UPLC—MS/MS檢測煙草中腈菌唑殘留

薛原 戴長庚 周勇 胡寧貴 王岑岑 羅遠(yuǎn)輝 范成平 張權(quán) 代飛

摘 要：該文采用QuEChERS方法提取凈化煙草樣品，建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 （UPLC-MS/MS）檢測煙草中腈菌唑的殘留分析方法。以1%乙酸乙腈提取溶劑，PSA和GCB作為凈化劑，超高效液相色譜分離，電噴霧電離、正離子掃描，三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜以多反應(yīng)監(jiān)測掃描方式進(jìn)行檢測，以碎片離子對m/z289.116 /70.028進(jìn)行定性分析、m/z 289.116 /125.041 進(jìn)行基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品的外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為Y=21295x+156791，R2=0.9991，其線性范圍在1～500μg·L-1。結(jié)果表明，在0.01～5mg·kg-1添加水平范圍內(nèi)，腈菌唑在煙草中平均回收率在88.3%～93.0%，變異系數(shù)在5.2%～7.3%，檢出限（LOD）為0.029μg·kg-1，定量限（LOQ）為0.03μg·kg-1。該方法簡單、快速，適用于大量煙草樣品中腈菌唑的殘留檢測。

關(guān)鍵詞：腈菌唑；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；煙草

中圖分類號 S572 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）02-100-03

Determination of Myclobutanil Residues in Tobacco Using UPLC-MS/MS

Xue Yuan1 et al.

（1Anshun Branch of Guizhou Tobacco，Anshun 561000，China）

Abstract：A rapid and sensitive analytical method for determination of myclobutanil residues in tobacco samples has been established based on QuEChERS and UPLC-MS/MS.The sample was extracted by 1% acetic acid acetonitrile and then purified by primary secondary amine （PSA） and graphitized carbon black （GCB）.The mass spectrometerw as operated with electrospray in the positive ion mode （ ESI+ ） .The myclobutanil were quantified by external standard method and matched standard solution used to compensate for matrix effect.The myclobutanil results were on the intension of the characteristic m/z 289.116/70.028 ion and m/z 289.116/125.041 ion .Under the optimal conditions， the calibration curve showed a good linearity in the range of 1～500μg·L-1 with a correlation coefficient of

0. 9991 Average recoveries of myclobutanil in tobacco at three levels （0.01mg·kg-1，0.5mg·kg-1 and 5mg·kg-1） ranged from 88.3% to 93.0% with relative standard deviations （RSDs） from 5.2% to 7.3% （n = 5）.Limits of detections （LOD） of thifluzamide were 0.029μg·kg-1，while limits of quantifications （LOQ） were 0.03μg·kg-1，respectively.The method is simple，rapid and accurate，and it can meet the requirements of the domestic and international legislation.The method adapts to confirm residues of thifluzamide in rice，corn and potato.

Key words：Myclobutanil；UPLC-MS/MS；Tobacco

腈菌唑（Myclobutanil）是一種內(nèi)吸性廣譜的三唑類殺菌劑，屬于表角甾醇類生物合成抑制劑，對白粉病、銹病、黑星病、灰斑病、褐斑病、黑穗病等均具有較好的防治效果。腈菌唑由于藥持效期長，對作物安全，被認(rèn)為是一種前景較好的殺菌劑[1]。我國是世界上最大的煙草生產(chǎn)國，煙草也是我國部分地區(qū)的重要的經(jīng)濟(jì)作物，煙草稅收占到我國財政收入的10%[2]。近年來，隨著煙草品種的逐年增加及栽培制度的變化，煙草病蟲害如白粉病的發(fā)生也不斷加重。腈菌唑作為防治煙草白粉病的重要藥劑，被長期廣泛的使用。

目前，有報道采用氣相色譜（ECD）測定黃瓜[3]、柑橘[4]、荔枝[5-6]上的腈菌唑殘留量；液相色譜法測定黃瓜[7]和飼料[8]中腈菌唑的殘留；氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）測定大蔥[9]、煙草[10]、西紅柿[11]、化妝品[12]上腈菌唑的殘留；液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測腈菌唑在蔬菜[13]、草莓[14]及化妝品[15]中的殘留。但較氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜而言，氣相色譜-ECD和液相色譜法檢測易受雜質(zhì)干擾影響，且檢測時間長。在腈菌唑殘留分析的前處理中多采用固相萃取技術(shù)凈化，但其費(fèi)時長、溶劑消耗量大，對環(huán)境造成二次污染。QuEChERS方法是Steven[15]于2003年提出的應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的前處理技術(shù)，目前已成為世界多國認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)方法，并應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析。本文旨在建立一種簡便快捷的檢測煙草中腈菌唑殘留的分析方法。該方法前處理簡單，易操作，準(zhǔn)確度高，能夠滿足煙草中腈菌唑殘留量的快速檢測和確證的要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑 腈菌唑標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg·L-1，北京勤誠亦信有限公司）；乙腈（分析純）；甲醇（色譜純）；乙酸（分析純）；水（屈臣氏純凈水）；GCB（石墨化碳黑，德國CNW Technologies GmbH 公司）；PSA（N-丙基乙二胺，Agela Technologies公司）。

