人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素6促進骨肉瘤細(xì)胞增殖和遷移*

胡文龍，　吳平平，　耿書國，　汪建樣，　殷　明

(南昌大學(xué)1研究生院醫(yī)學(xué)部，2第二附屬醫(yī)院骨科，江西 南昌 330006)

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人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素6促進骨肉瘤細(xì)胞增殖和遷移*

胡文龍1, 2，吳平平1，耿書國1, 2，汪建樣1, 2，殷明2△

(南昌大學(xué)1研究生院醫(yī)學(xué)部，2第二附屬醫(yī)院骨科，江西 南昌 330006)

[摘要]目的： 探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSCs)對骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖和遷移的作用及分子機制。方法: 組織塊貼壁法分離培養(yǎng)hUC-MSCs，流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記物；CCK-8法和細(xì)胞計數(shù)法檢測hUC-MSCs條件培養(yǎng)基(CM)、重組人白細(xì)胞介素6(rhIL-6)及IL-6中和抗體對Saos-2細(xì)胞增殖的作用；ELISA檢測hUC-MSCs分泌IL-6的量；RT-PCR檢測增殖相關(guān)基因增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、cyclinD1和survivin的轉(zhuǎn)錄水平；Transwell實驗檢測hUC-MSCs和Saos-2細(xì)胞遷移能力的變化。結(jié)果: hUC-MSCs可向Saos-2細(xì)胞遷移；hUC-MSCs-CM含有高濃度的IL-6，可達(dá)(1 835.5±134.1)ng/L；hUC-MSCs-CM和rhIL-6均能促進Saos-2細(xì)胞增殖和遷移，IL-6中和抗體能明顯削弱hUC-MSCs-CM的促Saos-2細(xì)胞增殖和遷移作用；RT-PCR顯示hUC-MSCs-CM和rhIL-6均能上調(diào)Saos-2細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA、cyclinD1和survivin的表達(dá)，而IL-6中和抗體則削弱了這一作用。結(jié)論: 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能向骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移，并通過分泌IL-6促進其增殖和遷移。

[關(guān)鍵詞]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞； 白細(xì)胞介素6； 細(xì)胞增殖； 細(xì)胞遷移

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)是一類來源于胎兒臍帶結(jié)締組織，具有多向分化潛能，能向腫瘤、損傷、炎癥等部位趨化，可分泌大量細(xì)胞因子的基質(zhì)干細(xì)胞。hUC-MSCs作為MSCs的新生代表，不僅與其它來源的MSCs具有相似的生物學(xué)特性和免疫表型，而且具有更強的增殖效率和自我更新能力，來源豐富、倫理爭議少，細(xì)胞含量豐富、微生物感染率低等優(yōu)點更使其成為了組織工程和細(xì)胞工程最理想的種子細(xì)胞。目前，hUC-MSCs移植已成為系統(tǒng)性紅斑狼瘡[1]、貝克型肌營養(yǎng)不良[2]、糖尿病[3]等難治性疾病的有效治療手段，并被用作肺癌[4]、卵巢癌[5]等實體瘤基因治療的載體細(xì)胞，發(fā)揮抗腫瘤作用，Kalaszczynska等[6]更是將hUC-MSCs稱為再生醫(yī)學(xué)的未來。然而，hUC-MSCs與腫瘤的關(guān)系卻錯綜復(fù)雜，Yang等[7]發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs的條件培養(yǎng)基能明顯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長并介導(dǎo)其凋亡，而Li等[8]卻提供證據(jù)表明hUC-MSCs能活化MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的ERK信號通路，從而促進腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移，可見，直接將hUC-MSCs作為腫瘤基因治療的載體細(xì)胞存在較大安全隱患。因此，明確hUC-MSCs與相關(guān)腫瘤的關(guān)系無疑具有重大意義。骨肉瘤是最常見的骨組織的原發(fā)性惡性腫瘤，好發(fā)于長骨干骺端，惡性程度高，預(yù)后差，以局部高侵襲性和容易向骨、肺部轉(zhuǎn)移為特點[9]。至今為止，hUC-MSCs與骨肉瘤的關(guān)系鮮有報道。

