人附睪蛋白4對慢性腎臟疾病的診斷價值研究

吳　萍，　葉偉民，　李　晨，　夏曉紅，　張振成，　趙文靜，　崔艷芳，　張彩英，　仲人前，　楊再興

人附睪蛋白4對慢性腎臟疾病的診斷價值研究

吳萍，葉偉民，李晨，夏曉紅，張振成，趙文靜，崔艷芳，張彩英，仲人前，楊再興

(第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院實驗診斷科，上海 200003)

摘要：目的檢測人附睪蛋白4(HE4)在慢性腎臟疾病(CKD)中的表達水平，評價HE4對CKD的診斷價值。 方法用電化學發(fā)光法測定81例CKD患者和73名健康對照者(正常對照組)血清HE4、糖類抗原(CA)125、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA199、CA15-3等指標，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析各指標對CKD各分期的診斷價值。 結(jié)果CKD組血清HE4、CA125、CEA、CA15-3、尿素、肌酐和尿酸水平均明顯高于正常對照組(P<0.05)，而血清AFP、CA199水平2組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。ROC曲線分析顯示HE4對CKD的診斷性能最佳，其曲線下面積均大于血清肌酐、尿素和尿酸。CKD不同分期患者之間血清HE4、CEA、尿素、肌酐和尿酸水平差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.005)，且隨病情嚴重程度的增加而增高。ROC曲線分析顯示血清HE4、尿素、肌酐和尿酸水平對4～5期CKD均具有明顯的診斷意義，曲線下面積均>0.9。結(jié)論HE4 對CKD具有極好的輔助診斷價值，且HE4值還與CKD的嚴重程度有關(guān)，對判斷CKD的分期有重要的臨床意義。

關(guān)鍵詞：人附睪蛋白4；糖類抗原125；腎小球濾過率；肌酐；尿素；腫瘤標志物；慢性腎臟疾病

Research on the diagnosis significance of human epididymis protein 4 for chronic kidney diseaseWUPing，YEWeimin，LIChen，XIAXiaohong，ZHANGZhencheng，ZHAOWenjing，CUIYanfang，ZHANGCaiying,ZHONGRenqian，YANGZaixing

.(DepartmentofMedicalDiagnosisLaboratory，ChangzhengHospital，theSecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200003，China)

Abstract:ObjectiveTo determine the level of human epididymis protein 4(HE4)， and to evaluate its diagnosis significance for chronic kidney disease(CKD). MethodsA total of 81 CKD patients and 73 healthy controls were enrolled. The determinations of serum HE4， carbohydrate antigen(CA)125， alpha fetoprotein(AFP)， carcinoembryonic antigen(CEA)， CA199， CA15-3 and so on were performed by electrochemiluminescence. The results were analyzed by receiver operating characteristic(ROC) curve for the diagnosis of CKD with different stages. ResultsThe levels of serum HE4， CA125， CEA， CA15-3， urea， creatinine and uric acid were significantly higher in CKD patients than those in healthy controls(P<0.05)， while there was no statistical significance for AFP and CA199 between the 2 groups (P>0.05). ROC curve analysis indicated that compared with other parameters， HE4 had a better diagnosis significance for CKD. The area under the curve of HE4 was larger than those of urea， creatinine and uric acid. Additionally， there were statistical significances for serum levels of HE4， CEA， urea， creatinine and uric acid among various stages of CKD(P<0.005). Moreover， the serum levels of these parameters increased with severity of CKD. ROC curve analysis showed that serum HE4, urea, creatinine and uric acid had significant diagnosis significance for staging CKD(CKD4-5)， with the area under the curve>0.9. ConclusionsSerum HE4 shows an excellent diagnosis significance for CKD. Furthermore， it is closely associated with the severity of CKD. It is significant for judging the stages of CKD.

