p130Cas對(duì)胃癌細(xì)胞AGS增殖和凋亡的影響

p130Cas對(duì)胃癌細(xì)胞AGS增殖和凋亡的影響

李丹丁健1王錦坡吳婷1王小眾

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院消化內(nèi)科，福建福州350001)

摘要〔〕目的探討p130Cas對(duì)胃癌惡性生物學(xué)表型的影響及可能的分子機(jī)制。方法構(gòu)建p130Cas siRNA慢病毒載體、p130Cas過(guò)表達(dá)慢病毒載體和相應(yīng)的對(duì)照載體，轉(zhuǎn)染AGS細(xì)胞株，篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株；RT-PCR及Western印跡證實(shí)載體的有效性；采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)比較慢病毒載體轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖情況；運(yùn)用AnnexinV-PI流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果成功構(gòu)建了p130Cas siRNA慢病毒載體及p130Cas過(guò)表達(dá)慢病毒載體，構(gòu)建的慢病毒載體均能高效率的感染AGS細(xì)胞，感染慢病毒過(guò)表達(dá)載體后細(xì)胞p130Cas mRNA 及蛋白表達(dá)水平明顯升高，感染慢病毒干擾載體后p130Cas mRNA 及蛋白表達(dá)水平顯著降低。p130Cas高表達(dá)細(xì)胞株無(wú)外界刺激時(shí)p130Cas磷酸化水平未發(fā)現(xiàn)有明顯增加(P>0.05)；p130Cas低表達(dá)細(xì)胞株p130Cas磷酸化水平明顯下降(P<0.05)。高表達(dá)p130Cas細(xì)胞的增殖和凋亡無(wú)明顯影響(P>0.05)；低表達(dá)p130Cas組細(xì)胞增殖受到抑制，凋亡率明顯升高(P<0.05)。結(jié)論p130Cas總蛋白及磷酸化表達(dá)水平降低可抑制胃癌細(xì)胞株AGS細(xì)胞增殖，并促進(jìn)AGS細(xì)胞凋亡，但其總蛋白表達(dá)增高對(duì)AGS細(xì)胞的增殖和凋亡無(wú)明顯影響。

關(guān)鍵詞〔〕p130Cas；增殖；細(xì)胞凋亡；胃癌

中圖分類號(hào)〔〕R735.2；R322.4〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目(81300321)；福建省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(2013J01369)； 福建省自然科學(xué)資助項(xiàng)目(2014J01419)；福建省2012臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)?？瀑Y助項(xiàng)目(閩衛(wèi)科教〔2012〕149號(hào))

Effects of p130Cas on the proliferation and apoptosis of gastric cancer cells AGS

LI Dan,DING Jian,WANG Jin-Po,etal.

Department of Digestive Diseases,Union Hospital of Fujian Medical University,Fuzhou 350001,Fujian,China

Abstract【】ObjectiveTo detect the effects of p130Cas on the malignant biological phenotype and possible molecular mechanism.MethodsLentiviruses,produced with the corresponding plasmids and the packaging plasmids,were used to block expression of p130Cas with p130Cas siRNA and to overexpress p130Cas protein in AGS cells respectively.After transfection,the expression level of p130Cas in cell was detected by PCR and Western blot respectively.Proliferation of cell was examined by MTT.Apoptosis was detected by AnnexinV-PI flow cytometry.ResultsThe recombinant lentiviral vectors carrying human p130Cas siRNA and p130Cas gene were constructed and transfected into AGS cells successfully.The expressions of mRNA and p130Cas protein in AGS cells were increased transfected with recombinant lentiviral vector carrying human p130Cas,both mRNA and p130Cas protein were decreased in AGS cells transfected with recombinant lentiviral vector carrying human p130Cas siRNA.Proliferation was suppressed in AGS cells transfected with recombinant lentiviral vector carrying human p130Cas siRNA(P<0.05).However，proliferation maintained without increasing in AGS cells transfected with recombinant lentiviral vector carrying human p130Cas gene(P>0.05).The apoptotic rate was increased in AGS cells transfected with recombinant lentiviral vector carrying human p130Cas siRNA(P<0.05).Nevertheless,overexpression of p130Cas in AGS cells transfected with recombinant lentiviral vector carrying human p130Cas gene had no effect on cell apoptosis(P>0.05).ConclusionsDownregulation of p130Cas inhibits proliferation and promotes apoptosis in gastric cancer cell line AGS.Upregulation of p130Cas has no effect on proliferation and apoptosis of AGS cells,which presents p130Cas is an overexpressed gene in AGS.p130Cas gene plays an important role on proliferation and apoptosis of gastric cancer cell,which makes itself a target for treatment of gastric cancer.

