高效液相色譜法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸鈉含量

李 玲，陳乃江，姜 燕

(江蘇省連云港市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 連云港 222006)

高效液相色譜法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸鈉含量

李 玲，陳乃江，姜 燕

(江蘇省連云港市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 連云港 222006)

目的 建立測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚口服溶液中防腐劑苯甲酸鈉含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱為Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈－0.05 mol／L乙酸銨（15∶85），流速為1.0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20 L。結(jié)果 苯甲酸鈉質(zhì)量濃度在10.04～100.4 g／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r＝0.999 9)，平均回收率為99.83%，RSD為0.99%（n＝9），苯甲酸鈉檢測(cè)限為1.3 ng。結(jié)論該方法適用于對(duì)乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸鈉的質(zhì)量控制，可為該品種標(biāo)準(zhǔn)的提升提供參考。

高效液相色譜法；對(duì)乙酰氨基酚口服溶液；苯甲酸鈉；防腐劑；含量測(cè)定

對(duì)乙酰氨基酚是臨床使用極其廣泛的解熱鎮(zhèn)痛藥[1]，屬于乙酰苯胺類藥物。對(duì)乙酰氨基酚口服溶液為液體制劑，在液體制劑的制備過(guò)程中很難完全避免微生物污染，為確保產(chǎn)品的安全性，會(huì)添加一定量的防腐劑，以達(dá)到有效的防腐目的[2]。苯甲酸及其鈉鹽由于價(jià)格低廉及抑菌范圍廣，目前在國(guó)內(nèi)仍作為主要防腐劑添加到口服液類藥品、食品中，但過(guò)量攝入防腐劑對(duì)人體有一定毒性。苯甲酸及其鈉鹽的使用頗受爭(zhēng)議，在有些國(guó)家已經(jīng)限制或禁止使用[3]。我國(guó)尚未對(duì)口服液類藥品中防腐劑的含量測(cè)定方法作出規(guī)定，本研究參考有關(guān)防腐劑檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)[4－6]，采用高效液相色譜法對(duì)對(duì)乙酰氨基酚口服溶液中的苯甲酸鈉含量進(jìn)行測(cè)定，以便控制防腐劑使用量，保證用藥的安全性，為提高產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀（Waters 2996 DAD檢測(cè)器，Empower色譜工作站，Waters公司）；Sartorius BP211D型電子分析天平(十萬(wàn)分之一)。

1.2 試藥

苯甲酸鈉對(duì)照品（批號(hào)為 100433－200301，含量100%），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)乙酰氨基酚口服溶液和滴劑（市售）；乙腈為色譜純，乙酸銨為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.05 mol／L乙酸銨（15∶85）；流速：1.0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按苯甲酸鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2.2 溶液制備

精密稱取苯甲酸鈉對(duì)照品50.21 mg，置100 mL容量瓶中，加水超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液5 mL置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液。

精密量取本品2 mL置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果苯甲酸鈉與對(duì)乙酰氨基酚及其他雜質(zhì)均能完全分開，苯甲酸鈉的保留時(shí)間約為5.5 min，表明該方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：精密量取上述對(duì)照品貯備液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，各精密吸取20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、對(duì)照品質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝56 533 X＋14 515，r＝0.999 9(n＝7)。結(jié)果表明，苯甲酸鈉質(zhì)量濃度在10.04～100.4 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液（批號(hào)為AAF4519），分別于0，2，4，6，8，12 h時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 0.8%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定苯甲酸鈉峰的面積。結(jié)果的 RSD＝0.4%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為 AAF4519），依法平行制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果苯甲酸鈉含量平均值為0.197%，RSD為0.5%（n＝6），表明方法的重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取9份已測(cè)知含量的樣品（批號(hào)為AAG0388），精密量取1 mL，分別置100 mL容量瓶中，平均分成3組，分別精密加入對(duì)照品貯備液3，4，5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 苯甲酸鈉加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

