清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

潘春暉，楊紅玉，張 煊，，任園琴，彭曉鳳，劉 濤，＊

（1.四川德成動(dòng)物保健品有限公司，德陽(yáng)618100；2.成都大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，成都610106）

清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

潘春暉1，楊紅玉1，張 煊1，2，任園琴2，彭曉鳳2，劉 濤1，2＊

（1.四川德成動(dòng)物保健品有限公司，德陽(yáng)618100；2.成都大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，成都610106）

摘 要：為完善清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用薄層色譜鑒別清瘟敗毒散中的黃連、地黃、梔子、連翹、知母、淡竹葉；采用HPLC法測(cè)定清瘟敗毒散中的梔子苷含量，色譜條件為：ODS C18色譜柱（4.6mm ID×250mm，5μm），乙腈－水（13∶87）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。研究結(jié)果表明，在建立的薄層色譜鑒別結(jié)果中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，供試品色譜顯示相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾；梔子苷在0.062～0.370μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y＝1 789.1x－14.296，R2＝0.99984，平均回收率為99.60%，RSD為0.76%。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能更好地控制清瘟敗毒散的質(zhì)量，可作為清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：清瘟敗毒散；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜；測(cè)定

清瘟敗毒飲是清代著名溫病學(xué)家余師愚所創(chuàng)制的名方［1］，治一切火熱，表里俱盛，狂躁煩心，口干咽痛，大熱干嘔，錯(cuò)語(yǔ)不眠，吐血衄血，熱盛發(fā)斑［2］，載于其所著的《疫疹一得》一書(shū)中，現(xiàn)收錄于《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010年版二部。本藥由石膏、地黃、水牛角、黃連等14味藥材組成，是“白虎湯”、“黃連解毒湯”和“犀角地黃湯”3方加減化裁而得［3］。清瘟敗毒散由清瘟敗毒飲改劑型而來(lái)，具有瀉火解毒，涼血的功效，在獸藥臨床上主要用于治療熱毒發(fā)斑，高熱神昏［4］，在臨床上有著較好的療效，被收載于2010年版《中華人民共和國(guó)獸藥典》二部，其現(xiàn)有法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，僅有顯微鑒別和黃連的薄層鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，該標(biāo)準(zhǔn)很難控制其產(chǎn)品質(zhì)量，不能保證產(chǎn)品臨床療效。為了提升清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品的安全性、有效性與質(zhì)量可控性，本試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑

FA2004分析電子天平購(gòu)自上海良平儀器儀表有限公司；DZF－6050型真空干燥箱購(gòu)自北京中興偉業(yè)儀器有限公司；P230II型高效液相色譜儀測(cè)定系統(tǒng)購(gòu)自大連伊力特分析儀器有限公司。正丁醇、冰乙酸、甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、氨水、硫酸、香蘭素、丙酮、甲酸、二甲苯均為分析純均購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠；清瘟敗毒散購(gòu)自四川德成動(dòng)物保健品有限公司；石膏、地黃、水牛角、黃連、梔子、牡丹皮、黃芩、赤芍、玄參、知母、連翹、桔梗、甘草、淡竹葉對(duì)照藥材均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.2薄層鑒別

1.2.1黃連的薄層鑒別 參照文獻(xiàn)［5－7］報(bào)道的方法，取清瘟敗毒散2g，加甲醇25mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使其溶解，作為供試品溶液；取黃連對(duì)照藥材0.25g，按清瘟敗毒散處方（除去黃連藥材），同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液。分別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液與陰性樣品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－冰醋酸－水（10∶1∶2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，置紫外光燈（365.5nm）下檢視。

1.2.2地黃的薄層鑒別 參照文獻(xiàn)［8－10］報(bào)道的方法，取清瘟敗毒散2g，加甲醇25mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使其溶解，采用乙酸乙酯振搖提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液；取地黃對(duì)照藥材1g，按清瘟敗毒散處方（除去地黃藥材），同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液。分別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液與陰性樣品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－氨水（14∶1∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃下，加熱至斑點(diǎn)清晰。

1.2.3梔子的薄層鑒別 參照文獻(xiàn)［11－13］報(bào)道的方法，取本品粉末2g，加50%甲醇25mL，超聲處理40min，濾過(guò)，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取梔子對(duì)照藥材0.5g、按清瘟敗毒散處方（除去梔子藥材），同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液。再取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－丙酮－甲酸－水（5∶5∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色斑點(diǎn)；再噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

1.2.4連翹的薄層鑒別 參照文獻(xiàn)［14－16］報(bào)道的方法，取清瘟敗毒散2g，加甲醇10mL，超聲處理30min，過(guò)濾，取濾液作為供試品溶液；取連翹對(duì)照藥材1g、按清瘟敗毒散處方（除去連翹藥材），同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇（5∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰。

