經(jīng)正敏 馬濤 馮智 洪鐳 周蕾 馬會來 祖榮強 謝國祥
目的調(diào)查南京市兩所高校細菌性痢疾暴發(fā)的傳染來源、傳播方式和波及范圍。方法本研究以2015年9月7日至10月8日南京市兩所高校細菌性痢疾疑似、可能和確診患者為研究對象。定義疑似患者為兩所高校學(xué)生、教職工中出現(xiàn)腹瀉癥狀者;可能患者為疑似患者且出現(xiàn)發(fā)熱(T≥37.4℃)、里急后重或腹痛癥狀之一者;確診患者為疑似或可能患者且糞便或肛拭子標(biāo)本PCR檢測志賀氏菌核酸片段陽性或分離到志賀氏菌者。收集兩所高校的一般情況;通過該區(qū)醫(yī)療機構(gòu)、校衛(wèi)生所和輔導(dǎo)員報告的方式進行患者搜索,對患者進行個案調(diào)查并描述病例一般情況、臨床表現(xiàn)、分布特征;開展患者對照研究;調(diào)查可疑餐次和食物,對患者和食堂從業(yè)人員采集大便或肛拭子標(biāo)本以及環(huán)境和食物留樣標(biāo)本行核酸片段聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測沙門氏菌和志賀氏菌,運用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對分離的菌株進行同源性分析。利用描述流行病學(xué)方法描述病例時間、空間和人群分布特征,罹患率差異用χ2檢驗,病例對照研究中計算可疑餐次的OR值及95%可信區(qū)間(CI)。結(jié)果A、B高校分別搜索到436例和36例病例,罹患率分別為2.6%(436/15385)和0.23%(36/15449),流行曲線提示點源暴露;A高校住校生罹患率高于走讀生[2.9%(434/15027) vs 0.78%(2/258),χ2=4.09,P<0.05],南宿舍區(qū)罹患率高于北宿舍區(qū) [4.6%(351/7 666) vs 1.1%(83/7361),χ2=159.46,P<0.001]。病例對照研究顯示A高??梢刹痛螢?月20日晚餐(OR=2.4,95%CI為1.2~4.7);兩所高?;颊吆拖嚓P(guān)食堂從業(yè)人員肛拭子標(biāo)本中分離到10株宋內(nèi)氏志賀氏菌Ⅰ型菌株,PFGE檢測結(jié)果顯示高度同源。結(jié)論本次疫情為一起宋內(nèi)氏志賀氏菌引起的食源性細菌性痢疾暴發(fā),波及兩所高校,應(yīng)繼續(xù)加強食源性疾病監(jiān)測和學(xué)校、集體單位食堂的衛(wèi)生管理和監(jiān)督。
細菌性痢疾; 暴發(fā); 宋內(nèi)氏志賀氏菌; 脈沖場凝膠電泳
2015年9月22日16時,南京市江寧醫(yī)院接診數(shù)十名發(fā)熱伴腹瀉患者,多為A高校學(xué)生,少數(shù)為B高校學(xué)生,接診醫(yī)師當(dāng)即懷疑為食物中毒并向江寧區(qū)疾病預(yù)防控制中心(center for disease control and prevention,CDC)報告。為查明食物中毒的感染來源、傳播方式和波及范圍,以便提出科學(xué)的控制措施,中國現(xiàn)場流行病學(xué)培訓(xùn)項目(chinese field epidemiology training program,CFETP)學(xué)員和江寧區(qū)CDC專業(yè)人員對本起疫情進行了調(diào)查。
1.疑似患者:2015年9月7日至10月8日,A、B高校學(xué)生、教職工中出現(xiàn)腹瀉癥狀者。
2.可能患者:疑似患者出現(xiàn)發(fā)熱(體溫T≥37.4℃)、里急后重、腹痛癥狀之一者。
3.確診患者:疑似或可能患者中出現(xiàn)糞便或肛拭子志賀氏菌核酸片段聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)陽性或分離培養(yǎng)志賀氏菌陽性。