為明確hUC-MSCs對骨肉瘤細(xì)胞的作用，本實驗采用骨肉瘤Saos-2細(xì)胞作為研究對象，運用CCK-8、細(xì)胞計數(shù)、Transwell、抗體中和實驗、RT-PCR等方法研究hUC-MSCs對骨肉瘤體外增殖和轉(zhuǎn)移能力的影響及可能的機制。

材料和方法

1標(biāo)本來源

臍帶標(biāo)本取自九江市婦幼保健院，產(chǎn)婦及胎兒身體健康，營養(yǎng)狀況良好。產(chǎn)婦及家屬對實驗均知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

2主要試劑與儀器

α-MEM培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液(Gibco)；青、鏈霉素混合液、0.1% 結(jié)晶紫染色液(北京索萊寶科技有限公司)；IgG-FITC、CD19-FITC、IgG-PE、CD29-PE、CD90-PE、CD105-PE單抗(Abcam)；CCK-8(上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司)；重組人白細(xì)胞介素6(recombinant human interleukin-6， rhIL-6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司)；GREENspin細(xì)胞RNA快速提取試劑盒(北京莊盟國際生物基因科技有限公司)；HiFi-MMLV cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)；2×Taq Master Mix(上海欣百諾生物科技有限公司)；塑料培養(yǎng)皿、25 cm2塑料培養(yǎng)瓶、6孔板、96孔板、Transwell 24孔板(Corning)；倒置相差顯微鏡 (Nikon)；酶標(biāo)儀(Biotek)。

3實驗方法

3.1hUC-MSCs的分離培養(yǎng)及鑒定無菌取得臍帶后機械剝離臍動、靜脈，將華通氏膠剪碎成體積約3～5 mm3大小的組織塊，接種于塑料皿中，加入含10% 胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)基，置于5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞融合達(dá)80%～90% 時，消化傳代，接種于25 cm2塑料培養(yǎng)瓶內(nèi)，繼續(xù)以10% 胎牛血清的α-MEM常規(guī)貼壁培養(yǎng)，每3 d換液1次，細(xì)胞融合達(dá)80%～90% 時，按1∶3傳代。倒置相差顯微鏡連續(xù)觀察細(xì)胞形態(tài)及塑料貼壁能力。hUC-MSCs細(xì)胞傳代至第5代，消化離心后加入IgG-FITC、CD19-FITC、IgG-PE、CD29-PE、CD90-PE、CD105-PE單抗孵育后用流式細(xì)胞儀檢測。

3.2hUC-MSCs條件培養(yǎng)基(conditioned medium, CM)的制備第5代hUC-MSCs融合達(dá)80%后，更換無血清α-MEM，培養(yǎng)24 h后收集培養(yǎng)基，1 000×g離心20 min，0.22 μm過濾，加入10%胎牛血清即成hUC-MSCs-CM，-80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

3.3CCK-8法和細(xì)胞計數(shù)法檢測Saos-2細(xì)胞增殖情況CCK-8實驗取Saos-2細(xì)胞按每孔1 000個接種于96孔板，每孔加入200 μL相關(guān)培養(yǎng)基，每組設(shè)置4個復(fù)孔。分別于相應(yīng)時點取1塊板，每孔加入10 μL CCK-8試劑后37 ℃ 孵育2 h，酶標(biāo)儀測定其450 nm波長處吸光度(A)值；細(xì)胞計數(shù)實驗取Saos-2細(xì)胞按每孔20 000個接種于12孔板，每孔加入2 mL相關(guān)培養(yǎng)基，每組設(shè)置4個復(fù)孔。分別于相應(yīng)時點對各組細(xì)胞進行計數(shù)。