1.1.2 儀器 HR 1727/06/BC 飛利浦粉碎機(jī)（珠海飛利浦家庭電器有限公司）；SK-1漩渦混合器（江蘇中大儀器廠）；TG16臺式離心機(jī)（長沙邁佳森儀器設(shè)備有限公司）；Filter Unit濾膜（0.22μm，Agela Technologies公司）；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS，TSQ-Vantage，Thermo公司）；Hypersil GOLD色譜柱（100mm×2.1mm，1.9μm，Thermos公司）。

1.2 標(biāo)樣溶液的配置 準(zhǔn)確移取適量腈菌唑標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用乙腈稀釋成0.5mg·L-1、0.1mg·L-1、0.05mg·L-1、0.01mg·L-1、0.001mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取 準(zhǔn)確稱取2.5g粉碎的煙草樣品于50mL具塞離心管中，加入5mL純凈水和10mL1%乙酸乙腈，渦旋提取5min，超聲30min，靜置30min，再加入3g氯化鈉和4g無水硫酸鎂，渦旋1min，5 000r離心5min。

1.3.2 凈化 取1.0mL上清液到盛有150mg無水MgSO4、50mgPSA和20mgGCB的2mL離心管中，渦旋1min，以5 000r離心5min，上清液過0.22μm有機(jī)膜，取200μL濾液，用純凈水定容到1mL，備用。

1.4 檢測方法

1.4.1 色譜條件 C18色譜柱，柱溫：40℃，流動相A：甲醇，流動相B：0.1%甲酸水，梯度洗脫程序（見表1）。流速：0.2mL·min-1；進(jìn)樣量：5μL。

1.4.2 質(zhì)譜條件 掃描方式：大氣壓化學(xué)電離ESI（+）；定性離子對m/z289.116/70.028、m/z 289.116/125.041，定量離子對m/z 289.116 /125.041，碰撞能量分別為12V和13V，射頻電壓 82V。電噴霧電壓3 500V；碰撞氣為氬氣，鞘氣及輔助氣是氮?dú)猓蕷饬魉?0arb，輔助氣流速 10arb。腈菌唑的保留時間為6.04min。采用外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 測試條件優(yōu)化 為了獲得最佳的靈敏度和分離效果，首先用直接進(jìn)樣方式，掃描范圍m/z為100～500，選擇合適的離子源。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，電噴霧離子化、正離子掃描模式可使腈菌唑具有較好的電離效果并獲得特征離子峰[M+H]。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步選擇最適的監(jiān)測離子、射頻電壓及碰撞能量。通過實(shí)驗(yàn)證明，乙腈和0.1%甲酸水作為流動相能取得最高靈敏度，但甲醇和0.1%甲酸水為流動相時，峰型是最好的。在靈敏度足夠高的前提下，選擇了甲醇和0.1%甲酸水為流動相。當(dāng)進(jìn)樣溶劑為乙腈+水（V∶V=20∶80）時，峰形比純乙腈要好。

2.2 前處理?xiàng)l件的選擇 對檢測腈菌唑，有采用甲醇或乙腈做提取溶劑的報道，本方法采取甲醇和0.1%乙酸乙腈為提取溶劑，取得的回收率較甲醇或乙腈作為提取溶劑的回收率好。本方法分別選取PSA、弗羅里硅土、石墨化炭黑（GCB）和C18分別作為凈化劑，發(fā)現(xiàn)用PSA+GCB作為凈化劑既能在去除基質(zhì)中的雜質(zhì)的同時還能取得理想的回收率。

2.3 方法的靈敏度、線性相關(guān)性、準(zhǔn)確度及精密度 本實(shí)驗(yàn)靈敏度以最低添加濃度0.01mg/kg的色譜圖的噪音信號的3倍和10倍確定，腈菌唑在煙草中的最低檢測限（LOD）（S/N=3）分別為0.029μg·kg-1，定量限（LOQ）（S/N=10）分別為0.09μg·kg-1。把500μg·L-1、100μg·L-1、50μg·L-1、10μg·L-1、1μg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液和煙草基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以峰面積（Y）對濃度（μg·L-1）（X）作圖，得到腈菌唑的標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線：Y=21295x+156791（R2=0.999 1）（圖1）；煙草基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線：Y=2103.8x+14802（R2=0.99 9）（圖2）。本方法用添加回收率和變異系數(shù)衡量準(zhǔn)確度及精密度。在空白的煙草添加3個濃度腈菌唑標(biāo)液，每個濃度重復(fù)5次，計算添加回收率和變異系數(shù)。腈菌唑在煙草中平均回收率為88.3%～93.0%，變異系數(shù)為5.2%～7.3%（表1）。本方法的準(zhǔn)確性、精密度均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求[17]。色譜圖見圖3。

本實(shí)驗(yàn)中，用0.001mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同色譜條件下，1h進(jìn)樣1次，連續(xù)進(jìn)樣5次，所測得峰面積的變異系數(shù)為7.6%，表明儀器具有很好的穩(wěn)定性。在煙草局抽查的煙草樣品中檢測得腈菌唑的殘留量均小于0.001mg·kg-1。

3 結(jié)論

本文采用1%乙酸乙腈提取、PSA加GCB凈化，建立了煙草樣品的UPLC-MS/MS快速檢測腈菌唑殘留量的方法。腈菌唑在煙草中平均回收率為89.1%～105.9%，變異系數(shù)為4.9%～8.5%。該方法簡單快速、準(zhǔn)確可靠，可用于大量樣品的快速檢測。

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（責(zé)編：張宏民）