通過江寧區(qū)醫(yī)療機構(gòu)、校衛(wèi)生所和輔導(dǎo)員報告的方式進行患者搜索,按照患者定義對搜索到的患者進行核實并按照制定的調(diào)查表開展個案調(diào)查,主要調(diào)查患者的基本信息、發(fā)病及就診信息、臨床信息、飲水和飲食信息和實驗室檢測信息等。
2015年9月25日,對A高校的可能患者和確診患者中隨機選擇70人作為患者組,從病例組患者同班級中隨機選擇同性別未發(fā)病的70名學(xué)生為對照組,開展頻組匹配的病例對照研究,調(diào)查內(nèi)容包括患者和對照的基本信息、9月18日晚餐至9月21日晚餐期間就餐地點和食用食物信息。
采集兩校患者大便或肛拭子、A高校南食堂和B高校二食堂從業(yè)人員肛拭子、兩校食堂環(huán)境標(biāo)本、9月21日剩余食物標(biāo)本,開展沙門氏菌和志賀氏菌PCR檢測。運用脈沖場凝膠電泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)對分離的菌株進行同源性分析。
利用EpiData 3.1設(shè)計患者個案調(diào)查和患者對照調(diào)查數(shù)據(jù)庫,并進行數(shù)據(jù)錄入;利用Microsoft Office Excel 2007對資料進行整理,并描述病例三間分布特征(臨床特征、流行曲線和人群分布特征);ArcGIS 10.2繪制患者空間分布地圖;Epi Info 7.1進行統(tǒng)計學(xué)檢驗,罹患率差異用χ2檢驗,患者對照研究中計算可疑餐次的OR值及95%可信區(qū)間(confidence interval,CI),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
兩所高校都位于江寧大學(xué)城內(nèi),二者直線距離為0.8 km,實際距離為1.3 km。A高校在校學(xué)生15 385人(男生4 356人,女生11 029人),教職工1 200余人;有14個二級學(xué)院,學(xué)生公寓33棟,每間宿舍住6名學(xué)生。B高校在校學(xué)生15 449人(男生6 179人,女生9 270人),教職員工1 500人;有12個二級學(xué)院,學(xué)生公寓50棟,每間宿舍住4名學(xué)生。
截止2015年10月8日,A高校共搜索到患者436例(疑似患者59例、可能患者357例、確診患者20例),B高校共搜索到患者36例(疑似患者2例、可能患者32例、確診患者2例)。所有患者均為學(xué)生,教職工無發(fā)病報告,A高校學(xué)生罹患率2.60%(436/15 385),B高校學(xué)生罹患率為0.23%(36/15 449)。
兩所高校患者均以腹瀉、腹痛和發(fā)熱為主要表現(xiàn)(見表1)。收集到A高校52例患者血常規(guī)檢測資料和11例患者大便常規(guī)檢測資料。血常規(guī)結(jié)果示:白細胞計數(shù)升高者占60%(31/52),中性粒細胞比例升高者占54%(28/52)。大便查出白細胞者占81%(9/11),查出紅細胞者占36%(4/11)。收集到B高校7例患者血常規(guī)檢測資料,血常規(guī)示白細胞計數(shù)均升高,中性粒細胞比例升高者占86%(6/7);未收集到B高?;颊叽蟊愠R?guī)檢測資料。
表1 2015年9月南京市江寧區(qū)兩所高校細菌性痢疾暴發(fā)病例臨床表現(xiàn)[例(%)]
(一)時間分布