【Key words】p130Cas； Proliferation；Cell apoptosis；Gastric cancer

1福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科

第一作者：李丹(1976-),女,博士，副主任醫(yī)師，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事胃癌致病機(jī)制的研究。

BCAR1/p130Cas定位于16q22-q23染色體，由7個(gè)外顯子組成，參與黏著斑的形成和相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。p130Cas在多種腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡等生物學(xué)行為密切相關(guān)〔1，2〕。本研究旨在了解p130Cas對(duì)胃癌AGS細(xì)胞增殖和凋亡的影響。

1材料與方法

1.1細(xì)胞株和質(zhì)粒載體病毒包裝細(xì)胞293T細(xì)胞及胃癌細(xì)胞系 AGS購(gòu)自ATCC。大腸桿菌DH5α購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因公司，過(guò)表達(dá)慢病毒載體系統(tǒng)pGC-FU載體及RNA干擾慢病毒載體系統(tǒng)均購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因公司，RNA干擾慢病毒載體系統(tǒng)包括pGCSIL-GFP 載體、pHelper 1.0 載體和 pHelper 2.0 載體。

1.2主要試劑M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、Rnase Inhibitor、 dNTPs為美國(guó)promega公司產(chǎn)品； SYBR Master Mixture、DL 2 000 DNA Marker、Taq polymerase、各種內(nèi)切酶、T4DNA ligase 、Taq polymerase等購(gòu)自日本Takara公司；質(zhì)粒提取試劑盒由德國(guó)QIANGEN 公司生產(chǎn)；MTT 試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒(Annexin-V-FITC/PI)、SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒為上海碧云天公司產(chǎn)品；BSA及臺(tái)酚藍(lán)由上海捷倍思基因技術(shù)有限公司生產(chǎn)； ECL-PLUS/Kit由美國(guó)Amersham公司產(chǎn)品； Lipofectamine 2000、Trizol由美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品； AxyPreP Plasmid MiniPrep Kit、Axyprep PCRCleanuP Kit、AxyprepDNA Gel Extraction Kit、AxyPrep Plasmid Miniprep Kit產(chǎn)生美國(guó)Axygen公司；胎牛血清、RPMI1640培養(yǎng)基、Opti-MEM、 DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)GIBCO公司；抗p130Cas和抗p130Cas磷酸化抗體為英國(guó)Abcam公司生產(chǎn)； NC膜、ECL試劑盒由美國(guó)millpore 公司提供。

1.3方法

1.3.1細(xì)胞培養(yǎng)和處理AGS細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于RPMI 1640培養(yǎng)液含10%胎牛血清、鏈霉素(100 μg/ml)和青霉素(100 μg/ml)，于5%CO2、37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，3到4 d傳代。

1.3.2Real-time PCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞系p130Cas基因表達(dá)Trizol法提取胃癌細(xì)胞SGC-7901，H1299， MKN45，AGS的總RNA，紫外分析測(cè)定所抽提RNA的濃度，RNA 逆轉(zhuǎn)錄獲得 cDNA ，Real-time PCR 法檢測(cè) p130Cas基因表達(dá)。

1.3.3p130Cas siRNA慢病毒載體的構(gòu)建設(shè)計(jì)的siRNA序列信息為：CCTTGCAGTACCCATCGCCTT。復(fù)蘇并擴(kuò)增DH5α菌種(含有pGCSIL-GFP質(zhì)粒)，抽提pGCSIL-GFP質(zhì)粒，以EcoRI對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切后回收酶切產(chǎn)物，利用T4 DNA連接酶將線性化的pGCSIL-GFP載體和目的基因p130Cas在連接緩沖液中16℃過(guò)夜連接。以氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，重組載體的轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。由上海吉?jiǎng)P基因公司對(duì)重組siRNA-p130Cas慢病毒載體進(jìn)行測(cè)序及比較。將重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后收獲病毒并測(cè)定病毒滴度。

