食源性致病菌盲樣鑒定結(jié)果分析

摘要：目的 通過盲樣考核活動(dòng)，評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)微生物的技術(shù)水平和能力，確保日常檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。方法 按照GB/T4789-94、2003、2012和GB/T8538-2008進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 盲樣檢出：1#沙門氏菌屬O4群；2#志賀氏菌；3#腸炎沙門氏菌；4#福氏志賀氏菌1a；5#宋內(nèi)氏1相；6# 鼠傷寒沙門氏菌；7#福氏志賀氏菌2a；8#鮑氏志賀氏菌1-5型；9#嗜水氣單胞菌；10#銅綠假單胞菌；11#金黃色葡萄球菌；12#蠟樣芽胞桿菌。結(jié)論 通過參加盲樣考核，可以提升該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)微生物能力，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室管理體系進(jìn)一步完善。

關(guān)鍵詞：食源性致病菌；盲樣檢測(cè)；檢驗(yàn)?zāi)芰?/p>

能力驗(yàn)證是通過實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)來確定實(shí)驗(yàn)室能力的活動(dòng)，它可用于確定某個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行某些特定檢測(cè)或測(cè)量的能力，以及監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室的持續(xù)能力。建立完善的質(zhì)量保證體系，微生物檢測(cè)質(zhì)量才能得到保證，才能向社會(huì)提供公正、準(zhǔn)確、科學(xué)數(shù)據(jù)且能提高和證實(shí)自身檢驗(yàn)?zāi)芰?，都具有積極作用。從1999年至今，我實(shí)驗(yàn)室不間斷參加自治區(qū)CDC組織盲樣考核，并都獲\"滿意\"結(jié)果，現(xiàn)將這幾年參加盲樣考核的檢測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 質(zhì)控盲樣由廣西省疾病預(yù)防控制中心提供共12份，編號(hào)分別為1#-12#，其中1#、2#均為（奶粉），其于都是半固體。

1.2培養(yǎng)基和試劑 GN增菌液、SC增菌液、蛋白胨水、SS培養(yǎng)基、EMB平板、CN瓊脂、三糖鐵瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板均購(gòu)自北京陸橋公司。各顯色平板培養(yǎng)基均購(gòu)自法國(guó)科瑪嘉。沙門氏菌屬診斷血清（30種）和志賀氏菌屬診斷血清（22種）分別購(gòu)自蘭州生物制品研究和寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司；生化鑒定管購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。以上公司提供所有的試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3檢測(cè)依據(jù) ①GB/T4789-94、2003、2012《食品微生物檢驗(yàn)方法.微生物學(xué)部分》[1]和GB/T8538-2008《飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》[2]及相關(guān)微生物檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范[3]；②按照現(xiàn)行有效的微生物和相關(guān)傳染病診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行鑒定[4]；③標(biāo)準(zhǔn)菌株：標(biāo)1#沙門氏菌屬04群；標(biāo)2#福氏志賀氏菌群3.4；標(biāo)3#銅綠假單胞菌；標(biāo)4#金黃色葡萄球菌；5#標(biāo)蠟樣芽胞桿菌。

1.4按實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求，進(jìn)行盲樣接種。

1.5儀器 恒溫培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠）、生物顯微鏡（廣西梧州市光學(xué)儀器廠制造）。

1.6實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1.6.1檢測(cè)基本步驟 樣品→增菌→于37℃左右培養(yǎng)6～24h→劃平板→三糖鐵→血清凝集→生化鑒定。

1.6.2增菌 1#、2#樣品分別直接稱取25g奶粉都接種于225ml蛋白胨水和GN增菌液中。在置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，觀察其生長(zhǎng)情況。

1.6.3接種劃線分離培養(yǎng) 1#、2#取增菌液用滅菌后接種環(huán)取一環(huán)，3#-12# 樣品直接取一環(huán)接種到平板，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h后培養(yǎng)基上觀察可疑菌落生長(zhǎng)特點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1血清學(xué)分型試驗(yàn)和鏡檢結(jié)果 在各平板上挑選可疑菌落接種雙糖管，經(jīng)過37℃培養(yǎng)24h后，做血清學(xué)試驗(yàn)，同時(shí)做革蘭氏染色鏡檢。結(jié)果如下：1#A-F多價(jià)0+++O4+++；2#志賀四種多價(jià)+++福氏志賀氏菌多價(jià)+++福氏志賀氏菌群3.4++；3#A-F多價(jià)++O9+++Hg+++；4#四種多價(jià)+++福氏B群多價(jià)+++福氏3.4群+++福氏1a型+++；5#四種多價(jià)+++宋內(nèi)氏1相+++；6#A-F多價(jià)+++O4+++Hi++++；7#四種多價(jià)++++福氏多價(jià)++++福氏3.4群+++福氏2a++++；8#四種多價(jià)+++鮑氏多價(jià)1-5型+++；9#A-F多價(jià)++（較慢）四種多價(jià)（-）致病性大腸菌多價(jià)（-）大腸艾希氏菌0157（-）大腸艾希氏菌H7（-）。所有可疑菌落的鹽水對(duì)照均未疑集，革蘭氏染色鏡檢均為革蘭氏陰性小桿菌。10#-12#均未做血清疑集。

