冠蓋藤對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎大鼠足組織前列腺素E2含量及形態(tài)學(xué)的影響

秦莉花　李　晟　鐘華美　陳曉陽,3　吳艷飛,3　黃　寬,3　秦莉峰

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南　長沙　410208)

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冠蓋藤對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎大鼠足組織前列腺素E2含量及形態(tài)學(xué)的影響

秦莉花1李晟鐘華美2陳曉陽2,3吳艷飛2,3黃寬2,3秦莉峰4

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙410208)

〔摘要〕目的探討冠蓋藤水提取物對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎大鼠足組織前列腺素E2(PGE2)含量及形態(tài)學(xué)的影響。方法采用弗氏完全佐劑制備骨性關(guān)節(jié)炎模型，將隨機(jī)造模成功后大鼠隨機(jī)分為模型組，雷公藤多甙片組，冠蓋藤水提取物高、中、低劑量組。經(jīng)藥物干預(yù)28 d后，觀察足趾組織形態(tài)學(xué)及檢測(cè)組織PGE2含量。結(jié)果冠蓋藤水提取物高、中劑量組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退變較模型組和冠蓋藤水提取物低劑量組輕，僅軟骨表面細(xì)胞輕度纖維化。與正常組比較，模型組大鼠PGE2含量升高，經(jīng)冠蓋藤水提取物治療后PGE2含量明顯降低，并且以高劑量組最明顯。結(jié)論冠蓋藤的抗炎鎮(zhèn)痛機(jī)制之一可能通過降低組織中PGE2含量。

〔關(guān)鍵詞〕冠蓋藤；骨性關(guān)節(jié)炎；前列腺素E2；組織形態(tài)學(xué)

1湖南中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院

2湖南省教育廳中藥現(xiàn)代化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

3國家中藥管理局藥性與藥效研究三級(jí)實(shí)驗(yàn)室

4中南大學(xué)湘雅附二院骨科

第一作者：秦莉花(1980-)，女，副教授，博士，主要從事中醫(yī)藥防治更年期或老年疾病研究。

骨性關(guān)節(jié)炎是一種在骨外科常見的老年人慢性進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)病，該病是以關(guān)節(jié)軟骨的退行性病變?yōu)橹饕±硖卣?，病因尚未明確，病理生理過程十分復(fù)雜。好發(fā)于手、足、膝，中期骨性關(guān)節(jié)炎在相當(dāng)程度上影響患者的下肢運(yùn)動(dòng)功能。骨關(guān)節(jié)炎對(duì)患者生活質(zhì)量和社會(huì)公共衛(wèi)生事業(yè)的影響不可忽視。目前主要服用非甾體消炎藥消炎止痛，但長期服用往往引起藥物副作用，且治療效果不理想。民間用冠蓋藤治療骨性關(guān)節(jié)炎，其療效顯著，課題組前期研究表明本課題所用的冠蓋藤為柔毛冠蓋藤〔1〕，但其具體機(jī)制尚未明確。本課題研究冠蓋藤水提液對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎大鼠足組織前列腺素E2(PGE2)含量及形態(tài)學(xué)的影響。

1材料與方法

1.1動(dòng)物健康SD大鼠，雄性，SPF級(jí)，體重180~220 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(湘)2009-0004。

1.2藥物冠蓋藤在湖南省懷化市沅陵采集，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為柔毛冠蓋藤，制備成水煎液稱取冠蓋藤藥材1 500 g，分3次提取，最后濃縮成1 g生藥/ml的藥液，備用；雷公藤多甙片(上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號(hào)Z31020415)。以上藥物用時(shí)均由生理鹽水配成所需濃度。

1.3試劑及儀器二甲苯(天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20080921)。角叉菜膠(Sigma 公司，批號(hào)：45F-0427)；冰醋酸(濰坊潤潔化學(xué)有限公司)；弗氏完全佐劑F-5881(Sigma公司)；PGE2試劑盒(美國ADL公司)。

1.4方法

1.4.1骨性關(guān)節(jié)炎模型的建立取雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮內(nèi)注射FCA0.1 ml致炎〔2，3〕。原發(fā)病變表現(xiàn)為致炎側(cè)的關(guān)節(jié)腫脹，致敏當(dāng)天后即可出現(xiàn)；繼發(fā)病變一般于致炎后12～18 d出現(xiàn)，表現(xiàn)為非致炎側(cè)及雙前肢的關(guān)節(jié)腫脹。

1.4.2分組造模成功后的50只SD大鼠隨機(jī)分為5組：模型組，雷公藤組，冠蓋藤水提取物高、中、低劑量組，每組10只。另外取10只健康SD大鼠作為正常組。造模后，雷公藤組給予雷公藤多甙片混懸液15.44 mg/kg；冠蓋藤水提取物低、中、高劑量組分別給予冠蓋藤水提取物2.31，4.62，9.24 g生藥/kg，正常組給予等容量蒸餾水。致炎當(dāng)天，各組均采用灌胃方法給藥，每天1次，給藥時(shí)間28 d。