檢測(cè)限和定量限確定：精密量取苯甲酸鈉對(duì)照品溶液適量，加水逐步稀釋進(jìn)樣，根據(jù)信噪比 S／N＝3和S／N＝10分別確定檢測(cè)限和定量限。結(jié)果苯甲酸鈉的檢測(cè)限和定量限分別為1.3 ng和4.0 ng。

2.4 樣品含量測(cè)定

取對(duì)乙酰氨基酚口服溶液和滴劑，依法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下，精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 苯甲酸鈉含量測(cè)定結(jié)果（n＝5）

3 討論

3.1 流動(dòng)相選擇

考察了不同的流動(dòng)相體系對(duì)柱效和不同成分及雜質(zhì)分離度的影響，結(jié)果表明，乙酸銨優(yōu)于純水相、乙腈－乙酸銨系統(tǒng)優(yōu)于甲醇－乙酸銨系統(tǒng)；同時(shí)考察了流動(dòng)相中不同濃度的乙酸銨對(duì)柱效的影響，結(jié)果在乙腈－0.05 mol／L乙酸銨（15∶85）條件下，各色譜峰之間的分離度較好，且基線平穩(wěn)，峰形良好。

3.2 提取溶劑選擇

考察了水和流動(dòng)相作為提取溶劑，結(jié)果2種溶劑均能達(dá)到充分提取的效果。考慮到操作簡(jiǎn)便，因此選擇水作為提取溶劑。

3.3 應(yīng)用價(jià)值

在同一生產(chǎn)企業(yè)內(nèi)，防腐劑苯甲酸鈉添加的量基本一致，但不同企業(yè)間添加的量有較大差異性。苯甲酸鈉廣泛應(yīng)用于口服液體制劑中，但對(duì)人體有一定毒性[3]，本試驗(yàn)建立的苯甲酸鈉含量檢測(cè)方法可對(duì)口服液體制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供參考。

[1]劉文英.藥物分析[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：153.

[2]崔福德.藥劑學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：19.

[3]蘭金蘋，寧麗峰，張益文，等.高效液相色譜法測(cè)定口服液類藥品中苯甲酸的含量[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19(1)：4－6.

[4]黎艷剛，段 峰，郭麗蓉，等.HPLC測(cè)定布洛芬口服溶液中苯甲酸鈉、安賽蜜含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(8)：69－71.

[5]楊武軍，劉雪峰.布洛芬混懸液中苯甲酸測(cè)定方法的建立[J].中國(guó)藥師，2016，19(2)：382－384.

[6]李小安，吳少平，劉海靜，等.鹽酸氨溴索口服溶液中苯甲酸鈉的含量測(cè)定方法學(xué)研究[J].安徽醫(yī)藥，2011，15(1)：40－42.

Content Determination of Sodium Benzoate in Acetaminophen Oral Solution by HPLC

Li Ling,Chen Naijiang,Jiang Yan
(Lianyungang Institute for Drug Control,Lianyungang,Jiangsu,China 222006)

Objective To determine the content of sodium benzoate in acetaminophen oral solution by HPLC.Methods The Phenomenex Gemini C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used,and the mobile phase was acetonitrile－0.05 mol／L ammonium acetate(15∶85).The flow rate was 1.0 mL／min and the detection wavelength was set at 230 nm.The column temperature was 30℃ and the injection volume was 20 μL.Results The linear range of sodium benzoate was 10.04－100.4 μg／mL(r＝0.999 9),the average recovery was 99.83% and RSD was 0.99%(n＝9),the limit of detection was 1.3 ng.Conclusion The method is applicable to the quality control of sodium benzoate in acetaminophen oral solution,which can provide reference for the standard improvement.

HPLC;acetaminophen oral solution;sodium benzoate;content determination;preservatives assay

R927.2；R971＋.1

A

1006－4931(2016)21－0063－03

2016－06－11)