1.2.5淡竹葉的薄層鑒別 參照文獻(xiàn)［17］報(bào)道的方法，取清瘟敗毒散2g，加甲醇10mL超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；取淡竹葉0.5g、按清瘟敗毒散處方（除去淡竹葉藥材），同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液。分別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、陰性樣品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二甲苯－乙酸乙酯－丙酮－甲酸－水（2.2∶4.8∶2.5∶0.8∶1.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365.5nm）下檢視。

1.2.6知母的薄層鑒別 參照文獻(xiàn)［18－19］報(bào)道的方法，取本品粉末2g，加30%丙酮10mL，超聲處理20min，取上清液作為供試品溶液。另取知母對(duì)照藥材0.2g、按清瘟敗毒散處方（除去知母藥材），同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－冰醋酸－水（4∶1∶5）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，置紫外光燈（365.5nm）下視檢。

1.3清瘟敗毒散中梔子苷的含量測(cè)定

1.3.1色譜條件的篩選 參考2015版《中華人民共和國(guó)藥典》一部［11］梔子項(xiàng)下梔子苷含量測(cè)定方法，色譜柱為（C18 4.6mm ID×250mm，5μm）；流速為1.0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣體積為10μL；以分離度R為指標(biāo)，考察流動(dòng)相。

1.3.2供試品溶液制備方法研究

1.3.2.1提取方式 取2份清瘟敗毒散各2.0g，精密稱定，精密移取25mL甲醇加入，稱定重量，分別超聲（功率100W，頻率40kHz）提取與加熱回流提取30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)其含量。

1.3.2.2提取溶媒種類 取清瘟敗毒散2.0g、3份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密移取25mL水、無(wú)水乙醇，甲醇加入，稱定重量，超聲處理30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)其含量。

1.3.2.3溶媒濃度 取4份清瘟敗毒散各2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密移取25mL 25%、50%、75%、100%的甲醇加入，稱定重量，超聲處理30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)其含量。

1.3.2.4溶媒用量 取4份清瘟敗毒散各2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密移取75%的甲醇10、25、50、100mL加入，稱定重量，超聲處理30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)其含量。

1.3.2.5提取時(shí)間 取4份清瘟敗毒散各2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密移取50mL 75%的甲醇加入，稱定重量，分別超聲處理15、30、45、60min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)其含量。

1.3.3對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液與陰性樣品溶液的制備 精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.0309mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取梔子對(duì)照藥材0.1g、清瘟敗毒散處方（除梔子藥材），按供試品溶液的制備方法，同法制得對(duì)照藥材溶液與陰性樣品溶液。

1.3.4梔子苷的方法學(xué)研究

1.3.4.1專屬性 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液在2.2.1所確定的色譜條件下進(jìn)樣分析。

1.3.4.2線性關(guān)系 使用自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取梔子苷對(duì)照品（0.0309mg／mL）2、4、6、8、10、12μL，按2.2.1的色譜條件進(jìn)樣分析。

1.3.4.3精密度 使用自動(dòng)進(jìn)樣器吸取梔子苷對(duì)照品（0.0309mg／mL）10μL，按2.2.1的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算RSD值。

1.3.4.4穩(wěn)定性 取清瘟敗毒散2.0g，精密稱定，精密移取50mL 75%的甲醇，超聲提取30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按2.2.1的色譜條件于0、2、4、6、8、10h分別進(jìn)樣。根據(jù)梔子苷的峰面積計(jì)算RSD值。

1.3.4.5重復(fù)性 取清瘟敗毒散2.0g、6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密移取50mL 75%的甲醇加入，稱定重量，超聲處理30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品。按2.2.1的色譜條件分別進(jìn)樣，根據(jù)梔子苷的含量計(jì)算RSD值。

1.3.4.6加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的清瘟敗毒散1.0g、6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密移取50mL 75%的甲醇和2.6mL梔子苷對(duì)照品（0.2732mg／mL），稱定重量，超聲處理30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品。按2.2.1的色譜條件分別進(jìn)樣，根據(jù)峰面積測(cè)定梔子苷含量，計(jì)算回收率、平均加樣回收率及RSD值。

2 結(jié)果與分析

2.1薄層鑒別

清瘟敗毒散組方中黃連、地黃、梔子、連翹、淡竹葉及知母的薄層鑒別，與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置，供試品色譜顯示相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾結(jié)果（圖1～6）。