Key words:Human epididymis protein 4； Carbohydrate antigen 125； Glomerular filtration rate； Creatinine； Urea； Tumor marker； Chronic kidney disease

人附睪蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)是近年發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤標志物，該標志物對卵巢癌具有重要的輔助診斷價值，其對于卵巢癌診斷的敏感性可以達到90%以上，特異性達到70%以上，均明顯優(yōu)于糖類抗原(carbohydrate antigen，CA)125，特別是與后者聯(lián)合應(yīng)用，還可以大大提高對卵巢癌的診斷準確性[1]。正是由于這種優(yōu)越性，HE4已被越來越廣泛地應(yīng)用于臨床實驗室，輔助卵巢癌的診斷和鑒別診斷。隨著研究的不斷深入，越來越多的證據(jù)表明，HE4除了在卵巢癌中表達增加外，在肺癌、子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤中的表達均有明顯增高[2-5]。其實，HE4除了表達于正常女性生殖道、呼吸道上皮、乳腺腺上皮、唾液腺和結(jié)腸黏膜中以外，在人的腎臟遠曲小管中亦檢測到了HE4的表達[6]，但對于各種腎臟疾病患者血清HE4的表達水平有何變化，國內(nèi)外卻鮮有研究，特別是國內(nèi)尚未見此方面的文獻報道。因此，我們深入探討了各種慢性腎臟疾病(chronic kidney disease，CKD)患者血清中HE4的表達水平和其對CKD及其臨床分期的診斷價值，并與其它各種臨床常用指標進行了比較，旨在為HE4在臨床上得到更廣泛、更恰當?shù)膽?yīng)用提供依據(jù)。

材料和方法

一、研究對象

81例各種CKD(包括高血壓腎病、糖尿病腎病、慢性腎小球腎炎等)患者均為長征醫(yī)院腎內(nèi)科住院患者，男66例，女15例，年齡(55±19)歲，診斷符合最新國際CKD定義[7]，排除各種腫瘤，女性并同時排除婦科疾??；所有病例按腎小球濾過率(glomerular filtration rate，GFR)分期，CKD1～5期各期病例數(shù)分別為28、22、5、8和18例[GFR>90 mL/(min·1.73 m2)為CKD1期，60～89 mL/(min·1.73 m2)為CKD2期，30～59 mL/(min·1.73 m2)為CKD3期，15～29 mL/(min·1.73 m2)為CKD4期，15 mL/(min·1.73 m2)以下為CKD5期，其中CKD4～5期表示嚴重腎功能衰竭、尿毒癥]。73名健康對照者(正常對照組)為體檢人員，男58名，女15名，年齡(52±13)歲，排除肝臟疾病、腎臟疾病、各種腫瘤，女性并同時排除婦科疾病。

二、儀器和試劑

羅氏e601免疫分析儀及原裝配套試劑、BECKMAN-COULTER AU5400生化分析儀及原裝配套試劑。

三、方法

血清HE4、CA125、甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、CA199、CA15-3等腫瘤標志物均用電化學發(fā)光法測定，尿素、肌酐和尿酸分別用脲激酶法、苦味酸法和尿酸酶-過氧化物酶偶聯(lián)法測定，室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果均符合要求。其中HE4檢測最大上限為904 pmol/L，對于超過904 pmol/L的樣本經(jīng)磷酸鹽緩沖液倍比稀釋得出結(jié)果。

四、 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。因各定量指標均為非正態(tài)分布，所以均采用中位數(shù)和總體范圍表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗，診斷價值預(yù)測采用受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

一、CKD組和正常對照組血清各種腫瘤標志物和尿素、肌酐、尿酸水平比較

CKD患者血清HE4、CA125、CEA、CA15-3、尿素、肌酐和尿酸水平均明顯高于正常對照(P<0.05)，而血清AFP、CA199水平2組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　CKD組和正常對照組血清HE4、CA125、CEA、CA15-3、AFP、CA199、尿素、肌酐尿酸水平的比較

二、血清HE4、尿素、肌酐和尿酸對CKD的診斷價值分析

ROC曲線分析顯示HE4對CKD的診斷價值最為明顯，其曲線下面積達到0.978，明顯高于尿素、肌酐和尿酸。見表2、圖1。

表2　各指標診斷CKD的ROC曲線分析

三、CKD各分期患者血清各種腫瘤標志物、尿素、肌酐和尿酸水平的比較

CKD各分期患者之間血清HE4、CEA、尿素、肌酐和尿酸水平差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.005)，且隨著病情嚴重程度的增加而增高。見表3。