3.4ELISA檢測hUC-MSCs-CM的IL-6濃度及抗體中和實驗取第5代hUC-MSCs培養(yǎng)于T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，待細(xì)胞融合達(dá)80%，PBS漂洗1遍，加入3 mL無血清α-MEM培養(yǎng)24 h，1 000×g離心20 min，0.22 μm過濾。以無血清α-MEM稀釋2倍和3倍后按照IL-6 ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測條件培養(yǎng)基中IL-6濃度。根據(jù)測定的IL-6濃度及其半數(shù)有效濃度，在hUC-MSCs-CM加入適量濃度的IL-6中和抗體以抑制IL-6的活性。

3.5Transwell遷移實驗hUC-MSCs遷移實驗：Transwell 24孔板，聚碳酸酯膜小孔的孔徑為8 μm，在下室加入600 μL含1×105Saos-2細(xì)胞或無細(xì)胞培養(yǎng)基，上室均種入1×105hUC-MSCs；Saos-2細(xì)胞遷移實驗：Saos-2細(xì)胞種入6孔板內(nèi)，分別加入完全培養(yǎng)基、含20 μg/L rhIL-6的完全培養(yǎng)基、含或不含20 mg/L IL-6中和抗體的40% hUC-MSCs-CM預(yù)處理24 h，無血清α-MEM重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×109/L，上室每孔加入相應(yīng)100 μL細(xì)胞懸液，下室均加入600 μL含10% 胎牛血清的α-MEM完全培養(yǎng)基。37 ℃培養(yǎng)12 h后行結(jié)晶紫染色，顯微鏡下隨機選取5個視野計數(shù)穿過膜的細(xì)胞。

3.6RT-PCR檢測增殖相關(guān)基因表達(dá)水平取Saos-2細(xì)胞種于6孔板，培養(yǎng)48 h后提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進行PCR擴增。擴增后DNA樣本用1% 瓊脂糖凝膠電泳20～30 min。SIM凝膠成像系統(tǒng)掃描分析條帶灰度值?？俁NA的提取、逆轉(zhuǎn)錄、PCR反應(yīng)均按試劑盒說明操作。內(nèi)參照基因為β-actin，目的基因包括增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、cyclinD1和survivin，引物序列及產(chǎn)物大小見表1。

4統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。所有實驗均最少重復(fù)3次，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 Scheffe 檢驗，計數(shù)資料采用非參數(shù)秩和檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1　引物序列

結(jié)果

1hUC-MSCs的培養(yǎng)及鑒定

臍帶組織貼壁培養(yǎng)7 d后，鏡下可見少量成纖維樣細(xì)胞從組織塊爬出，此后細(xì)胞逐漸增加，增殖迅速，14 d時，細(xì)胞融合達(dá)90% 以上。傳代后細(xì)胞形態(tài)呈均一的長梭形或紡錘形，呈魚群樣或旋渦狀分布。流式細(xì)胞表型檢測結(jié)果顯示，hUC-MSCs高表達(dá)CD29、CD90、CD105，陽性率均高于97%，CD19陽性率僅為0.1%,符合MSCs鑒定標(biāo)準(zhǔn)，見圖1。

Figure 1.The flow cytometry results of cell surface markers on hUC-MSCs.

