HPLC法測定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊的含量

王　英高興嶺吳　華.陜西博森生物制藥股份集團有限公司，陜西　西安　708;.四川省精鼎醫(yī)藥研究開發(fā)(上海)有限公司，四川　成都　6004;.陜西新民生醫(yī)藥有限公司，陜西　西安　7006

HPLC法測定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊的含量

王英1高興嶺2吳華3
1.陜西博森生物制藥股份集團有限公司，陜西西安710118;
2.四川省精鼎醫(yī)藥研究開發(fā)(上海)有限公司，四川成都610041;
3.陜西新民生醫(yī)藥有限公司，陜西西安710026

【摘要】目的:建立以高效液相色譜法測定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊含量的測定方法.方法:用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以醋酸銨緩沖液(3. 9g醋酸銨，加水至810ml，加三乙胺3. 0ml，加冰醋酸10ml，加磷酸3. 0ml)－乙腈(85∶15)為流動相，流速為1. 0m/min，檢測波長為280nm，進樣量為10μl.結(jié)果:琥珀酸美托洛爾進樣量在0. 3208～1. 2832μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r = 0. 9992);平均加樣回收率為100. 1%(RSD =1. 2%，n =6).結(jié)論:本方法簡單、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好.

【關(guān)鍵詞】琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊;高效液相色譜法;含量

美托洛爾為全球首個選擇性的β1受體阻滯劑，于1969年在瑞典的Hassle實驗室研發(fā)成功，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于高血壓、缺血性心臟病、慢性穩(wěn)定性心力衰竭、心律失常等多種心血管疾病的治療.琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊是根據(jù)緩釋片改劑型開發(fā)的品種，琥珀酸美托洛爾及其制劑收載于各國藥典[1－2，4]的含量測定方法為高效液相色譜法，但各方法不能完全排除有關(guān)物質(zhì)的干擾.本文對現(xiàn)有的HPLC法進行優(yōu)化，用以測定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊的含量.

1　儀器與試藥

1. 1儀器日本島津LC－20A高效液相色譜儀; ZORBAX Eclipse XDB－C8柱(4. 6mm×150mm，5μm).

1. 2試藥琥珀酸美托洛爾對照品購自英國LGC標(biāo)準(zhǔn)品(批號: 21603);琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊樣品(批號: 20140615、20140618、20140621，自制);乙腈為色譜純;實驗試劑均為分析純;水為注射用水.

2　方法與結(jié)果

2. 1色譜條件色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB－C8柱(4. 6mm×150mm，5μm);流動相:醋酸銨緩沖液(3. 9g醋酸銨，加水至810ml，加三乙胺3. 0 ml，加冰醋酸10ml，加磷酸3. 0ml)－乙腈(85∶15);檢測波長: 280nm;柱溫: 30℃;流速: 1. 0ml/min;進樣量: 10μl.

2. 2檢測波長的選擇取琥珀酸美托洛爾對照品適量，加流動相溶解，以流動相為空白，在400～200nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明琥珀酸美托洛爾在280nm的波長處有最大吸收，故選擇280nm作為本品的檢測波長.

2. 3溶液的制備

2. 3. 1對照品溶液精密量取琥珀酸美托洛爾對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml約含80μg的溶液.

2. 3. 2供試品溶液取供試品10粒，倒出內(nèi)容物(白色緩釋微丸)，研細，精密稱取細粉適量(約相當(dāng)于琥珀酸美托洛爾100mg)，置250ml量瓶中，加流動相適量，超聲處理30min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液.

2. 4方法學(xué)考察

2. 4. 1精密度測定精密量取琥珀酸美托洛爾對照品溶液，進樣6次，測定峰面積值，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0. 09%.

2. 4. 2專屬性考察精密量取琥珀酸美托洛爾對照品溶液、琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊供試品溶液及不含琥珀酸美托洛爾的陰性對照溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，試驗結(jié)果表明:琥珀酸美托洛爾與其他物質(zhì)的分離符合規(guī)定，陰性樣品在此條件下無干擾，高效液相色譜圖見圖1.

