川芎水提物體外抗氧化活性的研究

張晶晶，楊占峰

（鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院 醫(yī)學(xué)系，河南 鄭州 451150）

川芎水提物體外抗氧化活性的研究

張晶晶，楊占峰

（鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院 醫(yī)學(xué)系，河南 鄭州 451150）

通過測(cè)定川芎水提物對(duì)·OH、和DPPH三種自由基的清除作用，評(píng)價(jià)其抗氧化性能。采用索氏提取器提取川芎水提物，以抗壞血酸為對(duì)照，采用分光光度法測(cè)定其清除率。川芎水提物對(duì)三種自由基有不同程度的清除能力，對(duì)三種自由基的清除效果依此為DPPH＞＞·OH。川芎水提物在體外具有較明顯的抗氧化活性，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，其抗氧化效果與濃度呈顯著的線性相關(guān)。

川芎；川芎水提物；抗氧化；自由基

自由基是機(jī)體內(nèi)氧化反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)物，可損害機(jī)體的組織和細(xì)胞，進(jìn)而引起慢性疾病及衰老效應(yīng)。一般來說，機(jī)體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)可維持自身的自由基平衡，可一旦受到一些不可抗的外界因素如機(jī)體病變﹑輻射等影響，就會(huì)打破這種平衡，造成機(jī)體的損傷與疾病的發(fā)生。因此清除體內(nèi)自由基，改善細(xì)胞周圍環(huán)境，防止內(nèi)皮細(xì)胞損傷，能夠有效地預(yù)防和治療血管性疾病。合成抗氧化劑BHA﹑BHT等的不安全性，使其應(yīng)用受到很大的限制，故從動(dòng)植物資源中尋找高效無毒的天然抗氧化物質(zhì)為食品及醫(yī)藥行業(yè)的研究重點(diǎn)[1]。

川芎為傘形科藁本屬植物，川芎的干燥根莖在我國有悠久的藥用歷史，也是著名的川產(chǎn)地道藥材，主要含揮發(fā)油﹑生物堿﹑酚類及有機(jī)酸﹑苯酞內(nèi)酯等成分[2]，具有活血行氣﹑祛風(fēng)止痛等功效。目前對(duì)川芎的研究多集中在鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、對(duì)心血管系統(tǒng)的作用以及抗腫瘤、抗菌、抗放射等方面[3]，而對(duì)川芎清除自由基﹑抗氧化的研究比較少。

本文以體外抗氧化體系為模型，研究川芎水提物的抗氧化活性，與抗壞血酸對(duì)比，研究其有效成分對(duì)羥基自由基、超氧陰離子、DPPH的清除能力。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

川芎（河南龍都藥業(yè)有限公司）；鄰苯三酚﹑三羥甲基胺基甲烷（Tris）（上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水楊酸（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；硫酸亞鐵﹑H2O2（天津市德思化學(xué)試劑有限公司）；DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）（美國Sigma公司）；抗壞血酸（天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心）。

TU-1201紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；索氏提取器（上海比朗儀器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 川芎有效成分的提取

精確稱取5 g川芎，用研缽將川芎搗成粉末，裝入濾紙筒中，量取蒸餾水150 mL，從提取筒中倒入燒瓶，安裝好索氏提取裝置，加熱回流4 h，得提取液150 mL。再次用100 mL蒸餾水進(jìn)行二次索氏提取，兩次提取液合并濃縮后真空冷凍干燥得提取物1.275 8 g。

1.2.2 DPPH自由基能力清除率的測(cè)定

精確稱取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼0.007 8 g，用甲醇溶液定容至100 mL，配制成0.2 mmol·L-1DPPH溶液，取2.0 mL此溶液與2.0 mL不同濃度的川芎水提物在暗室中反應(yīng)30 min，以抗壞血酸作對(duì)照組，517 nm下測(cè)其吸光度值。每個(gè)濃度重復(fù)3次，計(jì)算各組吸光度的平均值[4-5]。清除率計(jì)算公式：

清除率= 1-[(Ai- Aj)/A0]×100%

式中：A0為加入甲醇和DPPH各2.0 mL的吸光度值；Ai為加入2.0 mL DPPH和2.0 mL不同濃度川芎水提物測(cè)得的吸光度值；Aj為加入2.0 mL甲醇和2.0 mL不同濃度川芎水提物測(cè)得的吸光度值。

1.2.3 羥基自由基活性清除率的測(cè)定

依據(jù)氧化還原反應(yīng)原理，混合H2O2與Fe2+產(chǎn)生·OH，在反應(yīng)池中加入適量的水楊酸附著·OH致使生成有色物質(zhì)，紫外分光光度計(jì)510 nm下有最大吸收。反應(yīng)池中含1 mL的水楊酸-乙醇溶液（9 mmol·L-1），1 mL的FeSO4（9 mmol·L-1），1 mL的H2O2（8.8 mmol·L-1）和1 mL的川芎水提物（1，2，3，4，5，8，10，20，30，40 mg·mL-1），并以蒸餾水為參照。操作過程中，最后加入H2O2，溫度保持37℃持續(xù)30 min，對(duì)照組選用抗壞血酸。各濃度組重復(fù)做3次，計(jì)算各組吸光度的平均值[6-7]。清除率計(jì)算公式：