圖1人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果

2hUC-MSCs能向Saos-2細(xì)胞靶向遷移并通過旁分泌途徑促進Saos-2細(xì)胞增殖

Transwell遷移實驗發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs能穿過聚碳酸酯膜小孔向培養(yǎng)了Saos-2細(xì)胞的下室遷移，而對照組僅有個別細(xì)胞穿膜(圖2)。為了研究hUC-MSCs分泌的細(xì)胞因子對骨肉瘤Saos-2細(xì)胞的作用，本實驗將Saos-2培養(yǎng)于不同濃度hUC-MSCs-CM，采用CCK-8法繪制其生長曲線并進行了準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)。加入培養(yǎng)基后，對照組細(xì)胞較長時間處于潛伏期(4 d)，20%、40% 和80% CM組細(xì)胞經(jīng)過1～2 d的潛伏期后均開始增殖，20% CM組細(xì)胞增殖相對較慢，40% CM和80% CM組細(xì)胞增殖迅速，進入對數(shù)生長期。接種4 d后，各組細(xì)胞均呈對數(shù)生長。20% CM和40% CM組細(xì)胞均于第10天進入平臺期，80% CM組細(xì)胞增殖迅速，提前進入平臺期(9～11 d)，對照組細(xì)胞增殖相對緩慢，對數(shù)期較長(4～11 d)。3～11 d時，20%、40% 和80% CM組A值均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)，80%組高于40%組，40%組高于20%組，差異均有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)。與CCK-8結(jié)果一致，細(xì)胞計數(shù)實驗顯示，在細(xì)胞接種的第3、6、9天，20%、40% 和80% CM組的細(xì)胞平均數(shù)量均高于對照組，且具有濃度依賴性，差異均有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)，見圖3。

3hUC-MSCs分泌大量IL-6

ELISA檢測發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs-CM中IL-6的濃度可達(dá)(1 835.5±134.1)ng/L(8×105hUC-MSCs/24 h)。

4hUC-MSCs通過IL-6促進Saos-2細(xì)胞增殖

分別將5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L的rhIL-6加入完全培養(yǎng)基中，CCK-8和細(xì)胞計數(shù)實驗顯示IL-6能明顯促進Saos-2細(xì)胞的活力和增殖，且3種濃度對OS細(xì)胞的促增殖效果差異明顯，呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。40%的hUC-MSCs-CM促進Saos-2細(xì)胞增殖的作用顯著，加入IL-6中和抗體后，這種促增殖作用受到明顯抑制，見圖4。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)20 μg/L的rhIL-6和40%的hUC-MSCs-CM均能上調(diào)Saos-2細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA、cyclinD1和survivin的表達(dá)(P<0.05)，而在CM中加入IL-6中和抗體后該3種基因的轉(zhuǎn)錄水平均出現(xiàn)了明顯下調(diào)(P<0.05)，見圖5。

Figure 2.hUC-MSCs migrated to Saos-2 cells. A: complete medium was added to the lower chamber (control); B: complete medium suspended with Saos-2 cells was added to the lower chamber (Saos-2). Mean±SD.n=5.*P<0.05vscontrol.

圖2hUC-MSCs向Saos-2細(xì)胞定向遷移

Figure 3.The conditioned medium from hUC-MSCs promoted the proliferation of Saos-2 cells. A: the growth curves of Saos-2 cells cultured with different concentration of conditioned medium of hUC-MSCs were detected by CCK-8; B: the effects of conditioned medium from hUC-MSCs on the proliferation of Saos-2 cells were detected by cell counting. Mean±SD.n=4.*P<0.05vscontrol.

圖3hUC-MSCs條件培養(yǎng)基促進Saos-2細(xì)胞增殖

Figure 4.hUC-MSCs promoted the proliferation of Saos-2 cells by secreting IL-6. Saos-2 cells in different groups were cultured for 6 d and 9 d, cell proliferation was measured with CCK-8 assay (A) and cytometry (B). Mean±SD.n=4.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsCM.

圖4hUC-MSCs分泌IL-6促進Saos-2細(xì)胞增殖

Figure 5.The relative expression of proliferation-related genes detected by RT-PCR.Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsCM.