圖1　琥珀酸美托洛爾高效液相色譜圖

2. 4. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取琥珀酸美托洛爾對照品8. 02mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀釋至濃度，搖勻.分別精密量取4、6、8、12、16μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖.以峰面積Y為縱坐標(biāo)，以進樣量X為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程: Y = 50520X + 16401(r = 0. 9992).結(jié)果表明，琥珀酸美托洛爾在0. 3208～1. 2832μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

2.4.4重復(fù)性試驗取同一批號(20140615)的樣品6份，分別依法制成供試品溶液，測定琥珀酸美托洛爾的含量，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.64%，表明本法重現(xiàn)性較好.

2. 4. 5穩(wěn)定性試驗取新制備的供試品溶液，精密吸取10μl，分別于0、6、12、16、24h內(nèi)分別進樣，記錄琥珀酸美托洛爾峰面積，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0. 12%，表明在24h內(nèi)溶液穩(wěn)定.

2. 4. 6加樣回收率精密稱取已知含量(235mg/g)的樣品研細內(nèi)容物(批號20140615)適量(約相當(dāng)于琥珀酸美托洛爾10mg)，共6份，分別精密加入琥珀酸美托洛爾原料適量(約相當(dāng)于琥珀酸美托洛爾100mg，原料含量為98. 6%)，按擬定的含量測定方法，測定琥珀酸美托洛爾含量，平均回收率為100. 1 %，RSD為1. 2%，表明本法具有良好的回收率.

2. 4. 7樣品測定連續(xù)3批樣品按上述方法制備樣品溶液，精密量取對照品溶液及樣品溶液各10μl注入高效液相色譜儀，按外標(biāo)法計算，結(jié)果批號20140615、20140618及20140621批琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊中琥珀酸美托洛爾含量分別為標(biāo)示量的99. 8%、99. 7%和99. 5%.

3　討論

在色譜系統(tǒng)流動相及色譜柱的選擇中，先后開展了對不同來源的含量測定法方法進行比較的研究實驗.采用琥珀酸美托洛爾USP含量測定方法[1]，實驗證明，選用該流動體系進行檢測色譜柱耐受性差;采用琥珀酸美托洛爾緩釋片USP含量測定方法[2]，實驗證明，主峰出峰過早，混合雜質(zhì)分離度不符合要求;采用琥珀酸美托洛爾緩釋片進口注冊標(biāo)準(zhǔn)含量測定方法[3]，實驗證明，主峰出峰過早，混合雜質(zhì)分離度不符合要求;采用琥珀酸美托洛爾EP含量測定方法[4]，實驗證明，選用該色譜條件進行檢測，保留時間過長，通過調(diào)整色譜柱類型C18調(diào)整為C8柱，結(jié)果當(dāng)以醋酸銨緩沖液(3. 9g醋酸銨，加水至810ml，加三乙胺3. 0ml，加冰醋酸10ml，加磷酸3. 0ml)－乙腈，(85∶15)為流動相時，保留時間合適，琥珀酸美托洛爾峰形對稱，且與其他雜質(zhì)峰均能達到基線分離，通過對樣品破壞后DAD檢測試驗結(jié)果表明，色譜峰純度亦符合要求.

參考文獻

[1]United States Pharmacopeia(31)[S]．26: 2696．

[2]美國藥典委員會．修訂公告．2012．

[3]國家藥品標(biāo)準(zhǔn)．琥珀酸美托洛爾緩釋片進口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)[S]．2002．

[4]European Pharmacopoeia[S]．6. 0: 2409－2410．

收稿日期:( 2014. 12. 03)

【文章編號】1007－8517(2015)05－0030－02

【文獻標(biāo)志碼】A

【中圖分類號】R927. 2