1.4.3PGE2含量的檢測(cè)治療28 d后用斷頭，取大鼠右后足取較上部位組織檢測(cè)PGE2含量，組織剪碎后用生理鹽水3 ml浸泡2 h后取出，3 000 r/min離心浸泡液5 min，吸取上清液0.5 ml，加入0.5 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液1 ml后，將試管置于50℃恒溫水浴中異構(gòu)化20 min,在278 nm出測(cè)定其光密度(OD)值，PGE2含量以每克炎性組織相當(dāng)?shù)奈展饷芏戎?A值)表示。

1.4.4形態(tài)學(xué)指標(biāo)治療28 d后用斷頭，取大鼠右后足，用10%甲醛固定，HE染色觀察足趾組織形態(tài)學(xué)。

2結(jié)果

2.1冠蓋藤水提取物對(duì)弗氏完全佐劑大鼠模型足組織PGE2的影響正常組PGE2含量為(3.96±0.19)，模型組為(12.87±0.65)，雷公藤組為(4.59±0.29)，冠蓋藤水提物高劑量組為(4.38±0.18)，冠蓋藤水提物中劑量組為(6.92±0.23)，冠蓋藤水提物低劑量組(8.37±0.21)。模型組的PGE2含量與空白組比較明顯升高(P=0.00)，說明造模成功。冠蓋藤水提取物高、中、低劑量組PGE2含量均較模型組明顯下降(P=0.01、0.00、0.00),并有一定的劑量依賴關(guān)系。

2.2各組大鼠右后足的形態(tài)學(xué)變化膝關(guān)節(jié)軟骨足趾病變見圖1。正常組軟骨細(xì)胞排列規(guī)則，表面光滑；模型組和冠蓋藤水提取物低劑量組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨在光鏡下可見軟骨細(xì)胞大量纖維化，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，膝關(guān)節(jié)軟骨表面的膠原纖維退化，軟骨基質(zhì)鈣化區(qū)變??；冠蓋藤水提取物高、中劑量組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退變較模型組和冠蓋藤水提取物低劑量組輕，僅軟骨表面細(xì)胞輕度纖維化。

圖1　冠蓋藤水提取物對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎大鼠足趾組織形態(tài)學(xué)的影響(HE，×400)

3討論

目前認(rèn)為，在骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中，PGE2能夠促進(jìn)骨吸收，參與軟骨基質(zhì)的破壞。同時(shí)前列腺素作為炎癥介質(zhì)，也參與炎癥反應(yīng)，組織在炎癥期間，可測(cè)到其中有高濃度的前列腺素。PGE2是一種重要的細(xì)胞生長和調(diào)節(jié)因子。在體內(nèi)水平過高時(shí)會(huì)引起發(fā)熱反應(yīng)。炎癥發(fā)生時(shí)，PGE2可使血管擴(kuò)張，水腫加劇并引起發(fā)熱疼痛〔4〕。

文獻(xiàn)報(bào)道，兔骨性關(guān)節(jié)炎模型組關(guān)節(jié)滑液中的PGE2含量比正常組有顯著增高(P<0.01)〔5〕。本實(shí)驗(yàn)說明冠蓋藤可以降低骨性關(guān)節(jié)炎大鼠的足組織中PGE2的含量，從而抑制炎癥反應(yīng)，改善關(guān)節(jié)周圍組織的痛覺過敏狀態(tài)，緩解疼痛，達(dá)到治療骨性關(guān)節(jié)炎的效果。

4參考文獻(xiàn)

1陳曉陽，鐘華美，吳艷飛，等.冠蓋藤藥用部位的生藥學(xué)研究〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012；23(4)：900-1.

2徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法〔M〕.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：723-4.

3馬玉琛，段斐，孟明.改良弗氏完全佐劑制備大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008；35(10)：1989-91.

4楊光華.病理學(xué)〔M〕.第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：59.

5王宇強(qiáng)，王小華，楊富國，等.仙仲注射液對(duì)兔早期膝骨性關(guān)節(jié)炎組織形態(tài)學(xué)改變及關(guān)節(jié)滑液白介素-β、炎前列腺素E2的影響〔J〕.天津中醫(yī)藥，2009；26(6):69-71.

〔2013-05-28修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

通訊作者：陳曉陽(1953-)，女，教授，主任醫(yī)師，碩士，主要從事中藥藥性理論基礎(chǔ)與應(yīng)用的研究。

基金項(xiàng)目：湖南省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目(2009033，201232)；湖南省教育廳中藥學(xué)重點(diǎn)學(xué)科項(xiàng)目

〔中圖分類號(hào)〕R268

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)03-0568-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.023