兩所高校學(xué)生只有經(jīng)過校醫(yī)務(wù)室轉(zhuǎn)診之后再去校外就醫(yī)才能享受醫(yī)藥費報銷。A高校9月1日開學(xué),新生9月7日報到,9月14日開始軍訓(xùn),校衛(wèi)生所腹瀉癥狀學(xué)生就診記錄顯示:9月7日至10日記錄例數(shù)≤5例/d;13日至18日記錄維持15~20例/d;20日開始迅速升高并在23日達到高峰,遠超過基線水平。經(jīng)過現(xiàn)場核實,確定發(fā)生暴發(fā)疫情。搜索到的患者中首發(fā)病例出現(xiàn)在9月14日,自20日起迅速增加,22至23日達到發(fā)病高峰,然后快速下降,中位發(fā)病日期為9月22日;南、北宿舍區(qū)中位發(fā)病日期為均為9月22日,兩者特征基本一致。考慮細菌性痢疾的潛伏期(數(shù)小時至7 d,一般1~3 d),排除基線病例的影響,流行曲線提示為點源暴露,可疑暴露日期為9月19日至21日,流行曲線出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。流行曲線見圖1。
圖1 2015年9月A高校細菌性痢疾暴發(fā)流行曲線
B高校于9月19日出現(xiàn)首發(fā)患者,22日達到發(fā)病高峰,首末病例間隔為4 d,中位發(fā)病日期與A高校相同(9月22日),流行曲線提示為點源暴露,可疑暴露日期為9月19至21日。見圖2。
圖2 2015年9月B高校細菌性痢疾暴發(fā)流行曲線
(二) 空間分布
A高校走讀生罹患率為0.78%(2/258),住校生罹患率為2.90%(434/15 027),住校生罹患率高于走讀生(χ2=4.09,P=0.04)。A高校共有南北2個食堂樓,每個食堂樓又各有3層,按樓層從下往上,北食堂依次分為北一、北二、北三食堂;南食堂依次分為南一、南二食堂,南食堂3樓又分為南三食堂和南四(教職工)食堂,均提供早、中、晚三餐。南宿舍區(qū)(16~30棟)學(xué)生罹患率為4.60%(351/7 666),高于北宿舍區(qū)(1至15棟和31至33棟)學(xué)生的1.1%(83/7 361),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=159.46,P<0.001)。提示學(xué)生感染來源可能與南食堂有關(guān)(見圖3)。暴發(fā)波及15%(372/2 451)的宿舍,其中有2例患者的宿舍占16%(60/372),有3例患者的宿舍占2%(8/372)。90%(391/436)的患者回答了發(fā)病前3 d就餐地點:94%(367/391)的患者就餐地點為南食堂,其中所占比例最高為南二食堂的89%(326/367),)其次為南一食堂的46%(168/367,20%(75/367)為南三食堂;17%(65/391)的患者曾在北食堂就餐。
B高校有2個食堂樓,供全校學(xué)生及教職工用餐,二食堂共有3層,按樓層自下往上分為1、2、3餐廳,均提供早、中、晚三餐。查閱了28例患者的刷卡記錄發(fā)現(xiàn):9月20日午餐和晚餐在二食堂3餐廳中式快餐窗口就餐比例最高,分別為64%(18/28)和57%(16/28),暴露于這2個餐次之一的比例為96%(27/28)。病例散在分布于7棟宿舍樓。
(三)人群分布
A高校大一、大二、大三、大四年級罹患率分別為1.4%(53/3 776)、4.8%(160/3 368)、2.5%(109/4 313)和2.9%(114/3 928),四者罹患率不完全相等(χ2=74.53,P<0.001)。女生罹患率為3.3%(347/10 678),高于男生的2.0%(87/4 349),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.19,P<0.001)。對性別和宿舍區(qū)域作叉生分析,發(fā)病風(fēng)險與宿舍區(qū)域有關(guān)(南宿舍區(qū)發(fā)病風(fēng)險高于北宿舍區(qū))。見表2。