2.2清瘟敗毒散中梔子苷的含量測(cè)定

2.2.1色譜條件的篩選 以乙腈－水（15∶85）為流動(dòng)相，結(jié)果顯示供試品色譜中梔子苷與后一峰的分離度R＝0.86＜1.5，達(dá)不到分離要求；以乙腈－水（13∶87）為流動(dòng)相，結(jié)果顯示供試品色譜中梔子苷與后一峰的分離度R＝1.61＞1.5，滿足分離要求。故后續(xù)試驗(yàn)梔子色譜條件：苷色譜柱為（C18 4.6mm ID×250mm，5μm）；流速為1.0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣體積為10μL；流動(dòng)相為乙腈－水（13∶87）。

2.2.2供試品溶液制備方法研究

2.2.2.1提取方式 超聲與加熱回流提取兩種提取方式所得梔子苷含量均為0.070%。超聲簡(jiǎn)便，且節(jié)約時(shí)間。

2.2.2.2提取溶媒種類 25mL水、無(wú)水乙醇，甲醇超聲提取30min，所得梔子苷含量分別為0.032%、0.047%、0.061%。

圖1　黃連的薄層鑒別Fig.1 The TLC identification ofCoptis

圖2　地黃的薄層鑒別Fig.2 The TLC identification ofRadixRehmanniae

圖3　梔子的薄層鑒別Fig.3 The TLC identification ofGardenia

圖4　連翹的薄層鑒別Fig.4 The TLC identification ofForsythia

圖5　淡竹葉的薄層鑒別Fig.5 The TLC identification ofLophatherumgracileBrongn

圖6　知母的薄層鑒別Fig.6 The TLC identification ofRhizomaanemarrhenae

2.2.2.3溶媒濃度 25mL 25%、50%、75%、100%的甲醇超聲提取30min，所得梔子苷含量分別為0.060%、0.063%、0.066%、0.063%。

2.2.2.4溶媒用量 10、25、50、100mL 75%的甲醇超聲提取30min，所得梔子苷含量分別為0.0586%、0.0537%、0.0625%、0.0590%。

2.2.2.5提取時(shí)間 50mL 75%的甲醇超聲處理15、30、45、60min，所得梔子苷含量分別為0.0606%、0.0628%、0.0629%、0.0633%，當(dāng)提取時(shí)間達(dá)到30min后，梔子苷含量基本不再增加。

2.2.3供試品溶液的制備 經(jīng)上述考察，供試品溶液的制備方法為：取清瘟敗毒散2.0g，精密稱定，精密移取50mL 75%的甲醇，超聲提取30min，放冷至室溫，補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4梔子苷的方法學(xué)研究

2.2.4.1專屬性 供試品色譜圖在與梔子苷對(duì)照品色譜圖主峰相應(yīng)的保留時(shí)間處有峰，且陰性樣品色譜圖在與梔子苷對(duì)照品色譜圖主峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)峰，即陰性無(wú)干擾（圖7～9）。

圖7　梔子苷對(duì)照品色譜Fig.7 The control chromatogram ofGardenin

圖8　供試品色譜圖Fig.8 The chromatography of samples

圖9　陰性樣品色譜圖Fig.9 The chromatography of negative samples

2.2.4.2線性關(guān)系 以梔子苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為y＝1789.1x－14.296，R2＝0.99984，表明梔子苷在0.062～0.370μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.4.3精密度 按2.2.1的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積分別為596.262、593.426、592.462、591.343、588.809、591.483mAU，根據(jù)峰面積計(jì)算RSD值為0.292%。

2.2.4.4穩(wěn)定性 按2.2.1的色譜條件于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，峰面積分別為920.199、923.574、925.085、920.760、925.430、918.162。根據(jù)梔子苷的峰面積計(jì)算RSD值為0.335%。

2.2.4.5重復(fù)性 按2.2.1的色譜條件測(cè)定6份樣品的梔子苷含量分別為0.0711%、0.0716%、0.0715%、0.0706%、0.0620%、0.0613%，根據(jù)梔子苷的含量計(jì)算RSD值為1.098%。

2.2.4.6加樣回收率試驗(yàn) 按2.2.1的色譜條件進(jìn)樣，根據(jù)峰面積測(cè)定梔子苷含量，計(jì)算回收率分別為98.42%、99.11%、100.52%、100.12%、99.92%、99.51%，平均加樣回收率為99.60%，RSD值為0.76%。

3 討 論

清瘟敗毒散中梔子的薄層鑒別，供試品的點(diǎn)樣量較少時(shí)，供試品色譜與梔子對(duì)照藥材色譜在相同位置上有一個(gè)草綠色斑點(diǎn)，但供試品色譜與梔子苷對(duì)照品色譜在相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)；供試品點(diǎn)樣量增加后，草綠色斑點(diǎn)消失，梔子苷對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)顯現(xiàn)，這可能是因?yàn)榍逦翑《旧⒅袟d子苷含量低，隨著點(diǎn)樣量的增加，梔子苷對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)顯現(xiàn)出來(lái)，草綠色斑點(diǎn)卻被其他成分的斑點(diǎn)覆蓋。