1.3.4p130Cas 過(guò)表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建設(shè)計(jì)合成如下引物：p130Cas (正義)：5'-gaattcatgcctgccaagcccttcct-3 '，p130Cas(反義)：5'- ggatcctcaggcggctgccagctggc-3 '復(fù)蘇并擴(kuò)增DH5α菌種(含有pGC-FU質(zhì)粒)，抽提pGC-FU質(zhì)粒，以Age I 和 BamH I對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切后回收酶切產(chǎn)物，連接后重組載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，同上步驟測(cè)序及進(jìn)行病毒包裝。

1.3.5重組慢病毒載體感染AGS細(xì)胞和獲取穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的AGS細(xì)胞，按每孔2×105個(gè)細(xì)胞鋪入24孔板，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱過(guò)夜，第2天細(xì)胞約為密度約50%。取包裝好的慢病毒p130Cas siRNA載體， p130Cas過(guò)表達(dá)載體及相應(yīng)的對(duì)照載體，置于冰上融化，除去AGS細(xì)胞的培養(yǎng)液，加入稀釋混勻的病毒液，上下左右輕輕搖勻，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng) 8～12 h，移除含病毒的培養(yǎng)液，更換含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3 d，利用熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)情況結(jié)合流式分選獲得穩(wěn)定感染細(xì)胞株。

1.3.6逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染細(xì)胞系p130Cas基因表達(dá)抽提各轉(zhuǎn)染細(xì)胞組的質(zhì)粒進(jìn)行PCR反應(yīng)，循環(huán)參數(shù)為94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，56℃退火45 s，72℃延伸1 min，共25～35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7 min。 取8 μl PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，紫外光下自顯影，經(jīng)計(jì)算機(jī)掃描成像。

1.3.7細(xì)胞總蛋白提取胰酶消化收集各轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組細(xì)胞，加入混有PMSF的RIPA細(xì)胞裂解液，于冰上利用超聲儀超聲裂解細(xì)胞，4℃，12 000 r/min離心5 min，轉(zhuǎn)移上清至新的EP管，采用Bradford法測(cè)定目的蛋白濃度。

1.3.8Western印跡檢測(cè)各組細(xì)胞 p130Cas蛋白水平各組取80 μg總蛋白量的樣品液，聚丙烯酰胺凝膠電泳后經(jīng)硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移，將膜在含10%脫脂奶粉TBS中封閉2 h后，與p130Cas單克隆抗體中4℃孵育過(guò)夜，洗滌后再與相應(yīng)的二抗室溫下作用1 h，經(jīng)ECL底物化學(xué)發(fā)光顯影，掃描為圖片，經(jīng)Image J軟件測(cè)量膠片中條帶灰度值。

1.3.9Western印跡檢測(cè)各組細(xì)胞p130Cas磷酸化水平各組取80 μg總蛋白量的樣品液，電泳后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，封閉后與抗p130Cas磷酸化抗體4℃孵育過(guò)夜，洗滌后再與相應(yīng)二抗室溫下作用1 h，發(fā)光顯影后測(cè)量膠片中條帶灰度值。

1.3.10四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力MTT粉溶解于PBS緩沖液配制成MTT工作液，濃度為5 mg/ml，4℃避光保存。 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的穩(wěn)定感染p130Cas siRNA和過(guò)表達(dá)p130Cas的AGS細(xì)胞及對(duì)照組細(xì)胞，胰酶消化重懸為單個(gè)細(xì)胞懸液，接種7塊96孔板，每孔細(xì)胞數(shù)為 2 000個(gè)，每孔體積200 μl，每孔設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)3 d后取出96孔板，每孔加入20 μl MTT工作液溶液，二氧化碳孵育箱培養(yǎng)4 h，吸去培養(yǎng)上清液，每孔加入DMSO 150 μl，振蕩10 min，將 96孔板放入酶聯(lián)免疫讀數(shù)儀，595 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定各孔的吸光度，其中設(shè)置只加培養(yǎng)液的孔作為空白對(duì)照孔，計(jì)算各組的平均吸光度(OD)值。

1.3.11流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡狀況采用 AnnexinV-PI 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的穩(wěn)定感染p130Cas siRNA和過(guò)表達(dá)p130Cas的AGS細(xì)胞及對(duì)照組細(xì)胞于離心管中，每樣本細(xì)胞數(shù)為(1～5)×106/ml，500～1 000 r/min離心5 min，棄去培養(yǎng)液,孵育緩沖液洗滌1次,離心后用標(biāo)記溶液重懸細(xì)胞，室溫下避光孵育10～15 min，離心5 min后沉淀細(xì)胞用孵育緩沖液洗1次，加入熒光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20 min，流式細(xì)胞儀分析(流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長(zhǎng)用488 nm，用一波長(zhǎng)為515 nm的通帶濾器檢測(cè)FITC熒光，另一波長(zhǎng)大于560 nm的濾器檢測(cè)PI)。結(jié)果判斷：在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，左下象限顯示活細(xì)胞，為(FITC-/PI-)；右上象限是非活細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，為(FITC+/PI+)；而右下象限為凋亡細(xì)胞，顯現(xiàn)(FITC+/PI-)。

