超高效液相色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

鄔偉魁　嚴(yán)倩茹（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071）

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超高效液相色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

鄔偉魁嚴(yán)倩茹
（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071）

【摘要】近年來(lái)，超高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本文對(duì)中藥指紋圖譜簡(jiǎn)況、色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用、超高效液相色譜指紋圖譜在中藥（藥材、飲片、中成藥、醫(yī)院制劑）質(zhì)量評(píng)價(jià)、炮制工藝研究及聯(lián)用技術(shù)中的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述，以期為符合中藥特點(diǎn)的超高效液相色譜指紋圖譜質(zhì)量評(píng)價(jià)體系研究提供參考。

【關(guān)鍵詞】超高效液相色譜；指紋圖譜；中藥

近年來(lái)，隨著超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography，UPLC）的興起，及其與指紋圖譜技術(shù)的迅速融合，UPLC指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。有研究對(duì)比了土茯苓［1］藥材的UPLC和高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)UPLC在10 min內(nèi)完成的譜峰，HPLC需要75 min才能完成，說(shuō)明UPLC的分析效率更高，可顯著縮短分析時(shí)間，減少流動(dòng)相的消耗；UPLC可檢測(cè)更微量的樣品，進(jìn)樣量為1∶20時(shí)，色譜峰高基本一致，說(shuō)明UPLC的色譜分離效果更好、靈敏度更高；UPLC的洗脫條件比HPLC的變化更簡(jiǎn)單，色譜峰的漂移時(shí)間較短，在指紋圖譜軟件中色譜峰易于匹配。相關(guān)質(zhì)控技術(shù)已成功應(yīng)用于復(fù)方丹參滴丸，并被2010年版《中國(guó)藥典》收載。本文就UPLC指紋圖譜在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述。

1　UPLC指紋圖譜在中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

范旭航等［2］建立了 8 min快速鑒別牡丹皮的UPLC特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了20個(gè)共有峰，并指認(rèn)了10個(gè)主要色譜峰，15批牡丹皮藥材的相似度為0.973～ 0.998，為有效控制和科學(xué)評(píng)價(jià)牡丹皮藥材的質(zhì)量提供依據(jù)。張琦等［3］建立了白芍藥材的UPLC特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了15個(gè)共有峰，指認(rèn)了其中5個(gè)共有峰，15批白芍藥材的相似度為0.891～ 0.996，實(shí)現(xiàn)了9 min快速評(píng)價(jià)白芍藥材的質(zhì)量，完善了白芍的質(zhì)量控制方法。與此類(lèi)似，還建立了茯苓的UPLC特征指紋圖譜［4］，分析時(shí)間 ＜ 10 min，極大地縮短了時(shí)間。沈旭等［5］對(duì)不同產(chǎn)地的15批桃仁藥材進(jìn)行研究，建立了桃仁藥材15 min內(nèi)的UPLC特征指紋圖譜共有模式，共標(biāo)定了12個(gè)共有峰，指認(rèn)了其中6個(gè)共有峰，15批桃仁藥材的相似度為0.884～0.996。

2　UPLC指紋圖譜在中藥飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

李會(huì)芳等［6］建立了大黃不同飲片的UPLC指紋圖譜并用于比較市售大黃不同飲片化學(xué)品質(zhì)的差異及穩(wěn)定性。發(fā)現(xiàn)生大黃樣品的平均相似度較高（0.817），酒大黃樣品間指紋圖譜平均相似度較低（0.640），而熟大黃和大黃炭樣品各自的指紋圖譜平均相似度高于0.9。生大黃、酒大黃的指紋圖譜基本一致，熟大黃、大黃炭與生品相比有較大差異。市售生大黃、熟大黃、大黃炭飲片的化學(xué)品質(zhì)較為穩(wěn)定，而酒大黃飲片的差異較大，亟待進(jìn)一步規(guī)范研究。

3　UPLC指紋圖譜在中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

3.1注射劑

劉卉等［7］測(cè)定了9個(gè)不同廠(chǎng)家的18批香丹注射液UPLC指紋圖譜，結(jié)果顯示，采用色譜指紋圖譜輪廓能夠在一定程度上反映出注射液的質(zhì)量變化信息，與采用峰面積的分析方法差異不大，結(jié)果相似。該法可用于測(cè)定并比較不同來(lái)源的香丹注射液色譜指紋圖譜相似度，并為快速中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)和生產(chǎn)工藝監(jiān)控提供可靠依據(jù)。