清瘟敗毒散作為中獸藥大復(fù)方制劑，組成成分復(fù)雜，本試驗(yàn)曾對(duì)清瘟敗毒散組方中的牡丹皮、玄參、桔梗等進(jìn)行薄層定性鑒別，都因陰性干擾嚴(yán)重，專屬不強(qiáng)等原因無(wú)法建立其鑒別方法。

黃有霖等［5］研究表明黃連鑒別的展開(kāi)劑正丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶2），發(fā)現(xiàn)亮黃色斑點(diǎn)相互重疊，分離度不好；曾試驗(yàn)2015版《中國(guó)藥典》一部連翹項(xiàng)下薄層鑒別的展開(kāi)劑三氯甲烷－甲醇（8∶1），發(fā)現(xiàn)展開(kāi)速度太慢，展開(kāi)效果不理想；照2015版《中國(guó)藥典》一部項(xiàng)下梔子苷的含量測(cè)定方法，也不能直接用于清瘟敗毒散中梔子苷的含量測(cè)定。不能直接將已有法定標(biāo)準(zhǔn)或文獻(xiàn)報(bào)道的單味藥材鑒別與含量測(cè)定方法，照搬作為中藥復(fù)方中藥材的鑒別方法。復(fù)方中藥的的成分更加復(fù)雜，成分之間的相互干擾更加嚴(yán)重。

清瘟敗毒散現(xiàn)有法定標(biāo)準(zhǔn)雖有性狀及顯微鑒別，但缺乏專屬性；僅有黃連的薄層鑒別，但處方中有14味藥材，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能控制產(chǎn)品質(zhì)量；缺乏定量指標(biāo)，不符合現(xiàn)代復(fù)方中藥的質(zhì)量控制模式。本研究有利于提升清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)采用薄層色譜鑒別清瘟敗毒散中的黃連、地黃、梔子、連翹、知母、淡竹葉；采用HPLC法測(cè)定清瘟敗毒散中的梔子苷含量。薄層色譜鑒別中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，供試品色譜顯示相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾；梔子苷在0.062～0.370μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y＝1789.1x－14.296，R2＝0.99984，平均回收率為99.60%，RSD為0.76%。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能更好地控制清瘟敗毒散的質(zhì)量，可作為清瘟敗毒散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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（責(zé)任編輯 秦 彤）

中圖分類號(hào)：S854.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671－7236（2016）12－3170－07

doi：10.16431／j.cnki.1671－7236.2016.12.013

收稿日期：2016－03－10

基金項(xiàng)目：四川省千人計(jì)劃支持項(xiàng)目（川特聘第332號(hào)）

作者簡(jiǎn)介：潘春暉（1974－），男，四川達(dá)州人，學(xué)士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事獸藥研究開(kāi)發(fā)，E－mail：892086915＠qq.com

通信作者：＊?jiǎng)?濤（1976－），男，四川南充人，博士，研究員級(jí)高級(jí)工程師，主要從事中藥新藥研究及成藥質(zhì)量再評(píng)價(jià)研究工作，E－mail：liutao0578＠sina.com

Research on the Promotion of Qingwenbaidu Powder Quality Standard

PAN Chun－h(huán)ui1，YANG Hong－yu1，ZHANG Xuan1，2，REN Yuan－qin2，PENG Xiao－feng2，LIU Tao1，2＊
（1.SichuanDechengAnimalHealthProductsCo.，Ltd.，Deyang618100，China；2.PharmaceuticalandBiologicalEngineeringCollege，ChengduUniversity，Chengdu610106，China）

Abstract：To improve the quality standard of Qingwenbaidu powder，TLC was used to qualitative identity ofCoptis，RadixRehmanniae，Gardenia，F(xiàn)orsythia，RhizomaAnemarrhenaandLophatherumgracileBrongn in Qingwenbaidu powder.The content of gardenin was determined by HPLC.Stationary phase were performed on ODS C18column（4.6mm ID×250mm，5μm）and the mobile phase was acetonitrile and water（13∶87），the detection wavelength was 238nm.The results showed that in the relative position of the chromatography of the control medicinal material，the chromatogram of the test sample showed the same color spots，and the negative sample had no interference.There was a good linear relationship（R2＝0.9999）when the garden in range of 0.062to 0.370μg.Its regression equation was y＝1 789.1x－14.296and R2＝0.99984.The average recovery was 99.60%and RSD was 0.76%.This method was simple，accurate and reproducible，which could better control the quality of the Qingwenbaidu powder，and could be used as the quality standard of Qingwenbaidu powder.

Key words：Qingwenbaidu powder；quality standard；TLC；determination