2.2 H抗原誘導(dǎo)方法和結(jié)果 6#經(jīng)0.8%的半固體瓊脂平板中央，置37℃24h培養(yǎng)后，挑取蔓延生長(zhǎng)的邊緣菌轉(zhuǎn)種三糖鐵斜面，置37℃24h培養(yǎng)后，取菌體作血清學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果H因子血清i及因子血清1.2均出明顯凝集。經(jīng)生化、鏡檢、血清學(xué)及誘導(dǎo)試驗(yàn)，鑒定為鼠傷寒沙門氏菌。

2.3 初步生化 主要做三糖鐵反應(yīng)，乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，進(jìn)一步做生化反應(yīng)。見表1。

2.4結(jié)果報(bào)告 根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)、染色、培養(yǎng)特性、血清學(xué)試驗(yàn)、生化反應(yīng)等，綜合鑒定分別為：1#沙門氏菌屬04群（乙型副傷寒沙門氏菌）；2#志賀氏菌（福氏志賀氏菌群3.4）；3#腸炎沙門氏菌；4#福氏志賀氏菌1a；5#宋內(nèi)氏1相；6#鼠傷寒沙門氏菌；7#福氏志賀氏菌2a；8#鮑氏志賀氏菌1-5型；9#嗜水氣單胞菌；10#銅綠假單胞菌；11#金黃色葡萄球菌；12#蠟樣芽胞桿菌。

3 討論

要想保證檢驗(yàn)質(zhì)量，就必須嚴(yán)格控制控試劑與培養(yǎng)基的質(zhì)量?？梢缘贸鲆韵陆Y(jié)論。①一定要嚴(yán)格把握進(jìn)貸關(guān)，購(gòu)買物品要保證其質(zhì)量合格，使用前觀察其是否在保質(zhì)期內(nèi)，培養(yǎng)基的質(zhì)量是否較高；②在進(jìn)行配制時(shí)，一定要根據(jù)操作手冊(cè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，當(dāng)在進(jìn)行操作時(shí)，嚴(yán)格按照GB4789.28-2013的規(guī)則進(jìn)行，在一段時(shí)期內(nèi)，為保證物品的有效性，需要進(jìn)行質(zhì)量檢查操作；③在日常對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行保存時(shí)，一定要在干燥陰涼部位進(jìn)行保存，為了有效降低陽光直射后導(dǎo)致培養(yǎng)基質(zhì)量下降，需要使用遮光處置。對(duì)應(yīng)的，我們總結(jié)出使用盲樣方式進(jìn)行考核的技巧包括：對(duì)培養(yǎng)基的顯色情況進(jìn)行選擇，能夠提高檢出率，有效縮短檢出時(shí)間；對(duì)于培養(yǎng)基進(jìn)行有效的選擇，針對(duì)適宜的培養(yǎng)物品選擇有針對(duì)性的培養(yǎng)基，以此來提升培養(yǎng)品質(zhì)。本次研究盲樣檢出：1#沙門氏菌屬O4群；2#志賀氏菌；3#腸炎沙門氏菌；4#福氏志賀氏菌1a；5#宋內(nèi)氏1相；6# 鼠傷寒沙門氏菌；7#福氏志賀氏菌2a；8#鮑氏志賀氏菌1-5型；9#嗜水氣單胞菌；10#銅綠假單胞菌；11#金黃色葡萄球菌；12#蠟樣芽胞桿菌。

綜上，通過參加盲樣考核，可以提升該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)微生物能力，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室管理體系進(jìn)一步完善。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物部分》[S].GB/T4789-94、2003、2012.

[2]《飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》GB/T8538-2008.

[3]肖東樓，楊維中.傷寒、副傷寒防治手冊(cè)[M].第2版.人民衛(wèi)生出版社，2006：41-50.

[4]劉運(yùn)德，主編.微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].北京.人民衛(wèi)生出版社，2008：190-200.

[5]歐修才，沙門氏H抗原誘導(dǎo)方法探討[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2003，19（5）：142.編輯/周蕓霏