1.4統(tǒng)計(jì)分析處理使用SPSS17.0軟件行t或χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1p130Cas在各胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)為檢測(cè)p130Cas是否在胃癌細(xì)胞株中普遍表達(dá)，首先在胃癌細(xì)胞系SGC-7901，H1299， MKN45，AGS中利用Real-time PCR檢測(cè)p130Cas的表達(dá)情況，對(duì)照GAPDH和BCAR1基因表達(dá)引物采用軟件Beacon designer 2設(shè)計(jì)。SGC-7901，H1299， MKN45，AGS細(xì)胞均高表達(dá)BCAR1/p130Cas基因表達(dá)豐度能滿足檢測(cè)實(shí)驗(yàn)要求，本實(shí)驗(yàn)選取AGS細(xì)胞為研究對(duì)象。見圖1。

1：SGC-7901 2：H1299 3：MKN45 4：AGS M：DNA Marker DL1 000 內(nèi)參擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖 圖1　P130Cas在各胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)

2.2p130Cas siRNA慢病毒載體的鑒定

2.2.1pGCSIL-GFP載體的酶切鑒定使用EcoRI對(duì)pGCSIL-GFP載體進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果。見圖2。

1.未酶切的載體質(zhì)粒；2、3、4:EooRI酶切線性化后的載體質(zhì)粒；5.Marker 圖2　pGCSIL-GFP載體酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果

2.2.2p130Cas siRNA慢病毒載體的測(cè)序鑒定 設(shè)計(jì)的p130Cas siRNA慢病毒載體經(jīng)上海吉?jiǎng)P公司測(cè)序鑒定，經(jīng)驗(yàn)證siRNA插入正確， siRNA慢病毒載體構(gòu)建成功。

2.3p130Cas過(guò)表達(dá)慢病毒載體的鑒定

2.3.1pGC-Fu載體的酶切鑒定使用Age I和 BamH I對(duì)pGC-Fu載體進(jìn)行雙酶切。酶切產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果。見圖3。

1.沒(méi)有酶切的載體質(zhì)粒；2.AgeⅠ和BamHⅠ酶切線性化后的載體質(zhì)粒；3.Marker 圖3　pGC-Fu載體酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果

2.3.2p130Cas過(guò)表達(dá)慢病毒載體的測(cè)序鑒定 設(shè)計(jì)的p130Cas慢病毒載體經(jīng)上海吉?jiǎng)P公司測(cè)序鑒定，經(jīng)驗(yàn)證p130Cas插入正確，慢病毒過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建成功。

2.4PCR檢測(cè)慢病毒載體轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞p130Cas表達(dá)情況p130Cas慢病毒過(guò)表達(dá)載體及慢病毒siRNA載體分別感染胃癌AGS細(xì)胞,半定量PCR檢測(cè)p130Cas表達(dá)結(jié)果提示轉(zhuǎn)染慢病毒過(guò)表達(dá)組p130Cas表達(dá)明顯增高，感染慢病毒siRNA載體組p130Cas基因表達(dá)明顯受到抑制，見圖4。

2.5各細(xì)胞組中總p130Cas的表達(dá)情況及磷酸化水平檢測(cè)與對(duì)照組及空載體組相比，慢病毒過(guò)表達(dá)載體組p130Cas表達(dá)量明顯增加(P<0.05)；而慢病毒siRNA載體組p130Cas表達(dá)量與其對(duì)照組和空載體組比較顯著下降(P<0.05)。同時(shí)為了明確細(xì)胞體外的磷酸化水平，Western印跡法檢測(cè)在未添加任何刺激物情況下的各組細(xì)胞p130Cas蛋白的磷酸化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在未添加刺激物的情況下體外細(xì)胞AGS細(xì)胞、NCRNAi組及NC過(guò)表達(dá)組即可檢測(cè)到p130Cas磷酸化，三者兩兩之間無(wú)差異(P>0.05)；與對(duì)照組及空載體組相比，轉(zhuǎn)染siRNA載體組的胃癌細(xì)胞中p130Cas磷酸化水平下降(P<0.05)；而轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)載體組與對(duì)照組和空載體組相比，胃癌細(xì)胞中p130Cas磷酸化水平無(wú)變化(P>0.05)，見圖5。