B高校男生罹患率為0.23% (14/6 179),女生罹患率為0.24%(22/9 270),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.02,P>0.05)。B高?;颊叱?例為同一班級同一宿舍外,其他患者均為不同班級。
A高校病例組70例患者的發(fā)病日期分布為9月20日2例、21日12例、22日28例、23日19例、24日7例、25日2例??梢刹痛螢?月20日晚餐(OR=2.4,95%CI為1.2~4.7,P<0.05)。見表3。由于調(diào)查時已距9月20日5 d,雖有食堂菜譜,但調(diào)查對象不能明確回憶出食物種類,未能獲得可疑食物信息。
圖3 2015年9月A高校細菌性痢疾病例宿舍分布
表2 2015年9月A高校宿舍區(qū)域和性別與細菌性痢疾暴發(fā)的叉生分析
表3 2015年9月18至21日A高校細菌性痢疾暴發(fā)患者南二食堂暴露及可疑餐次調(diào)查[例(%)]
注:OR為比值比,95%CI為95%置信區(qū)間,a為可疑餐次
采集了兩所高校部分患者、食堂從業(yè)人員和食堂食物留樣及環(huán)境標(biāo)本,進行PCR檢測,檢測內(nèi)容為沙門氏菌和志賀氏菌。沙門氏菌PCR檢測均陰性,志賀氏菌PCR陽性45份。A高校南二食堂從業(yè)人員肛拭子志賀氏菌PCR陽性檢出率為18%(9/51),由于未取得學(xué)生刷卡記錄,故無法分析南二食堂就餐學(xué)生罹患率與從業(yè)人員陽性率的關(guān)聯(lián)性。B高校南二食堂2餐廳和3餐廳從業(yè)人員肛拭子志賀氏菌PCR陽性檢出率分別為2.3%(2/88)和9.2%(6/65)。在采集的9月21日晚餐食物留樣標(biāo)本中僅有1份醬鴨PCR檢出陽性。見表4。
志賀氏菌PCR陽性標(biāo)本中共分離培養(yǎng)得到10株菌株(表4),經(jīng)血清學(xué)和生化反應(yīng)鑒定為宋內(nèi)氏志賀氏菌Ⅰ型。限制性內(nèi)切酶XbaI對分離得到的10株菌株原位酶切后,經(jīng)19 h PFGE檢測,除1份A校學(xué)生患者菌株(3號標(biāo)本)可能由于操作原因引起檢測結(jié)果誤差較大,余9株在20.5~1 135 kb范圍產(chǎn)生了22 條片段條帶,且呈現(xiàn)高度同源性,提示涉及兩所高校的細菌性痢疾暴發(fā)疫情之間可能存在一定的流行病學(xué)聯(lián)系。見圖4。
表4 2015年9月兩所高校細菌性痢疾暴發(fā)標(biāo)本采集和檢測結(jié)果
注:a表示陽性結(jié)果的食物留樣為醬鴨,b表示陽性結(jié)果的食物留樣為牛肉丸子
圖4 2015年9月兩所高校宋內(nèi)氏志賀氏菌
兩所高校均由江寧區(qū)自來水公司供水,無二次供水,宿舍和教室不提供桶裝水,飲水為熱水壺(宿舍)和開水器(教學(xué)樓)燒的開水,教職工與學(xué)生飲水來源相同,相同管網(wǎng)供水的周邊社區(qū)居民未出現(xiàn)腹瀉病例增多現(xiàn)象。
兩所高校地處偏僻,周邊空曠,環(huán)境、衛(wèi)生條件良好。兩校食堂由不同人員承包,食品原料供應(yīng)商為政府招標(biāo)企業(yè)。A高校各食堂食品原料供應(yīng)商不同,B高校食堂食品原料由該校后勤集團統(tǒng)一采購。兩校食品原料(每天都送貨)供應(yīng)商不同,但蔬菜瓜果由食堂自己聯(lián)系采購。食堂從業(yè)人員都有健康證,一日三餐均在食堂。經(jīng)查閱兩校食堂從業(yè)人員考勤記錄,近期無病休員工。