圖5RT-PCR檢測增殖相關(guān)基因表達(dá)情況

5hUC-MSCs通過IL-6促進Saos-2細(xì)胞遷移

20 μg/L的rhIL-6及40% hUC-MSCs-CM分別作用于Saos-2細(xì)胞24 h后，細(xì)胞的遷移能力明顯增強(P<0.05)，CM+anti-IL-6組穿膜細(xì)胞數(shù)量明顯比CM組少，且少于對照組細(xì)胞(P<0.05)，見圖6。

討論

近年來，間充質(zhì)干細(xì)胞與腫瘤的關(guān)系備受關(guān)注，然而間充質(zhì)干細(xì)胞到底是促進還是抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展至今尚無定論。大量研究表明MSCs能向損傷、炎癥部位定向遷移，分化成結(jié)締組織成分,支持血管生成，分泌細(xì)胞因子和生長因子,促進愈合。腫瘤被喻為“不可愈合的損傷”，因而，MSCs對腫瘤細(xì)胞的作用可能與其促進傷口愈合的功能相似。MSCs對腫瘤的趨向性是其作為腫瘤基因治療和細(xì)胞治療的載體細(xì)胞最重要的特性[10]。研究表明，進入腫瘤組織的間充質(zhì)干細(xì)胞參與形成腫瘤微環(huán)境，進而影響腫瘤的生長、遷移、血管形成等多種生物學(xué)行為[11]。間充質(zhì)干細(xì)胞不僅能通過直接接觸調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞活性，還能分泌大量細(xì)胞因子、炎癥因子調(diào)控腫瘤的一系列生物學(xué)過程。Matsuzuka等[12]將經(jīng)過基因修飾高表達(dá)IFN-β的hUC-MSCs移植入細(xì)支氣管肺泡癌

Figure 6.hUC-MSCs promoted the migration of Saos-2 cells by secreting IL-6. Mean±SD.n=4.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsCM.

圖6hUC-MSCs分泌IL-6促進Saos-2細(xì)胞遷移

裸鼠模型體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)該hUC-MSCs能向腫瘤部位遷移并表達(dá)IFN-β抑制腫瘤的生長。此外，hUC-MSCs也被作為卵巢癌基因治療的載體細(xì)胞，發(fā)揮了顯著的抗腫瘤作用[7]。本研究通過Transwell遷移實驗證明hUC-MSCs具有強大的向骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移的能力，表明hUC-MSCs有可能成為骨肉瘤基因治療的重要載體工具。然而進一步的研究卻顯示hUC-MSCs能通過分泌大量的細(xì)胞因子促進Saos-2細(xì)胞增殖和遷移，這就為hUC-MSCs應(yīng)用于骨肉瘤的治療帶來了巨大的安全隱患。因此，有必要進一步研究hUC-MSCs促進骨肉瘤增殖的分子機制，為消除hUC-MSCs的促瘤因素提供依據(jù)，使hUC-MSCs盡早安全有效地用于骨肉瘤的治療，無疑具有重大的臨床意義。

IL-6與癌癥的發(fā)生、發(fā)展高度相關(guān)，是參與腫瘤進程最重要炎性因子之一，多種惡性腫瘤能分泌大量IL-6，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子STAT3的持續(xù)性活化，進一步促進了IL-6表達(dá)上調(diào)，這種正反饋調(diào)節(jié)為腫瘤的生長提供了良好的微環(huán)境[13]。 Lin等[14]發(fā)現(xiàn)骨肉瘤組織IL-6的表達(dá)明顯高于正常骨組織，進一步的研究表明IL-6能活化ICAM-1并促進骨肉瘤細(xì)胞的遷移。Tzeng等[15]也證明IL-6能活化ASK1通路進而上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子，促進骨肉瘤的血管形成。研究表明hUC-MSCs能分泌多種細(xì)胞因子和炎癥因子，其中IL-6分泌量較高，可達(dá)(1 571.0±617.2)ng/L，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的(704.0±51.5)ng/L[16-17]。本研究通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs分泌的IL-6高達(dá)(1 835.5±134.1)ng/L。為證實IL-6與Saos-2細(xì)胞增殖、遷移的關(guān)系，本研究將rhIL-6直接作用于Saos-2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)rhIL-6具有促進其增殖和遷移的作用；加入IL-6中和抗體后，hUC-MSCs-CM的促增殖和遷移作用明顯下降，以上數(shù)據(jù)充分說明了hUC-MSCs能通過分泌IL-6促進Saos-2細(xì)胞增殖和遷移。Transwell遷移實驗中，IL-6中和抗體預(yù)處理過的Saos-2細(xì)胞遷移能力明顯低于對照組，表明IL-6可能是hUC-MSCs分泌的細(xì)胞因子中最主要的促進骨肉瘤轉(zhuǎn)移的因素。進一步的RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)rhIL-6和hUC-MSCs-CM均能促進Saos-2細(xì)胞的增殖相關(guān)基因PCNA、cyclinD1和survivin表達(dá)，IL-6中和抗體明顯削弱了hUC-MSCs-CM對以上基因的上調(diào)作用。

