新法規(guī)下總?cè)饧谞钕僭彼釡y定試劑盒的注冊審評關(guān)注點

摘要：參考新版《體外診斷試劑注冊管理辦法》及YY/T 1222-2014《總?cè)饧谞钕僭彼岫繕?biāo)記免疫分析試劑盒》等一系列新法規(guī)的要求，對二類診斷試劑總?cè)饧谞钕僭彼岬膶徳u關(guān)注點技術(shù)要求、臨床評價、檢測報告、說明書進(jìn)行總結(jié)分析。

關(guān)鍵詞：總?cè)饧谞钕僭彼?；注冊審評；定量

Registration Review Concerns of the Total Three Iodine -Thyroid Acid Assay Kit under the New Regulations

LI Feng-mei

（Guangdong Food and Drug Administration，Review and Certification Center，Guangzhou 510080，Guangdong，China）

Abstract：Refer to the new provisions on IVD registration and YY/T 1222-2014 Totle T3 quantitative labelling immunoassay kit ，etc. Analyse the evaluation points of the totle T3 immunoassay kit，which are technical the requirements，clinical evaluation， test report and instructions.

Key words：TT3；Registration review；Quantitative

甲狀腺激素對機體的生理作用廣泛，不僅能促進(jìn)人體的生長、發(fā)育和組織分化，亦能促進(jìn)糖類、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)的氧化分解，增加機體的基礎(chǔ)代謝率，同時對人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)及造血過程等都有顯著的作用。臨床上，總甲狀腺素（Total Thyroxine，TT4）、總?cè)饧谞钕僭彼幔═otal Triiodothyronine，TT3）檢測濃度的降低常見于甲減、甲狀腺炎等；反之，則主要見于甲亢等疾病[1]。因此，監(jiān)測其濃度水平，保持其分泌量的穩(wěn)定平衡，對人體的健康意義重大。市場上亦出現(xiàn)了大量的相關(guān)檢測試劑盒，以輔助臨床評價甲狀腺的功能。

本文選取TT3檢測試劑為切入點，綜合新法規(guī)注冊申報資料要求及審評中的常見問題，對該類試劑審評的關(guān)注點匯總?cè)缦拢?/p>

1適用范圍

1.1 YY/T 1222-2014《總?cè)饧谞钕僭彼岫繕?biāo)記免疫分析試劑盒》適用于以競爭法為原理的定量測定TT3，包括以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、（時間分辨）熒光標(biāo)記等標(biāo)記方法，微孔板，管，磁顆粒、微珠和塑料珠等作為載體的定量測定TT3的免疫分析試劑盒。

1.2該標(biāo)準(zhǔn)不適用于 ①膠體金標(biāo)記TT3試紙條；②用125I等放射性同位素標(biāo)記的TT3放射免疫/免疫放射試劑盒。

2產(chǎn)品技術(shù)要求[2-4]

新版《體外診斷試劑注冊管理辦法》將產(chǎn)品注冊標(biāo)準(zhǔn)變化為產(chǎn)品技術(shù)要求，主要保留了原注冊產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中的性能指標(biāo)及檢驗方法。參照YY/T 1222-2014的內(nèi)容，該類產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)及檢驗方法如下：

2.1外觀和物理檢查 在自然光下目測，試劑盒各組分應(yīng)齊全，內(nèi)外包裝均應(yīng)完整無損，標(biāo)簽清晰，液體試劑無滲漏。凍干組分呈疏松體，加入復(fù)溶劑后在10min內(nèi)可溶解，溶解后無沉淀/絮狀物。

2.2線性

2.2.1試劑盒校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線的線性范圍應(yīng)覆蓋0.8ng/ml～6.0ng/ml，用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型擬合，劑量-反應(yīng)曲線線性相關(guān)系數(shù)的絕對值（|r |）應(yīng)≥0.990。

2.2.2對于未配備校準(zhǔn)品的試劑盒，將國家標(biāo)準(zhǔn)品/其他高濃度樣品按照試劑盒宣稱的線性范圍，配制高中低不同（一般≥5個）的濃度點，建立相應(yīng)的劑量-反應(yīng)曲線，其線性應(yīng)符合2.2.1的規(guī)定。

2.3最低檢出限 重復(fù)測定零校準(zhǔn)品/樣本稀釋液至少10次，計算得出反應(yīng)量數(shù)值（A/RLU/CPS等）的均值 X 及標(biāo)準(zhǔn)差SD，將（-2SD）的反應(yīng)量數(shù)值代入劑量-反應(yīng)曲線，計算出相應(yīng)的濃度值即為最低檢測限，應(yīng)≤0.4ng/ml。