2.6p130Cas 的表達(dá)對(duì) AGS細(xì)胞體外增殖能力的影響p130Cas過(guò)表達(dá)組與其對(duì)照組和空載體組間分別比較均無(wú)差異(0.353±0.075、0.374±0.045、0.401±0.026,P>0.05)；p130Cas siRNA組(0.233±0.055)與其對(duì)照(0.386±0.065)及空載體組間分別比較兩者的差異顯著(P<0.05)。

2.7p130Cas 的表達(dá)對(duì)AGS細(xì)胞凋亡的影響與空載體組及NCRNAi轉(zhuǎn)染的AGS細(xì)胞相比，利用p130Cas siRNA載體下調(diào)p130Cas基因表達(dá)后，AGS細(xì)胞凋亡率增加，達(dá)到49.78%(P<0.05)；上調(diào)胃癌細(xì)胞株AGS細(xì)胞p130Cas基因表達(dá)后，AGS細(xì)胞凋亡與其對(duì)照組及空載體組相比較無(wú)差異(P>0.05)。

1.marker;2.p130cas過(guò)表達(dá)組;3.NC表達(dá)組;4.p130cas阻斷組;5.NCRNAI組;6.AGS細(xì)胞組 圖4　PCR檢測(cè)慢病毒載體轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞 p130Cas表達(dá)情況

1～5：p130Cas阻斷組、NC RNA組、p130Cas過(guò)表達(dá)組、NC過(guò)表達(dá)組、AGS細(xì)胞組 圖5　Western印跡檢測(cè)各細(xì)胞組p130Cas蛋白 表達(dá)及磷酸化水平變化

3討論

本研究結(jié)果提示p130Cas的表達(dá)可能在胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能中發(fā)揮重大作用。在此基礎(chǔ)之上本實(shí)驗(yàn)分別成功構(gòu)建了p130Cas慢病毒干擾載體和過(guò)表達(dá)載體及相應(yīng)的對(duì)照載體，在證實(shí)慢病毒載體構(gòu)建成功之后，分別用上述病毒載體感染AGS細(xì)胞，篩選出穩(wěn)定感染的細(xì)胞株。

本研究提示阻斷p130Cas表達(dá)和活化可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖。阻斷p130Cas可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。

本研究結(jié)果與既往研究并不矛盾，Cabodi等〔3〕通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，p130Cas過(guò)表達(dá)可促進(jìn)乳腺上皮廣泛增生，只有磷酸化的p130Cas才能激活小GTPases Ras和Rac，使下游的JNK和Erk1/2-MAPK激活〔4〕，最后形成的AP-1轉(zhuǎn)錄激活子能夠提高特定靶基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖〔5〕。本研究提示在體外未添加刺激物情況下胃癌細(xì)胞p130Cas即有多量磷酸化，屬于過(guò)表達(dá)的分子，這可能與整合素活化、生長(zhǎng)因子刺激、G蛋白耦聯(lián)受體的肽激素配體、機(jī)械牽張等多種原因誘導(dǎo)p130Cas磷酸化有關(guān)，并導(dǎo)致p130Cas磷酸化程度在細(xì)胞中呈現(xiàn)飽和狀態(tài)，這解釋了MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示的p130Cas高表達(dá)組未能促進(jìn)細(xì)胞增殖的原因。同樣，目前大部分研究證實(shí)p130Cas有抗凋亡作用〔6〕。最近一項(xiàng)研究顯示野生型p130Cas的過(guò)表達(dá)在凋亡中起保護(hù)細(xì)胞的作用〔7〕，而抑制p130Cas表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Ta等〔8〕研究表明p130Cas過(guò)表達(dá)事實(shí)上對(duì)促凋亡刺激來(lái)說(shuō)是個(gè)障礙。結(jié)合本研究結(jié)果證實(shí)胃癌p130Cas自身磷酸化水平呈現(xiàn)“過(guò)表達(dá)”的飽和狀態(tài)，發(fā)揮著重要的抗凋亡作用。

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〔2015-04-18修回〕

(編輯李相軍)