綜上，本研究表明hUC-MSCs能向骨肉瘤細(xì)胞定向遷移并分泌大量的IL-6；hUC-MSCs分泌的IL-6可能通過上調(diào)PCNA、cyclinD1和survivin的表達(dá)，促進骨肉瘤細(xì)胞增殖；hUC-MSCs分泌的IL-6能促進骨肉瘤細(xì)胞遷移。本實驗明確了hUC-MSCs的促瘤因素，為其基因改造提供了依據(jù)，促進了骨肉瘤基因治療的早日實現(xiàn)。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 余小慧)

hUC-MSCs promote proliferation and migration of osteosarcoma cells by secreting IL-6HU Wen-long1, 2, WU Ping-ping1, GENG Shu-guo1, 2, WANG Jian-yang1, 2, YIN Ming2

(1MedicineGraduateSchool，2DepartmentofOrthopedics,TheSecondAffiliatedHospital,NanchangUniversity,Nanchang330006,China.E-mail:yinming0791@aliyun.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effects of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells (hUC-MSCs) on the proliferation and migration of osteosarcoma cells (Saos-2) and the underlying molecular mechanism. METHODS: hUC-MSCs were isolated and cultured by tissue explants adherent method. The cell surface markers on hUC-MSCs were identified by flow cytometry. The effects of conditioned medium (CM) from hUC-MSCs (hUC-MSCs-CM), recombinant human interleukin-6 (rhIL-6) and IL-6 neutralizing antibody on the proliferation of Saos-2 cells were detected by CCK-8 assay and cell counting. IL-6 secretion of hUC-MSCs was assayed by ELISA. RT-PCR was used to assess the transcription level of proliferation-related genes proliferating cell nuclear antigen (PCNA),cyclinD1 andsurvivin. The migration potential of hUC-MSCs and Saos-2 cells was measured by Transwell assay. RESULTS: hUC-MSCs migrated to Saos-2 cells. hUC-MSCs-CM contained a high concentration of IL-6, up to (1 835.5±134.1) ng/L. hUC-MSCs-CM and rhIL-6 promoted the proliferation and migration of Saos-2 cells. Addition of neutralizing antibody against IL-6 in the hUC-MSCs-CM impaired this proliferation and migration of Saos-2 cells. The mRNA expression ofPCNA,cyclinD1 andsurvivinwas up-regulated by hUC-MSCs-CM and rhIL-6, while this effect was dramatically attenuated by treatment with IL-6 neutralizing antibody. CONCLUSION: hUC-MSCs migrate to osteosarcoma cells and promote the proliferation and migration of osteosarcoma cells through secreting IL-6invitro.

[KEY WORDS]Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells; Interleukin-6; Cell proliferation; Cell migration

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.02.002

[中圖分類號]R329.2+1； R730.23

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

通訊作者△Tel: 0792-86301236; E-mail: yinming0791@aliyun.com

*[基金項目]國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81160226)

[收稿日期]2015- 08- 10[修回日期] 2015- 12- 03

[文章編號]1000- 4718(2016)02- 0201- 07