快速免疫組化檢測CK5/6在乳腺腫瘤病理診斷中的應(yīng)用價值

判斷肌上皮的存在與否，對乳腺疾病的病理診斷和鑒別診斷具有非常重要的意義[1]。我們發(fā)現(xiàn)有時單純依靠冰凍切片的形態(tài)學難以做出判斷，需要進一步借助免疫組化來協(xié)助診斷。CK5/6的分子量在5400～5600，在乳腺腺管的中間腺細胞、定向干細胞和中間肌細胞的胞漿中清晰表達[2]。本課題繼續(xù)探討在乳腺腫瘤術(shù)中快速應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測CK5/6對冰凍診斷的價值，旨在乳腺腫瘤術(shù)中提供較為準確的檢測結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年6月～2015年2月我院病理科22例乳腺腫瘤術(shù)中的冰凍切片，其中浸潤性導(dǎo)管癌7例、導(dǎo)管原位癌3例、導(dǎo)管乳頭狀瘤3例、乳頭狀癌2例及其他良性乳腺腫瘤7例。納入標準為：①閱冰凍HE片后，是否浸潤難以確定；②良惡性難以區(qū)分。

1.2主要試劑 即用型EnVision super非生物素免疫組化檢測試劑盒，鼠抗人CK5/6 單克隆抗體，陽性對照選用邁新公司提供的陽性對照片，陰性對照選用鼠IgG同比稀釋液。

1.3方法

1.3.1常規(guī)免疫組化檢測技術(shù) ①石蠟切片65℃烘箱2h后，常規(guī)脫蠟水洗；②高溫高壓修復(fù)，PBS 清洗3min×3次；③除去PBS液，置放在4℃冰箱，滴加一抗后PBS清洗3min×3次，滴加二抗后存放在室溫下孵育30min；④除去PBS液，DAB顯色，高倍鏡下觀察；⑤自來水沖洗后進行蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明及中性樹膠封固。

1.3.2快速免疫組化檢測技術(shù) ①冰凍切片甲醇固定20s后迅速入PBS清洗3次；②滴加一抗37℃孵育10min后再予PBS清洗20s 3次；③二抗37℃孵5min后予PBS清洗20s 3次；④DAB顯色，蘇木素復(fù)染10s，常規(guī)脫水封片。

1.4 判斷結(jié)果 將陽性細胞按其數(shù)量及染色強度分為3級，按陽性細胞所占比例及分布情況記錄如下：陽性細胞數(shù)<5%記為陰性（-）；陽性細胞數(shù)為5%～24%記為弱陽性（±～+）；陽性細胞數(shù)為25%～50%記為陽性（++）；陽性細胞數(shù)>50%記為強陽性（+++）。

1.5統(tǒng)計學處理 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

22例乳腺腫瘤患者的術(shù)中冰凍切片行快速EnVision免疫組化法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無明顯的信號染色干擾背景，兩種免疫組化檢測技術(shù)診斷結(jié)果符合率高但清晰度及步驟優(yōu)于組織切片常規(guī)免疫組化染色，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

3 討論

大部分乳腺腫瘤的腺泡周圍有功能性血管纖維結(jié)締組織，乳腺整個腺管系統(tǒng)均被覆有腺上皮和肌細胞兩層細胞。腺泡在病變情況下，細胞形態(tài)及成分比例的變化，不同病變其免疫組化表型也各有不同，特別是判斷肌上皮的存在與否對乳腺疾病的病理診斷和鑒別診斷是非常重要的[3]。但在HE切片上，是很難對此做出判斷的。在乳腺腺管的中間腺細胞、定向干細胞和中間肌細胞中表達CK5/6，其中85%～98%普通導(dǎo)管增生CK5/6強陽性，而導(dǎo)管原位癌和不典型導(dǎo)管增生中的表達明顯減少，可作為導(dǎo)管原位癌和小葉原位癌，普通導(dǎo)管/小葉增生鑒別的有用標記物[4，5]?？焖倜庖呓M化法與常規(guī)法相比，步驟相應(yīng)縮短。此外，因抗原非常新鮮，與一抗二抗結(jié)合的時間縮短，也不易發(fā)生抗原丟失的現(xiàn)象，對實驗結(jié)果不會產(chǎn)生影響。本研究發(fā)現(xiàn)，快速EnVision免疫組化法檢測CK5/6在乳腺腫瘤中的表達結(jié)果與常規(guī)免疫組化相比，病理診斷結(jié)果相符率較高。22例乳腺腫瘤患者的冰凍切片中，除1例導(dǎo)管原位癌的CK5/6的表達EnVision快速法為陰性但常規(guī)法為陽性外，其余診斷結(jié)果均基本相符。筆者分析可能是由于連續(xù)切片后，只選一片組織做檢查出現(xiàn)無所測抗原或者是個別組織對抗體的表達差異而造成的。

病理診斷醫(yī)師在巨檢的時候，憑經(jīng)驗認為僅憑閱冰凍HE片可能難以區(qū)別良惡性，往往需要借助免疫組化結(jié)果來診斷，常規(guī)冰凍切片可以和快速免疫組化同步進行，不影響冰凍診斷的出報告時間。在閱冰凍HE片后，需要借助免疫組化結(jié)果來診斷的可以進行快速免疫組化法，能起到明確診斷的關(guān)鍵作用。

綜上所述，筆者認為應(yīng)用快速EnVision免疫組化法檢測乳腺術(shù)中冰凍標本中CK5/6的表達情況，速度快且準確率高，對病理醫(yī)生診斷所測乳腺標本的病理學類型發(fā)揮重要作用，并為臨床醫(yī)生決定手術(shù)方法和范圍提供有效幫助。

參考文獻：

[1] 吳秉銓， 劉彥仿. 免疫組織化學病理診斷[M]. 北京科學技術(shù)出版社， 2007： 9.

[2] 何沁， 徐華. 乳腺腫瘤冷凍切片診斷中快速EnVision 技術(shù)的價值[J]. 臨床與實驗病理學雜志， 2014， 23 （5）： 553-556.

[3] Moriya T， Kozuka Y. The role of immunohistochemistry in the differential diagnosis of breast lesions[J]. Pathology， 2009， 41（1）： 68-76.

[4] 陶怡菁， 吳克瑾. 檢測CK5診斷乳腺惡性乳頭狀病變的應(yīng)用[J]. 外科理論與實踐， 2010， l5（5）： 490-493.

[5] Rakha EA， Putti TC. Morphological and immunophenotypic analysis of breast carcinomas with basaland myoepithelial differentiation[J]. J Pathol， 2006， 208（4）： 495-506.編輯/馮焱