2.4準(zhǔn)確性[5]

2.4.1將國家標(biāo)準(zhǔn)品用試劑盒緩沖體系配制成與試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品相應(yīng)的（一般≥5個）不同濃度點，與校準(zhǔn)品同時進(jìn)行測定，每點至少平行測定2次，計算得出兩條劑量-反應(yīng)曲線的斜率和效價比，用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型擬合，要求經(jīng)t檢驗的兩條劑量-反應(yīng)曲線不顯著偏離平行；同時以國家標(biāo)準(zhǔn)品為對照品，試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品的實測值與標(biāo)示值的效價比應(yīng)在0.900～1.100。

2.4.2對于沒有配備系列校準(zhǔn)品的試劑盒，可選擇適當(dāng)?shù)木彌_體系將國家標(biāo)準(zhǔn)品在試劑盒規(guī)定的測量范圍內(nèi)，配制成2～3個濃度點，每點至少平行測定2次，其實測值與理論值之比應(yīng)在0.850～1.150。

2.5精密度

2.5.1 分析內(nèi)精密度 在劑量-反應(yīng)曲線的不同區(qū)域設(shè)置2～3個質(zhì)控品，每次分析每個質(zhì)控品重復(fù)測定至少8次，各試劑盒質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)（CV）要求為：手工操作試劑盒應(yīng)≤15.0%；全自動免疫分析系統(tǒng)試劑盒應(yīng)≤8.0%。

2.5.2 批間精密度 在劑量-反應(yīng)曲線的不同區(qū)域設(shè)置2～3個質(zhì)控品，至少用3個批次的產(chǎn)品進(jìn)行單獨分析，質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)≤20.0%。

2.6 質(zhì)控品測定值 在劑量-反應(yīng)曲線的不同區(qū)域設(shè)置2～3個質(zhì)控品，配備定值質(zhì)控品的試劑盒，測定結(jié)果應(yīng)在試劑盒規(guī)定的范圍內(nèi)。

2.7 特異性

2.7.1 與總甲狀腺素（TT4） 用試劑盒適宜的緩沖體系配制特異性樣本，濃度≥500ng/ml的TT4在本試劑盒上的測定結(jié)果應(yīng)≤2.0ng/ml。

2.7.2 與反三碘甲狀腺原氨酸（rT3） 用試劑盒適宜的緩沖體系配制特異性樣本，濃度≥50ng/ml的rT3在本試劑盒上的測定結(jié)果應(yīng)≤2.0ng/ml。

2.8 穩(wěn)定性（如適用）

2.8.1 熱穩(wěn)定性 將試劑盒在37℃放置一段時間（一般3～7d），檢測結(jié)果應(yīng)符合2.1～2.5.1、2.6的規(guī)定。

2.8.2 凍干試劑復(fù)溶后穩(wěn)定性 試劑盒中的凍干組分在規(guī)定的條件下復(fù)溶后，4℃下放置7d，檢測結(jié)果應(yīng)符合2.1～2.5.1、2.6的規(guī)定。（注：試劑盒說明書另有規(guī)定者除外。）

3臨床評價資料[6]

3.1臨床試驗研究方法 TT3檢測試劑在注冊檢驗合格后，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗。具體的研究方法參照新版《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求：

3.1.1 臨床機構(gòu)的要求 應(yīng)在國家局食品藥品監(jiān)督管理局資質(zhì)認(rèn)可的臨床單位進(jìn)行試驗并加蓋公章，且應(yīng)有該臨床單位醫(yī)學(xué)倫理委員會意見。同時向當(dāng)?shù)毓芾聿块T進(jìn)行臨床備案。

3.1.2 臨床樣本的要求 總樣本數(shù)至少為200例。樣本陽性率應(yīng)≥30%，濃度范圍應(yīng)覆蓋企業(yè)宣稱的線性范圍。不同的樣本類型應(yīng)有相應(yīng)的試驗研究。

3.1.3 對比試劑的選擇 目前TT3已有大量已上市的同類產(chǎn)品，選擇合適的對比產(chǎn)品同時進(jìn)行臨床試驗，證明二者實驗結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異即可。其中，對比產(chǎn)品的選擇建議參照 《EP9-A2》的要求。

3.2 統(tǒng)計分析 定量產(chǎn)品統(tǒng)計分析應(yīng)包括定量值相關(guān)性和一致性分析兩方面內(nèi)容。

3.2.1 相關(guān)性的分析 用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性及不同類型樣本檢測結(jié)果之間的相關(guān)性。

