疣安顆粒制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

杜云鵬　黃貴東　鄧航　鄧俊剛

摘要：目的：建立疣安顆粒的制備方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用水煮醇沉工藝制成顆粒劑，采用薄層色譜法對(duì)白術(shù)、土茯苓、澤瀉、紫草、烏梅、黃柏進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：采用薄層色譜法對(duì)白術(shù)、土茯苓、澤瀉、紫草、烏梅、蒼術(shù)、黃柏進(jìn)行定性鑒別特征性強(qiáng)、重現(xiàn)性好。結(jié)論：本顆粒制備方法合理、簡便、可行，所建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可為疣安顆粒的臨床應(yīng)用和療效提供保證。

關(guān)鍵詞：疣安顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜

中圖分類號(hào)：R927.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-2409（2016）05-0079-04

疣安顆粒由黃芪、白術(shù)、土茯苓、蒼術(shù)、黃柏、薏仁、丹皮、通草、澤瀉、馬齒莧、紫草、烏梅等多味中藥組成，具有清熱解毒、利尿消腫、健脾除濕、消炎的功能，用于利尿除濕，在臨床上用于濕疣的預(yù)防和治療。為了更好地發(fā)揮其療效，便于臨床服用，將原方制成顆粒劑，并制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。采用水煮醇沉工藝制成顆粒劑，采用薄層色譜法對(duì)其主要成分白術(shù)、土茯苓、澤瀉、紫草、烏梅、蒼術(shù)、黃柏進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果表明所建立的方法準(zhǔn)確、快速、靈敏，可以作為該顆粒劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與試劑

1.1儀器

ZF-1型三用紫外分析儀（上海驥輝科學(xué)分析儀器有限公司），RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），SH2-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠），F(xiàn)C204型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司），WK2102型電磁爐（美的集團(tuán)股份有限公司），TDL-50B低速離心機(jī)（上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司），A6300型相機(jī)（日本索尼公司），展開缸等。

1.2試劑

本實(shí)驗(yàn)藥材購自安徽井泉集團(tuán)中藥飲片有限公司：白術(shù)（批號(hào)：150601）、土茯苓（批號(hào)：150501）、澤瀉（批號(hào)：150301）、紫草（批號(hào)：150501）、烏梅（批號(hào)：150501）、蒼術(shù)（批號(hào)：150501）、黃柏（批號(hào)：150301）、薏仁（批號(hào)：150501）、通草（批號(hào)：150501）、丹皮（批號(hào)：150501）。

樣品：疣安顆粒，本實(shí)驗(yàn)室自制。

2方法與結(jié)果

2.1疣安顆粒的制備

將該處方中的12味中藥材備齊、凈選，按處方8倍量投料加水煎煮兩次，合并煎煮液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.10，加95%乙醇沉淀過夜（至含50%醇量），濾取上清液。減壓低溫濃縮至稠浸膏（60～65℃測定相對(duì)密度為1.20～1.25）。取干燥的糖粉適量，置攪拌機(jī)中混合均勻，加稠浸膏1份攪拌混合，加適量75%乙醇調(diào)整濕度制成軟材，造粒機(jī)擠壓過10目篩制成濕顆粒，60～65℃干燥，整粒過篩，共得顆粒2 kg。

2.2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

2.2.1白術(shù)的TLC鑒別 取3個(gè)批次的疣安顆粒適量研細(xì)，稱約10 g，加正己烷20ml，超聲處理15 min，取濾液作為供試品溶液。另取不含白術(shù)的陰性樣品及白術(shù)對(duì)照藥材各10 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液和對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2015年版Ⅳ部通則0502，下簡稱通則0502）試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）一乙酸乙酯（50：1）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無相應(yīng)的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。詳見圖1。

2.2.2土茯苓的TLC鑒別 取3個(gè)批次的疣安顆粒適量研細(xì)，稱約5 g，加甲醇20 ml，超聲處理30 min，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml，使其溶解作為供試液；另取不含土茯苓的陰性樣品及土茯苓對(duì)照藥材5 g，同法制成陰性對(duì)照溶液和對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸（5：4：2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以20 g/L三氯化鋁乙醇試液，放置5 min后，于紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無相應(yīng)的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。詳見圖2。

2.2.3澤瀉的TLC鑒別 取3個(gè)批次的疣安顆粒適量研細(xì)，稱約10g，加水40ml溶解，加飽和食鹽水2ml，充分振搖，用乙醚振搖萃取2次，30 ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml溶解，作為供試品溶液。取澤瀉對(duì)照藥材10g，加水適量，煎煮30 min，濾過，濾液濃縮至20 ml，按照供試品溶液制備方法制備，作為對(duì)照藥材溶液；取不含澤瀉的陰性樣品10 g，同法制成陰性對(duì)照溶液。按薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（10：6：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無相應(yīng)的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。詳見圖3。

2.2.4紫草的TLC鑒別 取3個(gè)批次的疣安顆粒適量研細(xì)，稱約5 g，加石油醚（60～90℃）20ml，超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至約1 ml。另取不含紫草的陰性樣品及紫草對(duì)照藥材各5 g，同法制成陰性對(duì)照溶液和對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：5：0.5：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%氫氧化鉀甲醇溶液，斑點(diǎn)變?yōu)樗{(lán)色。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無相應(yīng)的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。詳見圖4。

2.2.5烏梅的TLC鑒別 取3個(gè)批次的疣安顆粒適量研細(xì)，稱約10g，加熱水50 ml使溶解，放冷，用醋酸乙酯振搖提取2次，每次30 ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1 ml溶解，作為供試品溶液。另取烏梅對(duì)照藥材5 g，加水50ml，煮沸1 h，放冷，濾過，濾液同法制成對(duì)照藥材溶液；另取不含烏梅的陰性對(duì)照藥品10 g，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5：3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，于紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無相應(yīng)的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。詳見圖5。

2.2.6黃柏的TLC鑒別 取供試品粉末2 g，加1%醋酸甲醇溶液40ml，于60℃超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至2 ml，作為供試品溶液，另取黃柏對(duì)照藥材2 g，加1%醋酸甲醇溶液40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液，取缺黃柏的陰性對(duì)照品，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)點(diǎn)板，以石油醚（60～90℃）：甲酸乙酯：甲酸（5：15：1）的下層溶液為展開劑，置氨蒸汽飽和的展開缸內(nèi)展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。詳見圖6。

3討論

疣安顆粒劑的制作由于處方中藥煎煮出來的藥液糖苷較多，醇沉過程中應(yīng)避免攪拌，否則會(huì)引起在加入蔗糖粉進(jìn)行攪拌至一定濕度時(shí)難度較大，造成過篩困難；考察醇沉?xí)r，分別加入30%、50%、60%的乙醇，結(jié)果50%乙醇濃度可以沉淀大部分鞣質(zhì)，為制劑得到較好的浸膏；在對(duì)白術(shù)進(jìn)行鑒別時(shí)，點(diǎn)樣次數(shù)應(yīng)多次，并每點(diǎn)1次應(yīng)用吹風(fēng)筒吹干再點(diǎn)第2次，避免展開后點(diǎn)擴(kuò)散嚴(yán)重，影響鑒定；對(duì)于極性較大的樣品，在展開劑的極性選擇上應(yīng)選用極性小的展開劑，否則引起拖尾，如土茯苓、黃柏、薏仁的鑒定。

疣安顆粒中白術(shù)、土茯苓、蒼術(shù)、黃柏、薏仁、澤瀉、紫草、烏梅薄層鑒別與陰性對(duì)照品相比無干擾，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，適合于疣安顆粒的質(zhì)量控制。