圖1　各指標診斷CKD的ROC曲線分析

分期例數(shù)HE4(pmol/L)CA125(U/mL)CEA(μg/L)CA15-3(U/mL)尿素(mmol/L)肌酐(μmol/L)尿酸(μmol/L)CKD12887.6(52.1～252.0)19.00(9.00～549.00)1.98(0.20～5.91)13.09(6.93～23.88)3.9(3.0～6.4)76(46～153)361(141～413)CKD22294.9(46.5～633.0)16.78(6.62～398.20)1.87(0.67～5.17)9.64(3.92～56.16)6.4(3.9～30.6)92(45～124)431(167～587)CKD35252.3(119.0～417.2)15.24(4.13～220.70)2.72(0.69～4.17)11.08(5.96～33.51)9.1(2.9～16.1)135(119～401)413(137～671)CKD48781.3(199.6～976.0)21.35(8.15～93.28)3.41(0.49～7.58)8.49(6.01～36.16)17.2(12.5～44.2)439(153～1892)545(321～671)CKD518899.2(553.8～1231.0)12.60(4.98～98.24)5.29(1.13～20.10)12.96(11.92～35.71)28.9(6.2～52.0)701(330～1315)631(237～932)P值<0.0010.3360.0010.871<0.001<0.0010.001

四、血清HE4、CEA、尿素、肌酐和尿酸對嚴重腎功能衰竭、尿毒癥的診斷價值分析

采用ROC曲線分析血清HE4、尿素、肌酐和尿酸水平對嚴重腎功能衰竭、尿毒癥的4～5期CKD的診斷價值。結(jié)果顯示，上述各種指標對4～5期CKD均具有明顯的診斷價值，特別是HE4、尿素和肌酐，其曲線下面積均>0.9。見表4、圖2。

表4　各指標對4～5期CKD診斷的ROC曲線分析

圖2　各指標診斷4～5期CKD的ROC曲線分析

討論

HE4最早是由KIRCHHOF等[7]從人附睪遠端上皮細胞中發(fā)現(xiàn)的，是一種與精子成熟密切相關(guān)的蛋白酶抑制劑。血清研究顯示，HE4是一個重要的卵巢癌輔助診斷指標，其對卵巢癌的診斷價值要優(yōu)于CA125，因此HE4在各臨床實驗室得到越來越廣泛的應(yīng)用。但隨著研究的深入，大量證據(jù)表明，血清HE4在肺癌、子宮內(nèi)膜癌等其他腫瘤中的表達也明顯增高，甚至國外最新研究發(fā)現(xiàn)，在CKD和腎纖維化疾病患者中，血清HE4的表達水平也有明顯增高[8-9]，但這些研究并未深入探討HE4對CKD及其分期的診斷價值。此外，這方面的研究在國內(nèi)尚未見報道。因此，本研究深入探討了血清HE4對CKD及其分期的診斷價值，并與其它多種常用實驗室指標進行了比較。

本研究納入的CKD患者主要為男性(男66例，女15例)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清HE4在CKD患者中的表達明顯升高，與國外報道[8-9]一致。此外，CKD患者其它腫瘤標志物(CA125、CEA和CA15-3)的血清水平也明顯高于健康對照者，這些結(jié)果與以往文獻報道[10-11]的結(jié)果相似。提示上述幾種腫瘤標志物的血清水平在CKD中均有改變，臨床上在分析這些腫瘤標志物的意義時首先應(yīng)該排除CKD的影響。ROC曲線分析顯示血清HE4、CA125、CEA和CA15-3對CKD均有明顯的診斷意義，其中HE4的診斷價值最為明顯，其ROC曲線下面積甚至高于尿素、肌酐和尿酸，提示對于臨床上懷疑CKD的患者，也可采用血清HE4進行輔助診斷。