3.2顆粒劑

楊運(yùn)云等［8］對(duì)王老吉廣東涼茶顆粒樣品進(jìn)行了相似度分析，23個(gè)批次樣品的相似度均達(dá)到0.95以上；以28個(gè)共有峰的相對(duì)峰面積進(jìn)行主成分分析，23批次樣品均落在同一區(qū)域。相似度評(píng)價(jià)和主成分分析結(jié)果均表明，王老吉廣東涼茶顆粒的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性好。該方法快速、高效、穩(wěn)定，可用于王老吉廣東涼茶顆粒的質(zhì)量控制。姜新剛等［9］建立了津力達(dá)顆粒的 UPLC指紋圖譜，共標(biāo)定了50個(gè)共有峰，指認(rèn)了其中9個(gè)共有峰，10批津力達(dá)顆粒指紋圖譜的相似度均在 0.991～1.000。該方法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性，可有效控制津力達(dá)顆粒質(zhì)量。

3.3合劑

吳紅梅等［10］對(duì)不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的 15批康復(fù)新液進(jìn)行研究，以11批湖南科倫藥業(yè)與3批四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)生產(chǎn)的康復(fù)新液標(biāo)定了10個(gè)共有峰，相似度0.990；與對(duì)照指紋圖譜比較，內(nèi)蒙古京新藥業(yè)生產(chǎn)的康復(fù)新液相似度0.900，標(biāo)定8個(gè)共有峰，指認(rèn)了指紋圖譜中5個(gè)共有峰。所建立的方法快速有效，可用于評(píng)價(jià)康復(fù)新液的質(zhì)量。

3.4膠囊劑

姜新剛等［11］建立了芪藶強(qiáng)心膠囊的UPLC指紋圖譜，共標(biāo)定了36個(gè)共有峰，指認(rèn)了其中8個(gè)共有峰，10批芪藶強(qiáng)心膠囊指紋圖譜的相似度均在0.979～ 1.000。該法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性，為提高芪藶強(qiáng)心膠囊質(zhì)量控制提供了新方法。

4　UPLC指紋圖譜在醫(yī)院制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

暑熱寧合劑［12］是天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，臨床應(yīng)用多年，藥效穩(wěn)定，效果佳。目前已建立方法簡(jiǎn)便、操作性強(qiáng)的UPLC指紋圖譜，對(duì)制劑中的多種成分和極性相近的成分均有良好的分離效果，不同批次間的相似度符合相關(guān)規(guī)定。

5　UPLC指紋圖譜在工藝研究中的應(yīng)用

目前很多中藥有效成分未完全研究清楚，故炮制和提取工藝研究時(shí)采用某單一成分的含量為指標(biāo)欠妥。而講究整體性的指紋圖譜恰恰滿(mǎn)足了中藥多成分、多途徑、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)和中藥炮制工藝、提取工藝研究的需求。單鳴秋等［13］采用恒溫干燥箱為加熱設(shè)備，從200℃至250℃間隔10℃共6個(gè)溫度，每個(gè)溫度下分別烘制20 min，30 min，40 min，共得到18份樣品；采用UPLC，以側(cè)柏炭標(biāo)準(zhǔn)飲片為參照，分析各樣品指紋圖譜相似度，并結(jié)合外觀(guān)性狀，確定側(cè)柏炭烘制溫度以230℃，20 min為宜。建立了側(cè)柏炭烘制工藝方法，為中藥炭藥的炮制工藝研究提供新的思路。楊榮平等［14］從炮制方法、加鹽量、加水量、浸潤(rùn)時(shí)間、炮制溫度、炮制時(shí)間6個(gè)因素進(jìn)行考察，采用UPLC指紋圖譜優(yōu)化補(bǔ)骨脂炮制工藝。結(jié)果表明，補(bǔ)骨脂的最佳炮制工藝是：每100 g藥材，加入15 mL含鹽量為2.5 g的鹽溶液，浸潤(rùn)5 h后，置鍋內(nèi)。260℃加熱，炒2～ 3 min。故采用UPLC指紋圖譜法優(yōu)化補(bǔ)骨脂炮制工藝合理可行。另有研究［15］采用UPLC指紋圖譜結(jié)合正交試驗(yàn)優(yōu)選“二神丸”藥對(duì)最佳醇提工藝。

6　UPLC-質(zhì)譜（MS）指紋圖譜在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

UPLC具有超高壓、超高靈敏度、超高分離度等特點(diǎn)，在中藥復(fù)雜成分的分析上有明顯優(yōu)勢(shì)。UPLC與 MS聯(lián)用可以同時(shí)得到化合物的紫外光譜、保留時(shí)間、分子質(zhì)量等信息，可獲得更全面的分析數(shù)據(jù)，快速地闡明中藥的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)提供大量的有效信息，是目前分析中藥復(fù)雜系統(tǒng)的有力工具。

