:182.5 （C-28），140.3（C-13），129.6（C-12），73.2（C-19），70.9 （C-3），69.0（C-23），63.7（C-24），55.4（C-18），49.0（C-17），48.7（C-9），47.5（C-5），46.1（C-4），43.4（C-20），42.9（C-14），41.3（C-8），39.3（C-22），38.0（C-10），34.3（C-1，7），29.9（C-15），28.3（C-29），27.6 （C-16），27.3（C-2），26.9（C-21），25.2（C-27），25.1 （C-11），20.1（C-6），17.7（C-26），16.9（C-30），16.5 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］對照基本一致，鑒定化合物7為3α，19α，23，24-四羥基-烏蘇烷-12烯-28-酸（3α，19α，23，24-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2015年版一部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:280.

［2］陳宇航，郭巧生，王澄亞.夏枯草本草及其入藥部位變化的考證［J］.中國中藥雜志，2010，35（2）:242-246.

［3］呂寒，陳劍，李維林，等.枇杷葉中三萜類化學(xué)成分的研究［J］.中藥材，2008，31（9）:1351-1354.

［4］SALIMUZZAMAN S，F(xiàn)ARRUKH H，SABIRA B，et al. Kaneric acid，a new triterpene from the leaves of Nerium oleander［J］.J Nat Prod，1986，49（6）:1086-1090.

［5］KUANG H X，KASAI R，OHTANI K，et al.Chemical constituents of pericarps of Rosa davurica Pall.，a traditional Chinese medicine［J］.Chem Pharm Bull，1989，37（8）: 2232-2233.

［6］賀清輝，李會軍，畢志明，等.紅腺忍冬藤莖的化學(xué)成分［J］.中國天然藥物，2006，5（4）:385-386.

［7］INADA A，YAMADA M，MURITA H，et al.Phytochemical studies of seeds of medicinal plants.I.Two sulfated triterpenoid glycosides，sulfapatrinosides I and II，from seeds of Patrinia scabiosaefolia Fischer［J］.Chem Pharm Bull，1988，36（11）:4269-4274.

［8］SHIGENAGA S，KOUNO I，KAWANO N.triterpenoids and glycosides from Geum japonicum［J］.Phytochemistry，1985，24（1）:115-118.

［9］ZHAO W M，WOLFENDER J L，CHENG K，et al. Triterpenes andtriterpenoidsaponinsfromMussaenda pubescens［J］.Phytochemistry，1997，45（5）:1073-1078.

（責(zé)任編輯：陳翔）

Study on the triterpenoid constituents in herb of Prunella vulgaris

CAI Fan1，YAN Qixin2
（1.Shenzhen Longgang District Maternity&Child Healthcare Hospital，Shenzhen 518172，China；2.Shenzhen Neptunus Bioengineering Co.，Ltd，Shenzhen 518057，China）

Objective To study the chemical constituents of the herb of Prunella vulgaris.Methods The ethyl acetate part of 80%ethanol extract from the herb of Prunella vulgaris was isolated by silica gel chromatography，LH-20，basin chromatography，and the structures were identified by UV，IR and NMR. Results Seven triterpenoids were isolated and identified as ursolic acid（1），1β，3β-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid（2），2α，3β-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid（3），3-O-α-L-arabinophyranose-19α-hydroxylurs-12-en-28-oic acid（4），3β，23-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid（5），2α，3β，19α，23β-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid（6），3α，19α，23，24-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid（7）.Conclusion Compounds 2，4-7 were isolated from Prunella vulgaris for the first time.

Prunella vulgaris；chemical constituents；triterpenoids

藥物化學(xué)

R284.2

A

1006-8783（2016）04-0428-03

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016050601

2016-05-06

蔡凡（1978—），男，主管中藥師，本科，從事臨床藥學(xué)研究工作，Email:caifang16@163.com；通信作者:嚴(yán)啟新（1971—），男，博士，副研究員，副主任藥師，從事新藥研究與開發(fā)工作，Email:yanqixin2005@126.com。

網(wǎng)絡(luò)出版時間:2016-07-011 14:49 網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160711.1449.004.html