本研究還發(fā)現(xiàn)，HE4的血清水平隨著CKD臨床分期的增加而逐漸增高，血清CA125和CA15-3水平則與CKD的嚴重程度無關(guān)，血清CEA水平雖然有隨著CKD嚴重程度的加重而增高的趨勢，但由于很少有CKD患者的血清CEA水平高于參考區(qū)間，因此其臨床意義并不明顯。進一步通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，HE4對晚期腎功能衰竭和尿毒癥(4～5期CKD)具有重要的輔助診斷價值，其曲線下面積甚至超過尿酸，與尿素和肌酐相似。這些結(jié)果提示，CKD患者腎功能的變化會明顯影響血清HE4水平，通過檢測血清HE4的水平可以判斷CKD的臨床分期，特別對于晚期腎功能衰竭和尿毒癥患者，其預(yù)測價值尤為明顯。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)CKD可以明顯影響血清HE4水平，因此臨床上CKD以外疾病應(yīng)用HE4時須排除CKD。此外，血清HE4對于診斷CKD及其臨床分期具有重要意義，因此臨床上可能轉(zhuǎn)為CKD的患者可以通過檢測血清HE4進行輔助診斷和分期判斷。

參考文獻

[1]WANG J， GAO J， YAO H， et al. Diagnostic accuracy of serum HE4， CA125 and ROMA in patients with ovarian cancer: a meta-analysis[J]. Tumor Biol， 2014， 35(6): 6127-6138.

[2]HERTLEIN L， STIEBER P， KIRSCHENHOFER A， et al. Human epididymis protein 4(HE4) in benign malignant diseases[J]．Clin Chem Lab Med， 2012， 50(12): 2181-2188.

[3]IWAHORI K， SUZUKI H， KISHI Y， et al. Serum HE4 as a diagnostic and prognostic marker for lung cancer[J]．Tumour Biol, 2012， 33(4): 1141-1149.

[4]ANGIOLI R， MIRANDA A， ALOISI A， et al. A critical review on HE4 performance in endometrial cancer: where are we now[J]. Tumour Biol， 2014， 35(2): 881-887.

[5]PRESL J， NOVOTNY Z， TOPOLCAN O， et al. CA125 and HE4 levels in a Czech female population diagnosed with endometrial cancer in preoperative management[J]. Anticancer Res， 2014， 34(1):327-331.

[6]GALGANO MT, HAMPTON GM，F(xiàn)RIEMON HF JR．Comprehensive analysis of HE4 expression in normal and malignant human tissues[J]. Mod Pathol， 2006， 19(6)：847-853．

[7]KIRCHHOFF C，HABBEN I，IVELL R，et al．A major human epididmis-specific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors[J]. Biol Reprod， 1991， 45(2): 350-357．

[8]LEVEY AS， ECKARDT KU， TSUKAMOTO Y， et al. Definition and classification of chronic kidney disease: a position statement from Kidney Disease: Improving Global Outcomes(KDIGO)[J]. Kidney Int， 2005， 67(6): 2089-2100.

[9]NAGY B JR， KRASZNAI ZT， BALLA H， et al. Elevated human epididymis protein 4 concentrations in chronic kidney disease[J]．Ann Clin Biochem， 2012， 49(Pt 4): 377-380.

[10]LINDQUIST JA， MERTENS PR. Myofibroblasts， regeneration or renal fibrosis-is there a decisive hint[J]. Nephrol Dial Transplant, 2013， 28(11):2678-2681.

[11]TONG HL， DONG ZN， WEN XY， et al. Impact of chronic kidney disease on serum tumor markers concentrations[J]．Chin Med J(Engl)， 2013， 126(2): 274-279.

(本文編輯：姜敏)

收稿日期：(2000-00-00)

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)05-0461-04R446.62

文獻標志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.05.013

通訊作者：楊再興，聯(lián)系電話：021-81886077。

作者簡介：吳萍，女，1976年生，學士，主管技師，主要從事腫瘤免疫檢驗研究。