3.2.2 一致性分析 由于配對t檢驗的使用前提是正態(tài)分布、方差齊，且該方法主要檢驗兩診斷器械系統(tǒng)誤差的差別，對隨機誤差不敏感，故定量分析不建議使用配對t檢驗[7]。目前推薦使用Bland-Altman/EP9A2的方法來評估兩種定量數(shù)據(jù)的一致性[8]。

4產(chǎn)品注冊檢驗報告[4，5]

TT3產(chǎn)品在申報注冊時，應(yīng)提供具有醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)機構(gòu)出具的合格的注冊檢驗報告，且附有產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。且TT3應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行注冊檢驗。

5產(chǎn)品說明書[9]

按照新版《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，TT3相關(guān)試劑說明書的編寫應(yīng)注意以下問題：①產(chǎn)品名稱：參照YY/T 1222-2014的描述。通用名稱：總?cè)饧谞钕僭彼崦庖邷y定試劑盒英文名稱：Totle T3 immunoassay kti。②包裝規(guī)格：根據(jù)實際情況說明產(chǎn)品的具體包裝規(guī)格。③預(yù)期用途：參照《6840體外診斷試劑分類子目錄（2013版）》，描述為\"用于檢測人體樣本中總?cè)饧谞钕僭彼幔═T3）的含量，臨床上主要用于輔助評價甲狀腺的功能。\"④檢驗原理：應(yīng)根據(jù)企業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)品的實際檢驗原理進(jìn)行表述。⑤主要組成成分：產(chǎn)品中包含的試劑組分，應(yīng)說明名稱、數(shù)量及在反應(yīng)體系中的比例/濃度、生物學(xué)來源、活性及其他特性。試劑盒中的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)說明主要組成成份、生物學(xué)來源并注明校準(zhǔn)品的定值、溯源性及質(zhì)控品的允許范圍，如質(zhì)控品的靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。如試劑盒中包含耗材，應(yīng)列明耗材名稱、數(shù)量等信息。產(chǎn)品中不包含但對試驗必需的試劑組分，應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度，提供稀釋/混合方法及其他相關(guān)信息。⑥儲存條件及有效期：說明產(chǎn)品實時、開封、運輸?shù)膬Υ鏃l件及有效期。⑦適用儀器：說明產(chǎn)品的適用儀器名稱及型號。⑧樣本要求：說明產(chǎn)品使用樣本在采集過程中的注意事項，以及為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑/保護(hù)劑，已知的干擾物等。并說明維持樣本穩(wěn)定的貯存、處理和運輸方法。⑨檢驗方法：根據(jù)產(chǎn)品的實際情況，對其檢驗方法進(jìn)行描述。內(nèi)容包括試劑配制，試驗條件，試驗過程中注意的事項，校準(zhǔn)程序/校準(zhǔn)品的準(zhǔn)備和使用、校準(zhǔn)曲線的繪制方法，質(zhì)控品的使用、質(zhì)控方法及試驗結(jié)果的計算等。○10陽性判斷值或者參考區(qū)間：說明產(chǎn)品的參考區(qū)間，并簡要說明確定的依據(jù)?！?1檢驗結(jié)果的解釋：說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素?！?2檢驗方法的局限性：說明該檢驗方法受哪些原因影響?！?3產(chǎn)品性能指標(biāo)：說明產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)?！?4注意事項：注明必要的注意事項，如本品僅用于體外診斷；如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告；如不同批次的組分不可互用等?！?5標(biāo)識的解釋：如有圖形或符號，應(yīng)解釋其代表的意義。○16參考文獻(xiàn)：注明引用的參考文獻(xiàn)?！?7基本信息：注明產(chǎn)品的相關(guān)基本信息?！?8醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號：注明產(chǎn)品的注冊證編號。○19說明書核準(zhǔn)日期及修改日期：注明產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。

6結(jié)論

本文就新法規(guī)實施下的二類診斷試劑《總?cè)饧谞钕僭彼崦庖叻治鲈噭┖小吩谧詫徳u中遇到的一些常見問題進(jìn)行匯總，整理出該類產(chǎn)品的注冊審評關(guān)注點?？蓭椭嚓P(guān)審評人員深入了解該類產(chǎn)品的特點，以更好地把握注冊審評工作的要求和尺度，更系統(tǒng)全面地評價該類產(chǎn)品的安全有效性。與此同時，亦可對相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品注冊工作起到一定的參考和指導(dǎo)作用。

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編輯/申磊