式中：A0為不加入川芎水提物，加入H2O2、水楊酸、FeSO4的吸光度值；AX為加入水楊酸、FeSO4、川芎水提物、H2O2的吸光度值；AX0為不加入H2O2，加入FeSO4、水楊酸、川芎水提物的吸光度值。

1.2.4 超氧陰離子（·O2－）清除率的測(cè)定

采用鄰苯三酚自氧化法。取4.5 mL的Tris-HCL緩沖液（0.05 mol·L-1pH 8.2）于試管中，放入25℃水浴中保溫10 min，加入不同濃度的川芎水提物1.0 mL，混勻后加入0.4 mL 6 m mol·L-1的鄰苯三酚，反應(yīng)4 min，加入8 mol·L-1的HCL溶液1.0 mL終止反應(yīng)。以抗壞血酸作為對(duì)照組，320 nm下測(cè)其吸光度值。每個(gè)濃度重復(fù)3次，取其吸光度的平均值[8]。清除率計(jì)算公式：

式中：A0為水代替川芎水提物時(shí)測(cè)得的吸光度值；Ai為川芎水提物不同濃度下測(cè)得的吸光度值；Aj為水代替鄰苯三酚時(shí)川芎水提物不同濃度下測(cè)得的吸光度值。

2 結(jié)果與討論

2.1 川芎水提物對(duì)·OH的清除作用

圖1為川芎水提物和抗壞血酸對(duì)羥基自由基的清除作用。

圖1 川芎水提物對(duì)·OH的清除效果

由圖1可見，隨著川芎水提物濃度的增大，清除效果得到進(jìn)一步的提高，在40 mg·mL-1濃度下對(duì)羥基自由基的清除率達(dá)到84.85%，在低濃度1 mg·mL-1時(shí)仍有9.25%的清除作用。與抗壞血酸相比，在濃度相同時(shí)，川芎水提物的清除率遠(yuǎn)低于抗壞血酸。

2.2 川芎水提物對(duì)·O2－的清除作用

圖2為川芎水提物和抗壞血酸對(duì)超氧陰離子的清除作用。

圖2 川芎水提物對(duì)·O2－的清除效果

由圖2可見，在濃度為1.0 mg·mL-1時(shí)，川芎水提物對(duì)清除率只有3.56%；隨著濃度的增大，其清除率逐漸增大，在20 mg·mL-1下，清除率可達(dá)到93.45%，在30 mg·mL-1下，清除率可達(dá)到99.59%。與抗壞血酸相比，川芎水提物對(duì)的清除能力低于抗壞血酸?？箟难嵩? mg·mL-1下時(shí)已達(dá)到99.85%。

2.3 川芎水提物對(duì)DPPH自由基的清除作用

圖3為川芎水提物和抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除作用。

圖3 川芎水提物對(duì)DPPH的清除效果

由圖3可見，隨著濃度的增加川芎水提物對(duì)DPPH自由基的清除效果逐漸加強(qiáng)，在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量—效應(yīng)關(guān)系，在0.1 mg·mL-1時(shí)清除率為9.31%，在1 mg·mL-1時(shí)清除率為88.07%。比較可以發(fā)現(xiàn)，清除DPPH自由基所需的水提物濃度遠(yuǎn)低于清除其它兩種自由基之所需。

3 結(jié)論

經(jīng)索氏提取器提取得到川芎水提物，其對(duì)DPPH·﹑羥基自由基（·OH）和超氧陰離子（）3種自由基的清除能力有較大的差異，以清除能力來比較對(duì)3種自由基的清除作用DPPH·＞＞·OH，對(duì)DPPH自由基的清除效果明顯優(yōu)于其它兩種自由基。

[1] 王倩,汪海.具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的天然藥物及其單體化合物[J].世界學(xué)技術(shù)-中藥現(xiàn)代化,2002,4(5):52-58.

[2] 李秋怡.川芎的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2006,17(7):1298-1299.

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（責(zé)任編輯、校對(duì)：琚行松）

Antioxidant Activity Study of Water Extraction of Chuanxiong Capsule in Vitro

ZHANG Jing-jing, YANG Zhan-feng
(Medical School, Zhengzhou University of Industrial Technology, Zhengzhou 451150, China)

The antioxidant activities of the water extraction of chuanxiong capsule were determined by examining the scavenging effect of the water extraction on hydroxyl(·OH), superoxide anion (), and 1, 1-Dipheny-2-picrylhydrazyl(DPPH) radicals. The water extraction of chuangxiong capsule was obtained by soxhletextractor with ascorbic acid as reference compound. Spectrophotometry was used to assess the antioxidant properties. There were different scavenging abilities in the water extraction of chuanxiong capsule on hydroxyl, superoxide anion, and DPPH radicals. The scavenging effects on the three free radicals were DPPH＞＞ ·OH. There was marked antioxidant activity in the water extraction of chuanxiong in vitro. In the experimental concentration range, the scavenging effects of the water extraction of chuanxiong showed positive correlation with the concentration of the water extraction of chuanxiong.

chuanxiongcapsule; water extract of chuanxiong; antioxidant; radical

Q5-33

A

1009-9115(2016)02-0038-03

10.3969/j.issn.1009-9115.2016.02.011

2015-12-04

張晶晶（1987-），女，河南安陽人，碩士研究生，研究方向?yàn)樯锘瘜W(xué)。