A高校南二食堂日平均就餐量5 000人次,餐具用高溫蒸汽洗碗機進行清洗。經(jīng)詢問食堂老板和查看留樣記錄,9月20日及之前未發(fā)現(xiàn)有涼菜、鹵菜,在采集的9月21日晚餐留樣標(biāo)本PCR檢出陽性的醬鴨為該食堂加工制作。9名檢測陽性從業(yè)人員工種為:保潔2人,洗菜、切菜工4人,收銀1人,打飯1人,面點師1人,均否認(rèn)近期出現(xiàn)過腹瀉或發(fā)熱等癥狀,經(jīng)現(xiàn)場體溫測量未發(fā)現(xiàn)異常。
B高校二食堂2餐廳從業(yè)人員陽性檢出率為2.3%(2/88),為清真食品加工人員和雜工。3餐廳從業(yè)人員陽性檢出率9.2%(6/65),其中式快餐窗口從業(yè)人員陽性檢出率為57.0%(4/7),高于其他窗口陽性檢出率(Fisher精確概率P=0.001)。中式快餐窗口日平均就餐400人次,陽性檢測人員工種:主廚1人、幫廚1人、雜工2人,幫廚和雜工來自同一家庭,曾于9月24日出現(xiàn)過腹痛和水樣便,這個家庭有5人在該窗口工作。
A高校南二食堂、B高校2、3餐廳9月19日至21日菜譜相似。兩校陽性檢測從業(yè)人員之間并無來往,居住地點較分散。A高校2名與B高校中式快餐4名陽性檢測人員居住在離兩校南部約1 km的某村(自然村),該村常住人口約3 000人,房屋建筑擁擠,環(huán)境衛(wèi)生條件差,多為外來務(wù)工人員租住。經(jīng)查閱位于該村的衛(wèi)生服務(wù)站患者就診和氟哌酸銷售記錄,9月份以來未出現(xiàn)腹瀉病例增多現(xiàn)象,也未發(fā)現(xiàn)陽性檢測從業(yè)人員就診記錄。
細菌性痢疾是由志賀氏菌引起的夏秋季節(jié)常見病,是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定報告的乙類傳染病。近年來,發(fā)病率總體呈下降趨勢,細菌性痢疾暴發(fā)疫情的報道也越來越少[1-2]。A、B兩所高校暴發(fā)日期接近,患者發(fā)病日期集中在9月21日至23日,持續(xù)時間短,流行曲線提示點源暴發(fā)。學(xué)生飲水為開水,周圍社區(qū)居民中未出現(xiàn)腹瀉病例增多,排除水源性原因;除食堂就餐外,無其他共同暴露史。病原學(xué)檢測結(jié)果為宋內(nèi)氏志賀氏菌Ⅰ型,PFGE顯示高度同源。本次疫情是由宋內(nèi)氏志賀氏菌Ⅰ型引起的食源性細菌性痢疾暴發(fā),波及兩所高校。
宋內(nèi)氏志賀氏菌感染后引起的癥狀較輕,多呈不典型發(fā)作[1]。本次調(diào)查使用的病例定義較寬松,以提高發(fā)現(xiàn)病例的敏感性。調(diào)查結(jié)果顯示:(1)A高校住校生罹患率高于走讀生,南宿舍區(qū)罹患率高于北宿舍區(qū),患者發(fā)病前在南二食堂就餐比例最高,僅南二食堂從業(yè)人員檢出陽性。據(jù)此,本次A高校細菌性痢疾暴發(fā)與在南二食堂就餐有關(guān),可疑餐次為9月20日午餐、晚餐。(2)B高?;颊?月20日午餐和晚餐在二食堂3餐廳中式快餐就餐比例最高,該窗口7名從業(yè)人員中的4名檢測陽性,暴發(fā)與3餐廳中式快餐窗口有關(guān),可疑餐次與A高校相同。(3)A高校南二食堂日平均5 000人次就餐,而B高校3餐廳中式快餐窗口日平均400人次就餐,暴露人數(shù)不同,引起兩校發(fā)病人數(shù)和罹患率相差較大。但從A高校流行曲線來看,本研究存在2個需要關(guān)注的問題:一是存在一定數(shù)量的符合患者定義的人員未被搜索到,尤其是9月19日之前,校衛(wèi)生所記錄的因腹瀉就診學(xué)生,可能由于發(fā)病日期較早或癥狀已經(jīng)消失而未被發(fā)現(xiàn)和納入研究中;二是搜索到的患者中可能存在較多的基線病例,新生軍訓(xùn)可能引起腹瀉學(xué)生數(shù)量增加,使得基線病例數(shù)增加,并與本次暴發(fā)融合到一起,對疫情分析帶來一定影響。同時,流行曲線有拖尾現(xiàn)象,可能為人人接觸傳播引起的二代病例,也可能是潛伏期長的病例或是基線病例。
