川射干黃酮膠囊的化學(xué)成分研究Δ

陳　帥，袁崇均，羅　森，吳　燕，王　笳

(四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中藥藥學(xué)研究所，四川 成都　610041)

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川射干黃酮膠囊的化學(xué)成分研究Δ

陳帥*，袁崇均，羅森，吳燕，王笳

(四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中藥藥學(xué)研究所，四川 成都610041)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.04.027

摘要目的：研究川射干黃酮膠囊的化學(xué)成分。方法：采用硅膠柱層析，Sephadex LH-20等色譜手段進(jìn)行化學(xué)成分分離，根據(jù)其理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從川射干黃酮膠囊中分離、鑒定了出11個單體化合物，分別為射干苷、射干苷元、野鳶尾苷、二甲基射干苷元、染料木素、軟脂酸、十四酸、4′-羥基-3-甲氧基苯乙酮、胡蘿卜苷、β-谷甾醇、白藜蘆醇。結(jié)論：所有分離出的化合物為川射干黃酮膠囊的藥理作用闡明了物質(zhì)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞川射干黃酮膠囊； 射干苷； 化學(xué)成分

川射干黃酮膠囊(藥品注冊批件2014S00491)是從中藥川射干[1]中提取的原料藥加1%的微粉硅膠灌制成的硬膠囊劑，是由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院自主研發(fā)的中藥五類新藥，具有清熱解毒、消腫利咽的功效，主要用于急性咽炎風(fēng)熱證及輕度急性單純性喉炎風(fēng)熱證導(dǎo)致的咽喉腫痛的治療[2-5]。為了進(jìn)一步了對川射干黃酮膠囊中化學(xué)部分進(jìn)行研究，筆者采用70%乙醇提取物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱等反復(fù)分離純化，從中分離、鑒定出了11個單體化合物，分別為射干苷、射干苷元、野鳶尾苷、二甲基射干苷元、染料木素，軟脂酸、十四酸、4′-羥基-3-甲氧基苯乙酮、B-谷甾醇、胡蘿卜苷、白藜蘆醇，現(xiàn)報告如下。

1材料

SGWRX-4B顯微熔點(diǎn)儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；Bruker AVⅡ400MHZ核磁共振波普儀 (美國，Bruker)；TSQ Quantum Ultra質(zhì)譜儀(美國，Thermo)；柱色譜Sephadex LH-20 (美國，Pharmacia)；柱色譜硅膠(200～300 目)薄層色譜用硅膠(青島海洋化工廠)；RE-5205，RE-52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器廠)；循環(huán)真空泵SHB-ⅢS(鄭州長城科工貿(mào))，所用試劑均為化學(xué)純或分析純。試驗(yàn)用川射干黃酮膠囊，批號20140801。

2方法與結(jié)果

2.1提取與分離

取川射干黃酮膠囊內(nèi)容物1.5 kg，以10倍70%乙醇回流，提取3次，每次2 h，抽濾，合并濾液，減壓濃縮無乙醇味后約5 L。依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取(1∶1)3次，減壓回收溶劑，得到石油醚部位(180 g)、乙酸乙酯部位(763 g)和正丁醇部位(602 g)。

石油醚部位經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(100 ∶0→10 ∶1)溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得到5個部分Fr.1～5。Fr.3再經(jīng)硅膠柱色譜反復(fù)分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(50 ∶1→10 ∶1)，得到化合物7(32 mg)、9(28 mg)。Fr.5再經(jīng)硅膠柱色譜反復(fù)分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(5 ∶1→0 ∶1)，得到化合物10(35 mg)。

乙酸乙酯部位進(jìn)行硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(50 ∶1→0 ∶1)，得到5個部分Fr.1～5。Fr.1經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(50 ∶1→5 ∶1)，再經(jīng) Sephadex LH-20 純化后重結(jié)晶得到化合物 8(35 mg)，F(xiàn)r.3經(jīng)硅膠柱色譜,氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(20 ∶1→1 ∶1)，再經(jīng) Sephadex LH-20 純化后重結(jié)晶得到化合物 2(43 mg)，4(40 mg)。Fr.4經(jīng)氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(20 ∶1→0 ∶1)，反復(fù)SephadexLH-20 柱色譜純化，得化合物5(37 mg)，6(28 mg)。Fr.5經(jīng)氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(10 ∶1→0 ∶1)，反復(fù)SephadexLH-20 柱色譜純化，得化合物1 (200 mg)，3(52 mg)。