閆廣利等［16］應(yīng)用UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，采集10個(gè)產(chǎn)地黃芩藥材的色譜圖，根據(jù)保留時(shí)間和分子離子m/z確定共有峰，創(chuàng)建提取離子色譜圖用以計(jì)算峰面積，利用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦法計(jì)算相對(duì)峰面積的相似度。確定了黃芩藥材的23個(gè)共有峰，建立了這 23個(gè)共有峰為特征指紋信息的黃芩藥材UPLC-MS指紋圖譜，10個(gè)產(chǎn)地樣品的指紋圖譜整體相似度0.9，各產(chǎn)地黃芩藥材之間相似度良好。提示該方法準(zhǔn)確可靠，可用于黃芩藥材的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)。張寧等［17］采用UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)自制10批地黃飲子樣品進(jìn)行分析，共標(biāo)定了30個(gè)共有色譜峰，通過(guò)與對(duì)照品的保留時(shí)間及一級(jí)質(zhì)譜信息的比對(duì)，確定2號(hào)、5號(hào)、14號(hào)、15號(hào)、17號(hào)、26號(hào)和27號(hào)峰分別為馬錢(qián)苷、松果菊苷、烏頭堿、新烏頭堿、五味子醇甲、五味子乙素和茯苓酸。地黃飲子的指紋圖譜特征性及專(zhuān)屬性強(qiáng)，可結(jié)合含量測(cè)定用于全面控制地黃飲子的質(zhì)量。朱粉霞等［18］建立了朝鮮淫羊藿和柔毛淫羊藿藥材的UPLC指紋圖譜分析方法，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)品種的指紋圖譜差別較大，朝鮮淫羊藿標(biāo)出 35個(gè)共有峰，質(zhì)譜鑒定了26個(gè)峰，柔毛淫羊藿標(biāo)出 13個(gè)共有峰，質(zhì)譜鑒定了9個(gè)峰；同時(shí)研究了朝鮮淫羊藿和柔毛淫羊藿炮制前后 UPLC指紋圖譜的變化規(guī)律，指紋圖譜發(fā)生了五處變化。該法快速、簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，從整體上顯示淫羊藿藥材和炮制品的特征，為淫羊藿的生品和炮制品的質(zhì)量控制提供了有效手段。

7　結(jié)語(yǔ)

隨著儀器的普及和檢測(cè)器的多樣化，HPLC在中藥分析論文和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用迅速增加。色譜指紋圖譜已成為國(guó)際公認(rèn)的控制天然藥物質(zhì)量的有效手段，HPLC指紋圖譜在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方面應(yīng)用日漸廣泛。Waters公司于 2004年推出UPLC技術(shù)后，UPLC受到廣泛的認(rèn)可，并在不同國(guó)家、不同行業(yè)發(fā)揮著重要的作用。UPLC可用于中藥成分定性鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜構(gòu)建、非法添加成分或限量成分檢測(cè)。UPLC還是質(zhì)譜分析很好的入口，與質(zhì)譜聯(lián)用還可用于中藥血清化學(xué)、代謝產(chǎn)物和藥動(dòng)學(xué)等復(fù)雜的生物分析。與HPLC相比，UPLC具有較高的柱效、超高速度、超高分離度、超高靈敏度等優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)，相關(guān)聯(lián)用技術(shù)備受重視，UPLC-MS，UPLC-MS-MS等指紋圖譜技術(shù)具有高效、快速、靈敏、節(jié)省溶劑等優(yōu)勢(shì)，在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中應(yīng)用的前景廣闊。

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doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.009

收稿日期：（2015-08-12）

作者簡(jiǎn)介：鄔偉魁，男，碩士，主管中藥師。主要從事藥品質(zhì)量研究工作。通訊作者E-mail：weikuiwu@qq.com

Application of Ultra Performance Liquid Chromatography Fingerprint in Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicine

Wu Weikui，Yan Qianru
（Meizhou Institute for Food and Drug Control，Guangdong Meizhou 514071，China）

ABSTRACTIn recent years，ultra performance liquid chromatography shows its unique advantages in the quality evaluation of traditional Chinese medicine（TCM）.In this paper，the fingerprint brief of TCM，the applications of chromatographic fingerprint in quality control evaluation of TCM as well as the application of ultra high performance liquid chromatographic fingerprint in quality evaluation of TCM（materials，prepared slices，Chinese patent drug and hospital preparations），research on processing technology and combined technology are reviewed in order to provide a reference for the study on quality evaluation system by ultra performance liquid chromatography suitable for TCM.

KEY WORDSUltra Performance Liquid Chromatography；Fingerprint；Traditional Chinese Medicine