基于基因水平的 PFGE具有重復(fù)性好、特異性高、分辨能力強等特點,可以從分子水平研究暴發(fā)、流行中致病微生物之問的相關(guān)性,用于分析不同來源菌株是相關(guān)暴發(fā)還是無關(guān)散發(fā),在志賀氏菌分子分型中也有較廣泛應(yīng)用[3-5]。對分離到的菌株P(guān)FGE檢測顯示高度同源,提示傳染來源可能相同,遺憾的是未能與當(dāng)?shù)厣鐓^(qū)居民中分離到的菌株同時進行PFGE檢測比較,也未能采集到9月20日的食物樣本,使溯源難度增加。結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查,雖不能明確兩校細菌性痢疾暴發(fā)存在的聯(lián)系,但有很強的證據(jù)提示病原的同源性。常昭瑞等[6]對我國2008至2011年細菌性痢疾暴發(fā)疫情分析發(fā)現(xiàn),學(xué)校食堂從業(yè)人員帶菌和食品加工過程中被污染是學(xué)校食源性細菌性痢疾暴發(fā)的主要原因,鮮有食品原料污染而引起細菌性痢疾暴發(fā)的文獻報道。本研究中,A、B高校食堂PCR陽性檢測人員互不認(rèn)識,無流行病學(xué)聯(lián)系;兩校食堂食品原料來自不同的供應(yīng)商,同時被污染的可能性較小。文獻記載,志賀氏菌抵抗力弱,加熱60℃僅10 min可被殺死,在污染物品、瓜果、蔬菜上可存活10~20 d,而宋內(nèi)氏志賀氏菌抵抗力最強[1]。瓜果蔬菜為各食堂自己采購,所以,筆者提出這種假設(shè):兩食堂同時采購了被病原污染的瓜果蔬菜,在制作涼菜或烹制過程中加熱時間短,未能徹底殺死殘存在蔬菜瓜果上的病原體,患者食入后被感染。但非常遺憾的是,未能對兩校食堂蔬菜瓜果供應(yīng)來源進行調(diào)查,未采集瓜果蔬菜原料進行病原檢測進行驗證。當(dāng)然,不能排除食堂從業(yè)人員帶菌,污染食物或餐具引起疾病傳播的可能。
學(xué)校是近年來細菌性食源性疾病的高發(fā)場所,也是細菌性痢疾暴發(fā)的主要場所,暴發(fā)疫情多發(fā)生在秋季開學(xué)之后的9月,而且一旦發(fā)生,往往造成大量學(xué)生發(fā)病[6-7]。南京市細菌性痢疾發(fā)病率低于全省平均水平,呈下降趨勢,2010年以來,僅發(fā)生1起中學(xué)細菌性痢疾暴發(fā)疫情,罹患率為0.94%,發(fā)生地
區(qū)與本次暴發(fā)相同[8-9]。本次暴發(fā),雖然未能明確可疑食物和感染來源,但通過現(xiàn)場調(diào)查結(jié)合實驗室PCR快速檢測技術(shù),在開展調(diào)查的當(dāng)天就確定了可疑食堂,采取了以切斷傳播途徑為主的控制措施(如可疑食堂停業(yè)整頓,相關(guān)從業(yè)人員待再次辦理健康證后才能上崗,病例醫(yī)學(xué)觀察,食堂、廁所、外環(huán)境消毒,展板方式開展健康宣教等)后,疫情很快得到控制。發(fā)生在高校的細菌性痢疾暴發(fā)事件文獻記載較少,有很多調(diào)查證實,細菌性痢疾暴發(fā)多是由于集體單位、學(xué)校食堂衛(wèi)生管理疏漏,從業(yè)人員衛(wèi)生意識差,食物因帶菌從業(yè)人員污染或加工過程污染而引起[10-12]。所以,加強食源性疾病監(jiān)測和學(xué)校、集體單位食堂的衛(wèi)生管理和監(jiān)督,仍是防制食源性疾病暴發(fā)的重要環(huán)節(jié)。
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