正丁醇萃取物分別用水，30%、50%、80%乙醇洗脫，得30%乙醇洗脫組分(230 g)、60%乙醇洗脫組分(56 g)和80%乙醇洗脫組分(65 g)。80%乙醇洗脫組分經(jīng)硅膠柱色譜反復(fù)分離，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫(10 ∶0→1 ∶10)，得到化合物11(31 mg)。

2.2結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色結(jié)晶(MeOH)，熔點(diǎn)(mp)252～254 ℃，HCl-Mg反應(yīng)呈玫瑰紅色，AlCl3反應(yīng)呈鮮黃色。ESI-MS m/z 461[M-H]-。1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：12.92(1H，s，5-OH)，9.58(1H，s，4′-OH)，8.44(1H，s，H-2)，7.39(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′)，6.82(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，6.85(1H，s，H-8)，5.07(1H，d，J=8.0 Hz，Glc-H-1)，3.80(3H，s，6-OCH3)。上述理化性質(zhì)與光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道一致，鑒定此化合物為射干苷(tectoridin)。

化合物2淺黃色針晶(MeOH)，mp 214～216 ℃。HCl-Mg反應(yīng)顯櫻紅色。ESI-MS m/z 299[M-H]-。1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：13.09(1H，s，5-OH)，10.77(1H，s，3-OH)，9.58(1H，s，4′-OH)，8.34(1H，s，H-2)，7.37(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′)，6.82(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，6.50(1H，s，H-8)，3.74(3H，s，6-OCH3)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道一致，鑒定此化合物為射干苷元(tectorigenin)。

化合物3白色粉末，mp 211～213 ℃。FeCl3及Molish反應(yīng)呈陽性。ESI-MS m/z 521[M-H]-，1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ: 12.91(1H，s，5-OH)，9.27 (1H，s，3′-OH)，8.49(1H，s，H-2)，6.90(1H，s，H-8)，6.73(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，6.68(1H，d，J=2.0 Hz，H-6′)，5.09(1H，d，J=7.0 Hz，Glc-H-1)，3.79(3H，s，5′-OCH3)，3.77(3H，s，4′-OCH3)，3.70(3H，s，6-OCH3)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道一致，鑒定此化合物為野鳶尾苷(iridin)。

化合物4白色針晶(MeOH)，mp 189～191 ℃。ESI-MS m/z 521[M-H]-。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：12.81(1H，s，5-OH)，7.89(1H，s，H-2)，7.45(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′)，6.98(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，6.46(1H，s，H-8)，3.95(3H，s，6-OCH3)，3.92(3H，s，7-OCH3)，3.84(3H，s，4′-OCH3)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道一致，故鑒定此化合物為：5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮(5-hydroxy-6,7,4′-trimethoxyisoflavone)，即二甲基射干苷元(dimethytectorigenin)。

化合物5淡黃色針晶(MeOH)，mp 265～267 ℃。ESI-MS m/z 269[M-H]-。1H-NMR (DMSO，400 MHz)δ：12.92(1H，s，5-OH)，10.94(1H，s，7-OH)，9.60(1H，s，4′-OH)，8.30(1H，s，H-2)，7.35(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′)，6.85(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，6.36(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.23(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報道一致,故鑒定此化合物為: 5, 7, 4′-三羥基異黃酮(5,7,4′- trihydroxyisoflavone)，即染料木素(geristein)。

化合物6白色片晶(MeOH)，mp 49～50 ℃。HR-ESI-MS m/z 255 [M-H]-；1H-NMR (CDCl3，400 MHz)δ:2.35(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，1.63 (2H，m，H-15)，1.31(24H，m，H-3～14)，0.88(3H，t，J=6.4 Hz,H-16)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對照基本一致，故鑒定該化合物為軟脂酸(palmitic acid)。

化合物7白色粉末，mp 54～55 ℃。ESI-MS m/z 227[M-H]-；1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ: 0.88(3H，t，J=7.0 Hz，14-CH3)，1.63(2H，m，β-CH2)，2.35(2H，t，J=7.5 Hz，α-CH2)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對照基本一致，故鑒定該化合物為十四酸(tetradecanoic acid)。

化合物8無色針晶(MeOH)，mp 113～115 ℃。ESI-MS m/z 165 [M-H]-。1H-NMR(DMSO，400 MHz) δ: 9.98(1H，s，4-OH)，7.51(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-6)，7.44(1H，d，J=2.4 Hz，H-2)，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，3.83(3H，s，3-OCH3)，2.50(3H，s，COCH3)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對照基本一致，故鑒定該化合物為4′-羥基-3-甲氧基苯乙酮(apocynin)。

化合物9白色粉末(MeOH)，mp 288～290 ℃。Liebermann-Burchard反應(yīng)、Molish反應(yīng)呈陽性。TLC 與胡蘿卜苷對照品Rf值及顏色一致,與胡蘿卜苷對照品混合熔點(diǎn)不下降,故鑒定該化合物為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物10白色針晶(CHCl3)，mp 137～138 ℃。茴香醛-濃硫酸顯色呈陽性，10%的硫酸乙醇溶液顯紫色。ESI-MS m/z 413 [M-H]-。1H-NMR (CDCl3，400 MHz)δ: 0.68(3H，s，H-18)，0.81(3H，m，J=6.6 Hz，H-27)，0.84(3H，m，J=7.5 Hz，H-29)，0.92(3H，m，J=6.8 Hz，H-26)，0.96(3H，m，J=6.4 Hz，H-21)，1.00(3H，s，H-19)，3.52(1H，m，H-3)，5.35(1H，m，H-6)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對照基本一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物11白色針晶(MeOH)，mp 253～255 ℃，易溶于水，甲醇。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性。ESI-MS m/z 227 [M-H]-。1H-NMR(CD3COCD3，400 MHz)δ: 6.57(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，6.29(1H，d，J=1.5Hz，H-4)，6.57(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)，7.46(1H，d，J=8.5 Hz，H-2′)，6.86(1H，d，J=8.5 Hz，H-3′)，6.86(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.46(1H，d，J=8.5 Hz，H-6′)，6.90(1H，d，J=16.5 Hz，H-α′)，7.04(1H，d，J=16.5 Hz，H-β′)。上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對照基本一致，故鑒定該化合物為白藜蘆醇(resveratrol)。

3討論

川射干黃酮膠囊是川射干藥材提取的原料藥加1%的微粉硅膠灌制成的硬膠囊劑，其中主要組成為黃酮成分，尤其以射干苷、射干苷元為主，含量可以達(dá)到30%左右，新藥川射干黃酮膠囊的質(zhì)量控制就是選用射干苷、射干苷元做為對照。本研究首次對川射干黃酮膠囊進(jìn)行分析，全面分離其化學(xué)成分，解析化學(xué)結(jié)構(gòu)，雖然所分離的化合物雖然均為已知化合物，但為下一步闡述其化學(xué)組成打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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Research on Chemical Constituents of Capsule of Chuanshegan HuangtongΔ

CHEN Shuai, YUAN Chongjun, LUO Sen, WU Yang, WANG Jia

(Institute of Traditional Chinese Medicine, Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences, Sichuan Chengdu 610041, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To study the chemical constituents of capsule of Chuanshegan Huangtong. METHODS: Silica gelcolumn chromatography, Sephadex LH-20 and some other chromatographic methods were adopted to isolate the constituents, structure of compounds were identified according to the physicochemical properties and spectral data. RESULTS: 11 mono compounds were isolated from the capsule of Chuanshegan Huangtong, respectively tectoridin, tectorigenin, iridin, dimethyltectorigenin, genistein, palmitic acid, tetradecanoic acid, apocynin, daucosterol, β-sitosterol, resveratrol. CONCLUSIONS: All the compounds isolated from the capsule of Chuanshegan Huangtong illuminate the material basis for the pharmacological effect.

KEYWORDSCapsule of Chuanshegan Huangtong; Tectoridin； Chemical constituents

(收稿日期：2015-11-18)

中圖分類號R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號1672-2124(2016)04-0498-03

Δ基金項(xiàng)目：四川省科技廳科研專項(xiàng)(No.A-2014N-19)

*副研究員。研究方向：中藥化學(xué)。E-mall：cscdtcm@126.com